EGFRvIII CAR T buňky pro nově diagnostikovaný maligní gliom IV. stupně WHO (ExCeL)

Upozorňujeme, že zápis do tohoto studia byl předčasně ukončen z důvodu ukončení grantového financování.

Po souhlasu byly subjekty zařazeny do kohort s eskalací dávky. Pacienti podstoupí leukaferézu za účelem odběru mononukleárních buněk periferní krve (PBMC) pro vytvoření EGFRvIII CAR T buněk před zahájením RT a souběžné TMZ. T buňky byly izolovány z pacientových PBMC a transdukovány tak, aby exprimovaly CAR. Stručně, PBMC byly stimulovány Muromonab-klastrem diferenciace 3 (CD3) (OKT3), anti-CD3 monoklonální protilátkou (mAb), a transdukovány na destičkách potažených RetroNectinem®. Transdukované buňky byly expandovány v interleukinu-2 (IL-2) po dobu 14 dnů.

Pacienti poté absolvovali standardní péči RT a souběžnou TMZ. Pacienti, kteří zůstali vhodní i po standardní péči ozáření a TMZ, dostávali až 3 cykly TMZ v dávce 50-100 mg/m^2/den po dobu 21 dnů 28denních cyklů, což je standardní dávkově-intenzifikovaný (DI) režim TMZ. Pokud CAR-specifické T buňky nesplňovaly kritéria uvolňování, byl pacient před léčbou CAR stažen a nahrazen.

Nejméně 48 hodin po poslední dávce DI TMZ byla intravenózně podána celková dávka EGFRvIII CAR T buněk. Pokud nebylo možné generovat dostatečné množství T-buněk specifických pro CAR, aby se dosáhlo cílené přidělené dávky v části studie s eskalací dávky, pacient byl léčen nižší předem definovanou hladinou dávky s použitím dostupných T-buněk specifických pro CAR a nahrazen v přidělené vyšší dávce. Podaná dávka by byla nejvyšší definovanou dávkou, pro kterou je k dispozici dostatek CAR-specifických T buněk. V rámci rozšířené kohorty, pokud by nemohlo být generováno dostatečné množství CAR-specifických T-buněk pro splnění dávky MTD, byly by podány všechny dostupné T-buňky.

Po infuzi EGFRvIII CARs byly odebrány vzorky krve pro imunitní monitorování 1, 5 a 10 dnů po infuzi, poté 1, 3 a 6 měsíců a poté jednou ročně až do progrese (nebo smrti nebo ztráty kontaktu). Opakované návštěvy pro monitorování imunity ve 3 měsících, 6 měsících a ročně se shodovaly s návštěvami kliniky SOC. Ve 3., 6. a 12. měsíci během návštěv kliniky SOC byla také odebrána krev na polymerázovou řetězovou reakci (PCR) pro replikaci kompetentního retroviru (RCR) podle Food and Drug Administration (FDA). Nakonec byla odebrána krev pro hodnocení syndromu uvolňování cytokinů (CRS) před infuzí buněk, 1 a 4 hodiny po infuzi a ve dnech 1, 2, 5, 10 a jeden měsíc. Měření CRS zahrnovala IL-2, IL-6, tumor nekrotizující faktor alfa (TNFa), interferon (IFN) gama, faktor stimulující kolonie granulocytů a makrofágů (GM-CSF) a C-reaktivní protein (CRP).

Pacienti se vrátili na kliniku jeden měsíc po infuzi EGFRvIII CAR T buněk, aby se vyhodnotili cykly SOC 5denní TMZ v dávce 150-200 mg/m^2/den během prvního 5denního cyklu, po němž následovalo 200 mg/m^ 2/den po dobu 5 dnů každých 28 dnů u ošetřujícího onkologa. To vedlo k >30dennímu zpoždění mezi posledním cyklem DI TMZ a prvním cyklem 5denní TMZ.

Progrese nádoru byla dokumentována histologicky, pokud nebyly klinické kontraindikace, aby se vyloučily zánětlivé reakce projevující se jako rentgenové nebo klinické změny, které by mohly indikovat potenciálně toxické nebo terapeutické odpovědi, nikoli progresi nádoru. Pokud byla tkáň získána prostřednictvím Biorepository Duke Brain Tumor Center, byla použita k histologickému potvrzení progrese nádoru a k posouzení imunologické buněčné infiltrace a úniku antigenu EGFRvIII v místě nádoru. Pacienti by byli způsobilí pro další adjuvantní terapii v době progrese nádoru.

Klasický design studie „3+3“ byl naplánován k odhadu MTD pro léčbu T-buňkami specifickými pro CAR u pacientů s nově diagnostikovaným GBM. Měly být zváženy čtyři úrovně dávek: #1: 4,5 x 10^6/kg, #2: 1,5 x 10^7/kg, #3: 4,5 x 10^7/kg a #4: 1,5 x 10^8 /kg. Počínaje nejnižší úrovní dávky by se na každé úrovni dávky nashromáždily kohorty 3-6 subjektů. Pokud byl pacient ztracen ve sledování během prvních 4 týdnů po léčbě CAR, aniž by u něj došlo k toxicitě omezující dávku (DLT), pak pacient nebyl považován za hodnotitelného pro stanovení DLT a byl by nahrazen. MTD byla považována za nejvyšší hladinu dávky, při které ≤1 ze 6 pacientů prodělal DLT během 4týdenního období pozorování po léčbě CAR. V první dávkové hladině byla zařazena pouze skupina 3 pacientů z důvodu ukončení grantového financování.

Rozšířená kohorta 12 pacientů byla plánována při MTD EGFRvIII CAR T buněk, aby se získal přesnější odhad pravděpodobnosti nepřijatelné toxicity. Tato kohorta by měla buňky radioaktivně značené 111In pro sledování jejich distribuce. Stručně, CAR by byly spočítány a resuspendovány ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS). 4-6x10^8 buněk by bylo označeno celkem 500 mikroCi 111In. Buňky by byly promyty a smíchány se studenými CAR, aby se dosáhlo požadované dávky buněk. Označené CAR by byly pacientovi podány intravenózním katetrem na jednotce ambulantní transplantace kostní dřeně (BMT). Distribuce 111In-značených EGFRvIII CAR by se hodnotila 1, 2 a 3 dny po infuzi pomocí scintigrafie. V rozšířené kohortě nebyl žádný zápis kvůli ukončení grantového financování.