Czy program korekty niskiego poziomu witaminy D w okresie niemowlęcym może przyczynić się do szczuplejszej budowy ciała?

Zbadane zostaną noworodki ze szpitali w aglomeracji Montrealu. Noworodki będą badane pod kątem niskiego poziomu witaminy D w ciągu 48 godzin po urodzeniu pod kątem 25(OH)D, aby umożliwić szybkie włączenie do grup badawczych. Osoby ze stężeniem 25(OH)D w surowicy <50 nmol/l zostaną losowo przydzielone do grup otrzymujących 400 lub 1000 IU/d do 1 roku życia. Osoby z 25(OH)D >50 nmol/L otrzymają standardową opiekę (400 IU/d) i utworzą grupę referencyjną.

Okres leczenia: Próba trwa od 1 tygodnia do 12 miesiąca życia; obserwacja do 3 roku życia.

Częstotliwość i czas trwania obserwacji: 1 tydzień (linia wyjściowa), wiek 3, 6 i 12 miesięcy do badania; następnie w wieku 2 i 3 lat do obserwacji.

Na początku (1 tyg.), w wieku 3, 6, 12, 24 i 36 miesięcy, niemowlęta będą przyjmowane w naszej jednostce badawczej w celu wykonania pomiarów antropometrycznych, składu ciała i kości, a także pobrania krwi, pigmentacji skóry i badania diety, aktywność i informacje demograficzne.

Antropometria - Wszystkie pomiary w niemowlęctwie zostaną wykonane nago, a przez 24 do 36 miesięcy dziecko będzie miało na sobie znormalizowaną lekką odzież, suchą pieluchę i bez butów. Ważenie będzie mierzone przy użyciu wagi elektronicznej z dynamicznym programem ważenia (Mettler-Toledo Inc., Szwajcaria). Długość (0,1 cm) będzie mierzona za pomocą infantometru do 24 miesiąca życia (O'Learly Length Boards, Ellard Instrumentation Ltd., USA), a wzrost w wieku 36 miesięcy będzie mierzony za pomocą stadiometru (Seca Medical Scales and Measuring Systems, USA) ). Obwód głowy zostanie zmierzony (0,1 cm) za pomocą nierozciągliwej taśmy (Perspective Enterprises, USA) w celu uzupełnienia panelu antropometrycznego. Odleżyny typu Z uwzględniające wagę, wzrost i wiek oraz BMI względem wieku zostaną obliczone przy użyciu oprogramowania WHO (WHO AnthroPlus, Szwajcaria). Waga i wzrost matki będą mierzone podczas karmienia piersią, w standardowym ubraniu przy użyciu skalibrowanej wagi z równoważnią (Detecto, Webb City, MO, USA) i stadiometru ściennego (Seca model 226; nowy producent Ayrton226 Hite- Rite Precision Mechanical Stadiometer) do obliczania BMI.

Pomiary składu ciała — skład ciała zostanie oceniony za pomocą DXA z wiązką wachlarzową (APEX wersja 13,3:3, Hologic 4500A Discovery Series, Bedford, MA). Każde niemowlę będzie miało na sobie lekki śpiwór bez metalowych lub plastikowych elementów oraz pieluchę i zostanie zeskanowane za pomocą oprogramowania całego ciała niemowlęcia; w wieku 24 i 36 miesięcy zostanie noszona znormalizowana lekka odzież, a skany zostaną wykonane za pomocą oprogramowania całego ciała. Skany całego ciała zapewniają beztłuszczową masę ciała (g i % masy), masę tłuszczu (g i %), BMC i BMD. Kręgi lędźwiowe 1-4 oraz BMC i BMD przedramienia zostaną zarejestrowane. Skład ciała matki zostanie zmierzony podczas karmienia piersią, przy użyciu BIA (tetrapolarna stopa-stopa Tanita TBF-310, Tanita Corp., Tokio, Japonia) jako szybkiej oceny.

