Komórki T CAR EGFRvIII dla nowo zdiagnozowanego glejaka złośliwego stopnia IV wg WHO (ExCeL)

Należy pamiętać, że rejestracja na to badanie została zakończona przedwcześnie z powodu zakończenia finansowania grantowego.

Po uzyskaniu zgody pacjentów włączono do kohort ze zwiększaniem dawki. Pacjenci zostaną poddani leukaferezie w celu pobrania jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) do wytworzenia komórek T CAR EGFRvIII przed rozpoczęciem RT i jednoczesnego podawania TMZ. Komórki T wyizolowano z PBMC pacjenta i transdukowano w celu ekspresji CAR. W skrócie, PBMC stymulowano Muromonabem klasterem różnicowania 3 (CD3) (OKT3), przeciwciałem monoklonalnym anty-CD3 (mAb) i transdukowano na płytkach powleczonych RetroNectin®. Transdukowane komórki namnażano w interleukinie-2 (IL-2) przez 14 dni.

Następnie pacjenci ukończyli standardową RT i jednoczesną TMZ. Pacjenci, którzy kwalifikowali się po standardowej radioterapii i TMZ, otrzymywali do 3 cykli TMZ w dawce 50-100 mg/m^2/dobę przez 21 dni po 28 dniowych cykli, co jest standardowym schematem TMZ o zwiększonej dawce (DI). Jeśli limfocyty T specyficzne dla CAR nie spełniały kryteriów uwalniania, pacjenta wycofano przed leczeniem CAR i wymieniono.

Co najmniej 48 godzin po ostatniej dawce DI TMZ podawano dożylnie całkowitą dawkę komórek T CAR EGFRvIII. Jeśli nie można było wygenerować wystarczającej liczby limfocytów T swoistych dla CAR, aby osiągnąć docelową przypisaną dawkę w części badania polegającej na eskalacji dawki, pacjent był leczony niższym wcześniej zdefiniowanym poziomem dawki przy użyciu dostępnych limfocytów T swoistych dla CAR i zastąpiony w przypisanej wyższej dawce. Podana dawka byłaby najwyższym zdefiniowanym poziomem dawki, dla którego dostępna jest wystarczająca liczba limfocytów T swoistych dla CAR. W rozszerzonej kohorcie, gdyby nie można było wytworzyć wystarczającej liczby komórek T specyficznych dla CAR, aby osiągnąć dawkę MTD, podano by wszystkie dostępne komórki T.

Po infuzji CAR EGFRvIII pobierano próbki krwi do monitorowania immunologicznego 1, 5 i 10 dni po infuzji, następnie 1, 3 i 6 miesięcy, a następnie co roku do progresji (lub śmierci lub utraty kontaktu). Ponowne wizyty w celu monitorowania odporności po 3 miesiącach, 6 miesiącach i co roku zbiegły się z wizytami w poradni SOC. Pobrano również krew do reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) kompetentnego retrowirusa replikacji (RCR) zgodnie z Food and Drug Administration (FDA) w 3, 6 i 12 miesiącu podczas wizyt w klinice SOC. Na koniec krew do oceny zespołu uwalniania cytokin (CRS) pobrano przed infuzją komórek, 1 i 4 godziny po infuzji oraz w dniach 1, 2, 5, 10 i po jednym miesiącu. Pomiary CRS obejmowały IL-2, IL-6, czynnik martwicy nowotworów alfa (TNFα), interferon (IFN) gamma, czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów (GM-CSF) oraz białko C-reaktywne (CRP).

Pacjenci wrócili do kliniki miesiąc po infuzji limfocytów T CAR EGFRvIII w celu oceny pod kątem cykli SOC przez 5 dni TMZ w dawce 150-200 mg/m2/dobę przez pierwszy 5-dniowy cykl, a następnie 200 mg/m2 2/dobę przez 5 dni co 28 dni przez lekarza onkologa prowadzącego. Spowodowało to >30-dniowe opóźnienie między ostatnim cyklem DI TMZ a pierwszym cyklem 5-dniowego TMZ.

Progresję nowotworu dokumentowano histologicznie, chyba że istniały przeciwwskazania kliniczne, w celu wykluczenia reakcji zapalnych objawiających się zmianami radiograficznymi lub klinicznymi, które mogłyby wskazywać na potencjalnie toksyczną lub terapeutyczną odpowiedź, a nie na progresję nowotworu. Jeśli tkankę uzyskano z biorepozytorium Duke Brain Tumor Centre Biorepository, użyto jej do histologicznego potwierdzenia progresji nowotworu oraz do oceny naciekania komórek immunologicznych i ucieczki antygenu EGFRvIII w miejscu nowotworu. Pacjenci kwalifikowaliby się do dodatkowej terapii adjuwantowej w czasie progresji nowotworu.

Zaplanowano klasyczny projekt badania „3+3” w celu oszacowania MTD dla leczenia komórkami T specyficznymi dla CAR wśród pacjentów z nowo zdiagnozowanym GBM. Należało rozważyć cztery poziomy dawek: nr 1: 4,5 x 10^6/kg, nr 2: 1,5 x 10^7/kg, nr 3: 4,5 x 10^7/kg i nr 4: 1,5 x 10^8 /kg. Zaczynając od najniższego poziomu dawki, kohorty 3-6 osobników byłyby gromadzone przy każdym poziomie dawki. Jeśli pacjent został utracony z obserwacji w ciągu pierwszych 4 tygodni po leczeniu CAR bez wystąpienia toksyczności ograniczającej dawkę (DLT), wówczas pacjenta nie uznano za nadającego się do oceny w celu określenia DLT i zostałby zastąpiony. Za MTD uznano najwyższy poziom dawki, przy którym ≤1 z 6 pacjentów doświadczyło DLT podczas 4-tygodniowego okresu obserwacji po leczeniu CAR. Tylko 3-osobowa kohorta została włączona do pierwszego poziomu dawki ze względu na zakończenie finansowania grantowego.

Rozszerzoną kohortę 12 pacjentów zaplanowano w MTD komórek T CAR EGFRvIII, w celu uzyskania dokładniejszego oszacowania prawdopodobieństwa niedopuszczalnej toksyczności. Ta kohorta miałaby radioznakowane komórki 111In w celu śledzenia ich dystrybucji. W skrócie, CAR byłyby liczone i ponownie zawieszane w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS). 4-6x10^8 komórek byłoby znakowanych łącznie 500 mikroCi 111In. Komórki byłyby płukane i mieszane z zimnymi CAR w celu uzyskania pożądanej dawki komórek. Oznakowane CAR byłyby podawane pacjentowi przez cewnik dożylny w ambulatoryjnym oddziale przeszczepu szpiku kostnego (BMT). Dystrybucja CAR EGFRvIII znakowanych 111In byłaby oceniana 1, 2 i 3 dni po infuzji za pomocą scyntygrafii. Nie było zapisów do rozszerzonej kohorty z powodu zakończenia dofinansowania.