Transplantacja mikroflory kałowej (FMT) u pacjentów z mechanizmem(ami) działania IBS

Pacjenci Do badania zostanie włączonych 200 pacjentów spełniających rzymskie kryteria IV zespołu jelita drażliwego (IBS). Należy uwzględnić wszystkie podtypy IBS.

Badacze dawców wykorzystają tego samego superdawcę, którego użyli w poprzednim randomizowanym, podwójnie ślepym badaniu kontrolowanym placebo. Dawcą jest wysportowany mężczyzna rasy kaukaskiej w wieku 36 lat. Nie pali i jest całkowicie zdrowy bez żadnych leków i ma BMI 23,5. Nie jest spokrewniony z żadnym z pacjentów biorących udział w badaniu. Urodził się drogą pochwową i karmił piersią. W swoim życiu był leczony 3 razy antybiotykami. Trenuje 5 razy w tygodniu po godzinie za każdym razem. Regularnie przyjmował suplementy diety bogate w białka, witaminy, błonnik i minerały, dzięki czemu jego dieta była ponadprzeciętnie bogatsza w te substancje. Został przebadany zgodnie z wytycznymi dla dawców FMT. Zanim został przyjęty jako dawca mikrobiom został przebadany w próbce kału za pomocą testu GA-map Dysbiosis. Analiza wykazała wskaźnik dysbiozy (DI) = 1, co wskazuje na normobiozę. Ponadto miał nadmiar bakterii należących do Firmicutes. Jego odchody będą badane co trzeci miesiąc podczas próby.

Protokół

Pacjenci są losowo przydzielani do przeszczepu 90 g, przeszczepu 90 g dwukrotnie w odstępie 1 tygodnia do dystalnej części jelita cienkiego lub do przeszczepu 90 g do jelita ślepego okrężnicy. Pacjenci powinni wypełnić 5 5 kwestionariuszy i dostarczyć próbki kału na początku badania, 2 tygodnie, 1 miesiąc i 3 miesiące po FMT.

Pobieranie, przygotowanie i podawanie kału. Kał zarówno dawcy, jak i pacjentów należy pobrać i przechowywać w temperaturze -80°C. Zamrożony kał należy rozmrozić i każde 30 g rozpuścić w 30 ml 0,9% sterylnej soli fizjologicznej. Rozpuszczony stolec podawany pacjentom, po całonocnej głodówce, przez kanał roboczy gastroduodenoskopu w części zstępującej dwunastnicy dystalnie od brodawki Vatera lub do kątnicy przez kanał roboczy kolonoskopu.

Kwestionariusze analizy

1. Skala nasilenia objawów IBS (IBS-SSS).
2. Skala objawów Birmingham.
3. Kwestionariusz jakości życia IBS (IBSQo).
4. Skrócona forma Nepean Dyspepsia Index (SF-NDI).
5. Skala oceny zmęczenia (FAS).

Analiza mikrobiomu Analizę mikroflory jelitowej przeprowadza się za pomocą testu Genetic Analysis-mapTM Dysbiosis (Genetic Analysis AS, Oslo, Norwegia) poprzez algorytmiczną ocenę liczebności i profilu bakterii w kale (wskaźnik dysbiozy, DI) oraz potencjalne odchylenia mikrobiomu od normy. Test GA-map opiera się na homogenizacji kału, mechanicznym rozbiciu komórek bakteryjnych i zautomatyzowanej ekstrakcji całkowitego genomowego DNA bakterii za pomocą kulek magnetycznych. DI opiera się na 54 sondach DNA ukierunkowanych na ponad 300 szczepów bakteryjnych w oparciu o ich sekwencję 16S rRNA w siedmiu regionach zmiennych (V3-V9). Dwadzieścia sześć sond bakteryjnych jest specyficznych dla gatunku, 19 wykrywa bakterie na poziomie rodzaju, a 9 sond wykrywa bakterie na wyższych poziomach taksonomicznych. Znakowanie sondy odbywa się przez wydłużanie pojedynczego nukleotydu i hybrydyzację z komplementarnymi sondami sprzężonymi z kulkami magnetycznymi i wykrywanie sygnału przy użyciu analizatora BioCode 1000A 128-Plex (Applied BioCode, Santa Fe Springs, CA, USA). DI powyżej 2 pokazuje profil mikroflory, który różni się od profilu referencyjnego zbioru normobiotycznego (DI 1-2: brak dysbiozy, DI: umiarkowany, DI 4-5: ciężka dysbioza).