Pomiary biochemiczne — Próbki krwi włośniczkowej (0,5 ml) zostaną pobrane podczas badania przesiewowego; ale pobieranie próbek żylnych (1,0 ml: daje ~500-600 μl surowicy) stosowane później; próbki będą odwirowywane (2235 x g przez 20 min w 4°C) w celu uzyskania surowicy (do celów biochemicznych) i kożuszka leukocytarnego (białe krwinki do oznaczania DNA) i będą przechowywane zamrożone w temperaturze -80°C do czasu analizy. Jedna próbka 5 ml zostanie pobrana od rodziców na początku badania (na czczo) do pomiaru 25(OH)D w surowicy i kożuszka leukocytarnego zachowana do przyszłych prac epigenetycznych. W przypadku badań przesiewowych niemowląt i surowicy matki całkowite 25(OH)D zostanie zmierzone przy użyciu dedykowanego automatycznego analizatora w laboratorium PI (25 μl; 150 μl odzyskanej „objętości martwej”, Liaison Diasorin Inc.); ten test będzie również używany do oceny bezpieczeństwa po 3 i 6 miesiącach, ale nie powinien być używany do analizy wyników danych z badania, ponieważ nie wychwytuje wszystkich metabolitów. Tandemowa spektrometria mas z chromatografią cieczową (LC-MS/MS firmy Dr. Jones', Queen's Univ.) zostanie wykorzystana do pomiaru 25(OH)D3, 3-epi-25(OH)D3 i 24,25(OH) 2D dla wszystkich punktów czasowych od linii podstawowej do 36 miesięcy. Ponadto 1,25(OH)2D (100 μl surowicy) zostanie zmierzone w podobny sposób przy użyciu dostosowanej metody LC-MS/MS. Oba laboratoria są certyfikowane przez program zewnętrznej oceny jakości witaminy D i będą nadal uczestniczyć w programie zapewniania jakości Narodowego Instytutu Standardów i Technologii. Zjonizowany wapń we krwi zostanie zmierzony natychmiast za pomocą naszego przenośnego urządzenia (ABL80 FLEX Radiometer Medical A/S, Dania) i porównany z opublikowanymi standardami (90). Pozostała próbka zostanie użyta do IGF-1 (20 μl) przy użyciu Liaison (Diasorin Inc.); PTH (25 μl; Immutopics Inc nr kat. 60-3100) i IGFBP3 (20 μl; R&D Systems nr kat. SGB300) będą mierzone metodą ELISA. Próbka dla IGFBP3 zostanie przed przechowywaniem poddana wstępnej obróbce inhibitorami proteazy. Całkowity poziom wapnia i fosforanów w osoczu (150 μl) oraz wapń i fosforany w moczu:kreatynina będą mierzone w próbce punktowej pobieranej podczas każdej wizyty podczas badania; Analizator automatyczny Beckman Coulter UniCel DxC600. Pozostałą próbkę zarezerwujemy do późniejszego pomiaru C-telepeptydu, propeptydu kolagenu typu 1 (P1NP) jako biomarkerów związanych z kością.

Ankiety demograficzne, żywieniowe i dotyczące aktywności — podczas badania przesiewowego/wyjściowego rodzice zostaną poproszeni o wypełnienie ankiety demograficznej dotyczącej ich antropometrii, pochodzenia etnicznego i rasy, dochodów i wykształcenia przy użyciu tych samych deskryptorów, które zostały określone przez Statistics Canada. Spożycie pokarmu przez niemowlęta w okresie badania zostanie ocenione na podstawie 3-dniowych zapisów diety wypełnianych przez rodziców po każdej wizycie. Gdy niemowlęta są karmione piersią, spożycie mleka będzie oceniane przez testowe ważenie niemowlęcia przed i po karmieniu piersią przez okres 24 godzin przy użyciu przenośnej wagi elektronicznej (Tanita Corporation Inc., USA). Zapewni to spożycie składników odżywczych, które pomogą wyjaśnić wzrost. Spożycie z innych produktów żywnościowych jest dokumentowane za pomocą domowych pomiarów i rejestrowane w 3-dniowym zapisie. Wszystkie analizy składników odżywczych zostaną przeprowadzone przy użyciu oprogramowania Nutritionist Pro w wersji 4.7.0 (Axxya Systems LLC, Stafford, TX) i najnowszej kanadyjskiej bazy danych Nutrient File (Health Canada). W wieku 2 i 3 lat rodzice wypełniają Kwestionariusz Skali Oszacowania Aktywności Nawykowej (HAES) w dni powszednie (wtorek, środa lub czwartek) i w weekend (sobota) w ciągu ostatnich 2 tygodni. Rodzice dzielą dzień dziecka na 4 segmenty (pobudka do śniadania, śniadanie do obiadu, obiad do kolacji, kolacja do snu). Dla każdego przedziału czasowego % czasu spędzonego na każdym poziomie aktywności służy do oszacowania ogólnego poziomu aktywności fizycznej. Cztery poziomy aktywności określone w kwestionariuszu HAES to: „nieaktywny” (leżenie, spanie, odpoczynek), „nieco nieaktywny” (siedzenie, oglądanie telewizji, czynności wykonywane głównie w pozycji siedzącej), „nieco aktywny” (chodzenie, zabawa z zabawki) i „bardzo aktywne” (czynności, które sprawiają, że dziecko „ciężko oddycha i poci się”, jak bieganie i skakanie).

Pigmentacja skóry i ekspozycja na promieniowanie UVB — Kolor (rodzaj) skóry niemowlęcia zostanie ustalony poprzez wykonanie średniej z trzech pomiarów w każdym miejscu pod kątem konstytutywnej pigmentacji na wewnętrznej stronie ramienia i fakultatywnej pigmentacji (ekspozycja na promieniowanie UVB) na czole, przedramieniu i dolnej części nogi za pomocą spektrofotometru (CM-700d/600d, Konica Minolta, USA). Indywidualny kąt typologiczny (ITAo) zostanie obliczony z wartości L* i b*. Stosując konstytutywną pigmentację, niemowlęta zostaną podzielone na typy skóry (I-III: biała; IV-VI: inna niż biała) na podstawie opisów Fitzpatricka. Zbadane zostaną również nasłonecznienie, podróże zimą i stosowanie kremów przeciwsłonecznych. Ekspozycja na słońce jest wyrażona jako procent eksponowanej powierzchni ciała (BSA), a następnie wskaźnik nasłonecznienia obliczany dla każdego dziecka poprzez pomnożenie procentowej ekspozycji na BSA przez czas spędzony na zewnątrz (min/d); ten indeks nie obejmuje blokad przeciwsłonecznych.