Porównanie miejscowej terapii fotodynamicznej z miejscowym kalcypotriolem w leczeniu leukoplakii jamy ustnej (PDT CALCI HOL)

Cele

Cele główne:

3.1 Porównanie wpływu miejscowej terapii fotodynamicznej z użyciem 2,5% błękitu toluidynowego i miejscowego kalcypotriolu (0,005%) na odpowiedź kliniczną po zakończeniu leczenia w 4 tygodniu od wartości wyjściowej w leczeniu leukoplakii jamy ustnej

Cele drugorzędne:

3.2 Porównanie wpływu miejscowej terapii fotodynamicznej z użyciem 2,5% błękitu toluidynowego z miejscowym kalcypotriolem (0,005%) na wielkość zmiany, szorstkość/białość zmiany oraz jakość życia związanej ze zdrowiem jamy ustnej po zakończeniu leczenia w 4 i 12 tygodniu od wartości wyjściowej w leczeniu leukoplakii jamy ustnej. 3.3 Porównanie wpływu miejscowej terapii fotodynamicznej z użyciem 2,5% błękitu toluidynowego z miejscowym kalcypotriolem (0,005%) na molekularne markery ślinowe (IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF) po zakończeniu leczenia w 4 tygodniu od wartości wyjściowej. 3.4 Porównanie zdarzeń niepożądanych, czasu do całkowitej odpowiedzi i wskaźników nawrotów między dwiema grupami.

Uzasadnienie:

Prawie dwie trzecie nowotworów jamy ustnej poprzedzają potencjalnie złośliwe zaburzenia jamy ustnej, takie jak leukoplakia, spowodowane nawykami tytoniowymi, alkoholowymi i spożywaniem orzechów betel. Leukoplakia ma wysoką częstość występowania i wskaźnik transformacji złośliwej (0,13%-40,8%). Nie istnieją uniwersalne protokoły leczenia leukoplakii. Interwencje profilaktyczne, zachowawcze, medyczne i chirurgiczne mają kilka ograniczeń i wysokie wskaźniki nawrotów. Niejednorodna, dysplastyczna, duża, wieloogniskowa, proliferacyjna, nawracająca i oporna leukoplakia u pacjentów ze współistniejącymi chorobami stanowi jeszcze poważniejsze wyzwanie w leczeniu dla lekarza stomatologa, który często ucieka się do środków zachowawczych z uważną obserwacją. Pacjenci z leukoplakią muszą radzić sobie z nieestetycznym wyglądem zmiany i lękiem przed nowotworem, co wpływa na ich zdrowie jamy ustnej i psychiczne.

Uważa się, że usunięcie patologicznych zmian leukoplakii zmniejsza ryzyko nowotworzenia. Dostępne są opcje chirurgiczne, ablacja laserowa, elektrokoagulacja, krioterapia, ale wiążą się one z powikłaniami pooperacyjnymi, takimi jak ból, obrzęk, infekcje, neuropatia, bliznowacenie i niekorzystnie wpływają na funkcję jamy ustnej przy wysokich wskaźnikach nawrotów. Metody te dotyczą tylko fizycznie nieprawidłowego obszaru, w którym są zastosowane, i nie powodują żadnych korzystnych zmian w biologii dotkniętego obszaru. Istnieje potrzeba nieinwazyjnych metod usuwania leukoplakii bez obecnych ograniczeń, które również powodują korzystne zmiany molekularne w tkankach podłoża i sąsiednich, aby złagodzić ryzyko transformacji złośliwej.

Terapia fotodynamiczna (PDT) jest nieinwazyjną metodą usuwania nieprawidłowej tkanki przy użyciu fotouczulacza (PS) i odpowiedniej aktywacji światłem, która selektywnie celuje w nieprawidłowe komórki i powoduje cytotoksyczność i śmierć. PDT powoduje również apoptozę, zaburzenia naczyniowe i ma działanie immunomodulujące, aby zmniejszyć ryzyko nowotworzenia. Najszerzej stosowanym i badanym PS jest kwas 5-aminolewulinowy (5-ALA). 5-ALA ma kilka ograniczeń, ponieważ jest bardzo drogi, światłoczuły, powoduje obrzęk, ból, pieczenie, reakcję alergiczną na sąsiedniej tkance, wymaga ciemnego pomieszczenia do aplikacji i długich godzin inkubacji (2 godziny). Błękit toluidynowy (TB) jest barwnikiem metachromatycznym, który był używany jako barwnik życiowy w przesiewowych badaniach raka jamy ustnej, ponieważ preferencyjnie barwi komórki mitotyczne i dysplastyczne. Może być również używany jako PS, ponieważ jest aktywowany przez czerwone światło (620-660 nm) i był stosowany w PDT w jednej serii przypadków 15 zmian leukoplakii z 40% całkowitą odpowiedzią. Jest tani, bezpieczny, mniej toksyczny i światłoczuły, celuje w nieprawidłowe komórki, ma prostą aplikację, wymaga krótszego czasu inkubacji, nie wymaga ciemnego pomieszczenia i nie odnotowano skutków ubocznych. PDT była zwykle próbowana z 5-ALA jako fotouczulaczem (PS) i światłem laserowym jako aktywatorem. PDT ze źródłem światła LED jako aktywatorem jest tańsza i bardziej wykonalna w warunkach o ograniczonych zasobach.

