EGFRvIII-CAR-T-Zellen für neu diagnostiziertes malignes Gliom WHO-Grad IV (ExCeL)

Bitte beachten Sie, dass die Immatrikulation für diese Studie aufgrund des Endes der Stipendienförderung vorzeitig endet.

Nach Zustimmung wurden die Probanden in Dosis-Eskalations-Kohorten aufgenommen. Die Patienten werden einer Leukapherese unterzogen, um periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) für die Generierung von EGFRvIII-CAR-T-Zellen vor Beginn der RT und der gleichzeitigen TMZ zu gewinnen. T-Zellen wurden aus den PBMCs des Patienten isoliert und transduziert, um das CAR zu exprimieren. Kurz gesagt, PBMCs wurden mit Muromonab-Cluster der Differenzierung 3 (CD3) (OKT3), einem monoklonalen Anti-CD3-Antikörper (mAb), stimuliert und auf mit RetroNectin® beschichtete Platten transduziert. Transduzierte Zellen wurden für 14 Tage in Interleukin-2 (IL-2) expandiert.

Die Patienten schlossen dann die standardmäßige Behandlung mit RT und gleichzeitiger TMZ ab. Patienten, die nach der standardmäßigen Bestrahlung und TMZ in Frage kamen, erhielten bis zu 3 Zyklen TMZ mit 50–100 mg/m^2/Tag für 21 Tage mit 28-Tage-Zyklen, was dem dosisintensivierten (DI) TMZ-Standardregime entspricht. Wenn die CAR-spezifischen T-Zellen die Freigabekriterien nicht erfüllten, wurde der Patient vor der CAR-Behandlung zurückgezogen und ersetzt.

Mindestens 48 Stunden nach der letzten Dosis von DI TMZ wurde die Gesamtdosis an EGFRvIII-CAR-T-Zellen intravenös verabreicht. Wenn nicht genügend CAR-spezifische T-Zellen generiert werden konnten, um die zugewiesene Zieldosis innerhalb des Dosiseskalationsteils der Studie zu erreichen, wurde der Patient mit einer niedrigeren vordefinierten Dosisstufe unter Verwendung verfügbarer CAR-spezifischer T-Zellen behandelt und ersetzt in der zugewiesenen höheren Dosis. Die verabreichte Dosis wäre die höchste definierte Dosisstufe gewesen, für die ausreichend CAR-spezifische T-Zellen zur Verfügung stehen. Wenn innerhalb der erweiterten Kohorte nicht genügend CAR-spezifische T-Zellen erzeugt werden konnten, um die MTD-Dosis zu erreichen, würden alle verfügbaren T-Zellen verabreicht werden.

Nach der Infusion von EGFRvIII CARs wurden Blutproben zur Immunüberwachung 1, 5 und 10 Tage nach der Infusion, dann 1, 3 und 6 Monate, dann jährlich bis zur Progression (oder Tod oder Kontaktverlust) entnommen. Die Gegenbesuche zur Immunüberwachung nach 3 Monaten, 6 Monaten und jährlich fielen mit den SOC-Klinikbesuchen zusammen. Blut wurde auch für die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) des replikationskompetenten Retrovirus (RCR) gemäß der Food and Drug Administration (FDA) nach 3, 6 und 12 Monaten während der SOC-Klinikbesuche entnommen. Schließlich wurde vor der Zellinfusion, 1 und 4 Stunden nach der Infusion und an den Tagen 1, 2, 5, 10 und nach einem Monat Blut zur Bewertung des Cytokin-Freisetzungssyndroms (CRS) entnommen. Die Messungen für CRS umfassten IL-2, IL-6, Tumornekrosefaktor alpha (TNFα), Interferon (IFN) gamma, Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF) und C-reaktives Protein (CRP).

Die Patienten kehrten einen Monat nach der EGFRvIII-CAR-T-Zell-Infusion in die Klinik zurück, um für Zyklen von SOC 5-Tage-TMZ mit 150-200 mg/m^2/Tag für den ersten 5-Tages-Zyklus, gefolgt von 200 mg/m^, untersucht zu werden 2/Tag für 5 Tage alle 28 Tage pro behandelndem Onkologen. Dies führte zu einer Verzögerung von >30 Tagen zwischen dem letzten Zyklus von DI TMZ und dem ersten Zyklus von 5-tägigem TMZ.

Die Tumorprogression wurde histologisch dokumentiert, es sei denn, es lagen klinische Kontraindikationen vor, um Entzündungsreaktionen auszuschließen, die sich als röntgenologische oder klinische Veränderungen zeigten, die auf eine potenziell toxische oder therapeutische Reaktion und nicht auf eine Tumorprogression hindeuten könnten. Wenn Gewebe vom Duke Brain Tumor Center Biorepository erhalten wurde, wurde es verwendet, um die Tumorprogression histologisch zu bestätigen und um die immunologische Zellinfiltration und den Austritt des EGFRvIII-Antigens an der Tumorstelle zu beurteilen. Die Patienten wären zum Zeitpunkt der Tumorprogression für eine zusätzliche adjuvante Therapie geeignet.

Ein klassisches „3+3“-Studiendesign war geplant, um die MTD für die Behandlung mit CAR-spezifischen T-Zellen bei Patienten mit neu diagnostiziertem GBM abzuschätzen. Vier Dosierungsstufen waren zu berücksichtigen: Nr. 1: 4,5 x 10^6/kg, Nr. 2: 1,5 x 10^7/kg, Nr. 3: 4,5 x 10^7/kg und Nr. 4: 1,5 x 10^8 /kg. Beginnend mit der niedrigsten Dosisstufe würden bei jeder Dosisstufe Kohorten von 3–6 Probanden entstehen. Wenn ein Patient während der ersten 4 Wochen nach der CAR-Behandlung ohne dosislimitierende Toxizität (DLT) für die Nachsorge verloren ging, wurde der Patient für die Bestimmung der DLT als nicht auswertbar angesehen und würde ersetzt werden. Als MTD wurde die höchste Dosisstufe angesehen, bei der bei ≤ 1 von 6 Patienten während des 4-wöchigen Beobachtungszeitraums nach der CAR-Behandlung eine DLT auftrat. Aufgrund des Endes der Zuschussfinanzierung wurde nur eine 3-Patienten-Kohorte für die erste Dosisstufe aufgenommen.

Bei der MTD von EGFRvIII-CAR-T-Zellen war eine erweiterte Kohorte von 12 Patienten geplant, um eine genauere Abschätzung der Wahrscheinlichkeit einer inakzeptablen Toxizität zu erhalten. Diese Kohorte würde die Zellen mit 111In radioaktiv markieren lassen, um ihre Verteilung zu verfolgen. Kurz gesagt, CARs wären gezählt und in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) resuspendiert worden. 4-6x10^8 Zellen würden mit insgesamt 500 microCi 111In markiert werden. Die Zellen würden gewaschen und mit kalten CARs gemischt, um die gewünschte Zelldosis zu erreichen. Die markierten CARs würden dem Patienten über einen intravenösen Katheter innerhalb der Ambulatory Bone Marrow Transplant (BMT) Unit infundiert. Die Verteilung von 111In-markierten EGFRvIII-CARs würde 1, 2 und 3 Tage nach der Infusion mittels Szintigraphie bewertet. Aufgrund des Endes der Zuschussfinanzierung gab es keine Einschreibung in die erweiterte Kohorte.