Wpływ suplementacji olejem z kryla na fizjologię czerwonych krwinek przeciwko zmianom w markerach metabolizmu żelaza.

Wszyscy zawodnicy zostaną losowo podzieleni na dwie grupy (podwójnie ślepa):

A. suplementowanej (n = 15), która trzy razy dziennie otrzyma jedną kapsułkę suplementu o nazwie THYROX (olej z kryla atlantyckiego). Dzienna zawartość oleju z kryla wynosi 1500 mg, w tym kwasy tłuszczowe omega-3 262,5 mg, EPA – 180 mg, DHA – 82,5 mg, fosfolipidy – 600 mg, astaksantyna 150 mg. Okres suplementacji będzie wynosił sześć tygodni.

B. kontrola (n = 15) otrzymująca placebo. MLB Biotrade Sp. z oo z oo, Poznań, Polska będzie produkować wszystkie suplementy z kryla olejowego i placebo.

Pomiar: Wszystkie wyznaczone parametry będą mierzone aparaturą dostępną w laboratorium ZWKF w Gorzowie Wielkopolskim oraz przy użyciu komercyjnych zestawów testowych. Pomiary zostaną wykonane przez wykonawców projektu.

1. Probówki polietylenowe (2,7 ml) zawierające antykoagulant kwas dipotasowy, etylenodiaminotetraoctowy (EDTAK2), zostaną użyte do następujących testów:

   1. pełną morfologię krwi (18 parametrów) oznaczoną na analizatorze hematologicznym MYTHIC 18 (Orphee Medical, Genewa, Szwajcaria). Wskaźniki białych krwinek: WBC (białe krwinki), LYM (limfocyty w procentach), LYM (limfocyty), MON (monocyty w procentach), MON (monocyty), GRA (granulocyty w procentach), GRA (granulocyty) . Wskaźniki czerwonych krwinek: RBC (czerwone krwinki), HGB (hemoglobina), HCT (hematokryt), MCV (średnia objętość krwinki), MCH (średnia hemoglobina w krwince), MCHC (średnie stężenie hemoglobiny w krwince), RDW (rozkład krwinek czerwonych) Szerokość). Wskaźniki płytek krwi: PLT (płytki krwi), MPV (średnia objętość płytek krwi), PDW (szerokość dystrybucji płytek krwi), PCT (trombokryt).
   2. ręczny rozmaz krwi zostanie wykonany poprzez umieszczenie kropli krwi na szkiełku, a następnie rozprowadzenie jej równomiernym ruchem. Po wyschnięciu zostanie zabarwiony metodą Maya Grunwalda-Giemsy zgodnie z procedurą. Zabarwiony i utrwalony rozmaz po wyschnięciu będzie oglądany pod mikroskopem w celu oceny ilościowej i jakościowej.
   3. liczbę retikulocytów przeprowadza się poprzez inkubację pobranej krwi z barwnikiem retikulocytowym w proporcji określonej przez producenta. Następnie zostanie wykonany rozmaz, a po wyschnięciu zostanie policzona liczba komórek.

2. Probówki polietylenowe z aktywatorem krzepnięcia (9 ml) zostaną odwirowane w celu oddzielenia elementów morfotycznych od surowicy za pomocą wirówki (3000 obr./min. przez 10 min). Surowica zostanie odpipetowana do kilku probówek Eppendorfa, które następnie zostaną zamrożone (temp. -80°C). W wyekstrahowanej surowicy zostaną oznaczone wszystkie następujące parametry biochemiczne:

   1. stosując metodę ELISA zgodnie z instrukcją producenta testu. Oznaczenia obejmują parametry przepływu:

      • markery stresu oksydacyjnego: 4-hydroksynonenal (4-HNE), całkowita pojemność przeciwutleniająca (TAC) i 8-izoprostan.
      • parametry stanu żelaza: hepcydyna, rozpuszczalny receptor transferyny, ferrytyna
      • wskaźniki uszkodzenia mięśni: mioglobina.
   2. poziom żelaza i całkowitej zdolności wiązania żelaza (TIBC) (nienasycona zdolność wiązania żelaza (UIBC) zostanie obliczona ze wzoru: UIBC = TIBC-żelazo w surowicy) zostanie oznaczona metodą kolorymetryczną na czytniku SPECTROstar Nano.
3. Stężenie mleczanu (La) zostanie określone w krwi włośniczkowej natychmiast po pobraniu przy użyciu dostępnego w handlu zestawu (Dr. Lange, Niemcy).