Wpływ leczenia periodontologicznego na poziomy hepcydyny i hemoglobiny w surowicy

Przeprowadzono nierandomizowane badanie interwencyjne od kwietnia do października 2013 r. na osobach z klinik periodontologicznych Uniwersytetu Federalnego stanu Maranhão w São Luís w Brazylii. Próba została wybrana spośród łącznie 125 osób, zgodnie z kryteriami kwalifikacyjnymi. Utworzono dwie grupy: grupę eksperymentalną (33 osoby) zdrowych pacjentów z wyjątkiem obecności przewlekłego zapalenia przyzębia w zaawansowanym stadium oraz grupę kontrolną (30 osób) pacjentów bez choroby ogólnoustrojowej potwierdzonej badaniem fizykalnym i biochemicznym oraz bez przewlekłego zapalenia przyzębia.

Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki ds. Badań na Ludziach Federalnego Uniwersytetu Maranhão, São Luís, MA, Brazylia, pod numerem protokołu 23115-010215 / 2011-16. Wszyscy uczestnicy podpisali formularz zgody.

Liczebność próby określono na podstawie wcześniejszych badań dotyczących związku między przewlekłym zapaleniem przyzębia a ogólnoustrojowymi markerami stanu zapalnego.

Wszyscy uczestnicy otrzymali zestaw do higieny jamy ustnej, wzięli udział w przemówieniu motywacyjnym z instrukcjami dotyczącymi szczotkowania i nitkowania zębów, a następnie zostali skierowani na opiekę dentystyczną.

Na pierwszej wizycie dokonano sprawdzenia dokumentacji medycznej pod kątem wyselekcjonowania ochotników bez wcześniej rozpoznanych chorób ogólnoustrojowych, dodatkowo wykonano badanie ogólne i periodontologiczne, założono kolektor moczu oraz podano lek [Albendazol 400 mg jednorazowo]. Po 15 dniach osoby spełniające wstępne kryteria selekcji skierowano na pobranie krwi i moczu w celu oceny markerów biochemicznych. Zgodnie z wynikami badań laboratoryjnych badani byli podtrzymywani lub wykluczani po weryfikacji osób, u których zdiagnozowano choroby ogólnoustrojowe, wcześniej niezidentyfikowane.

Wywiad lekarski i badanie periodontologiczne przeprowadzał jeden przeszkolony lekarz. Zbierano aktualny i przeszły wywiad lekarski i dentystyczny, wywiad rodzinny, dane społeczne, przyjmowane leki, możliwe zmiany krwawienia miesiączkowego, pomiary ciśnienia krwi, masę ciała, wzrost, i wskaźnik masy ciała.

Przeprowadzono również badanie kliniczne jamy ustnej w celu zdiagnozowania stanu przyzębia uczestników. Następnie kierowano ich na leczenie stomatologiczne, zgodnie z ich potrzebami leczniczymi.

Po zastosowanej terapii przeprowadzono nowe badanie kliniczne stanu jamy ustnej wszystkich uczestników 90 dni po leczeniu. W tym samym okresie wykonano nowe pobranie krwi w celu ponownej oceny markerów biochemicznych.

W klinicznym badaniu periodontologicznym zastosowano sondę periodontologiczną typu Williams w sześciu miejscach na ząb (przyśrodkowo-policzkowy, środkowo-policzkowy, przedsionkowo-językowy, średnio-językowy, mezjalno-językowy), wykonywane przez jednego obserwatora, chirurga stomatologa, specjalistę periodontologa i wcześniej przeszkolonego . Współczynnik zgodności wewnątrz badającego wyniósł 0,81 dla głębokości sondowania i 0,77 dla klinicznego poziomu przywiązania. Oceniano następujące parametry kliniczne: głębokość sondowania (PD), recesję dziąsła (GR), poziom przyczepu klinicznego (CAL), wskaźnik widocznej płytki nazębnej (VPI), krwawienie podczas sondowania (BOP). To samo badanie wyjściowe powtórzono 90 dni po pierwszym badaniu i obejmowało te same kliniczne parametry przyzębia.

U osób, u których co najmniej dwa zęby miały głębokość zgłębnika ≥ 5 mm i kliniczny poziom przyczepu ≥ 6 mm, związany z obecnością krwawienia przy sondowaniu w tym samym miejscu, 30 sekund po wprowadzeniu pierwszej sondy, rozpoznawano zapalenie przyzębia.

Próbki krwi (20 ml) zebrano do probówek z kwasem etylenodiaminotetraoctowym (EDTA) po 12 godzinach na czczo. Resztę krwi antykoagulowanej EDTA wirowano przez 10 minut przy 3000 obrotów na minutę w celu oddzielenia osocza, podzielono na porcje i przechowywano w temperaturze -70°C do dalszej analizy stężeń IL-6.

Wykonano następujące badania laboratoryjne: cholesterol całkowity, glukoza na czczo, trójglicerydy, albuminy, transaminaza glutaminianowo-szczawianowa, kreatynina, kwas moczowy, szybkość opadania krwinek czerwonych (OB), CRP, IL-6, hepcydyna, żelazo w surowicy, ferrytyna, wysycenie transferyny, krew parametry (hemoglobina, hematokryt, średnia objętość krwinki - MCV, MCH) oraz analiza moczu pod kątem nieprawidłowych pierwiastków i osadu (EAS).

Surowicę otrzymano przez dodanie krwi żylnej do probówki zawierającej aktywator krzepnięcia. Po wirowaniu przez 15 minut przy 1800 obrotach na minutę surowicę oddzielono. Surowicę podzielono na porcje do kolorymetrycznej oceny ferrytyny techniką chemiluminescencyjną; technika żelazem w surowicy i ferrozyną oraz wskaźnik wysycenia transferyny, zmodyfikowana technika Goodwina. Nefelometrię stosowano do oznaczania dawek białka C-reaktywnego, a surowicę przechowywano w temperaturze -70°C, pozostając do analizy hepcydyny.

IL-6 i hepcydynę oceniano techniką testu immunologicznego z użyciem zestawu ELISA, zgodnie z zaleceniami producenta. Odczytów dokonywano za pomocą automatycznego czytnika mikropłytek, a absorbancję odczytywano przy długości fali 450 nm w spektrofotometrze.

Do analizy statystycznej badacze wykorzystali oprogramowanie statystyczne. Początkowo przeprowadzono analizę opisową za pomocą miar częstości, średniej i odchylenia standardowego, mediany i rozstępu międzykwartylowego. Zmienne kategoryczne porównano między grupami za pomocą testu chi-kwadrat. Rozkład normalny zmiennych liczbowych oceniano testem Shapiro-Wilka. Analizę wnioskowania przeprowadzono w celu oceny wpływu leczenia periodontologicznego na zmienne morfologii krwi, markery stanu zapalnego, żelaza i parametrów przyzębia, stosując sparowany test t-Studenta lub test Wilcoxona i porównując odpowiednie bezwzględne delta między grupami za pomocą testu Manna-Whitneya test. Poziom istotności ustalono na 5%.