Miejscowe retinoidy były stosowane jako nieinwazyjna metoda usuwania zmian leukoplakii ze względu na ich aktywność przeciwkeratynocytową, ale mają wysokie wskaźniki nawrotów, ryzyko toksyczności ogólnoustrojowej i rozwoju oporności. Miejscowy kalcypotriol jest syntetycznym analogiem witaminy D, który był stosowany w łuszczycy ze względu na swoje działanie antyproliferacyjne, przeciwzapalne, przeciwangiogenne i immunomodulujące. Istnieją tylko dwa badania, które zastosowały kalcypotriol w leukoplakii z całkowitą odpowiedzią od 25% do 80% bez skutków ubocznych.

Obecnie nie ma RCT, które porównywałyby efekty PDT z użyciem TB i miejscowego kalcypotriolu w leukoplakii.

Poziomy pro-onkogennych cytokin (IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF), które promują stan zapalny, proliferację i angiogenezę, są ważnymi biomarkerami prognostycznymi, które mogą pomóc w ocenie korzyści każdej interwencji w leukoplakii. Nie ma badań, które oceniałyby te cytokiny po miejscowej terapii PDT lub kalcypotriolem w leukoplakii.

Liczba pacjentów:

Wielkość próby: W systematycznym przeglądzie i metaanalizie dotyczącej PDT w leukoplakii jamy ustnej autorstwa Zhang i in. (2023) ogólną całkowitą odpowiedź zaobserwowano u 50% pacjentów. Podczas gdy tylko 2 badania wspominają o wynikach miejscowego kalcypotriolu (0,005%) w leukoplakii jamy ustnej z wielkością próby 20 w obu grupach badawczych. W jednym RCT (Femanio i in. 2001) stwierdzono CR 80% w leukoplakii po miejscowym kalcypotriolu w 5 tygodniu. W innym badaniu (Galwash i in. 2017) całkowita odpowiedź wyniosła 25% w 4 tygodniu. Ze względu na brak i zmienność danych w dostępnych badaniach dotyczących odpowiedzi na miejscowy kalcypotriol (0,005%) w leukoplakii jamy ustnej możemy przewidywać CR u 25% pacjentów w naszym badaniu. Szacowana wielkość próby dla porównania dwóch prób proporcji Test H0: P1=P2, gdzie p1 to proporcja w populacji 1, a p2 to proporcja w populacji 2.

Założenia:

alfa=0,0500 (dwustronna) moc=0,8000 p1=0,2500 p2=0,5000 n2/n1=1,00 Szacowane wymagane wielkości prób: n1=66, n2=66 Ostateczna wielkość próby wyniosła 83/grupę, biorąc pod uwagę 20% pacjentów jako utraconych do obserwacji. Całkowita wielkość próby: 166

Grupa A (n=83): Nieinwazyjna PDT z użyciem LED o długości fali od 630 do 660 nm (fluencja 15 J/cm2) jako źródła światła i 2,5% TB jako fotouczulacza będzie stosowana w leukoplakii jamy ustnej raz w tygodniu przez 4 tygodnie wraz z terapią profilaktyczną i konwencjonalną.

Grupa B (n=83): Miejscowa aplikacja maści kalcypotriol 0,005% dwa razy dziennie przez 4 tygodnie wraz z terapią profilaktyczną i konwencjonalną

5.5 Projekt badania Otwarte, randomizowane badanie kliniczne

Randomizacja blokowa:

Randomizacja blokowa ze zmienną wielkością bloku zostanie przeprowadzona przy użyciu wygenerowanych komputerowo liczb losowych. Stosunek alokacji (1:1)

Ukrycie alokacji:

Uczestnicy zostaną zrandomizowani przy użyciu sekwencyjnie ponumerowanych, nieprzezroczystych, zaklejonych kopert (SNOSE): grupa randomizacji zostanie zapisana na papierze i umieszczona w nieprzezroczystej, zaklejonej kopercie przygotowanej z arkusza folii aluminiowej i arkusza węglowego w każdej. Koperta zostanie oznaczona numerem seryjnym i kodem randomizacji oraz będzie miała identyfikator badania na przodzie. Interwencja zostanie zapisana na papierze wewnątrz koperty i zapieczętowana przez technika. Koperty będą otwierane sekwencyjnie przez operatora, a pacjenci zostaną przydzieleni do ramienia badania zgodnie z interwencją wymienioną wewnątrz koperty. Użyte koperty będą przechowywane oddzielnie do zakończenia badania.

Interwencja

Konwencjonalne nieinwazyjne leczenie (standardowa opieka):

Wszyscy uczestnicy w obu grupach otrzymają to samo standardowe konwencjonalne nieinwazyjne leczenie zalecane dla leukoplakii zgodnie z aktualnymi dowodami naukowymi.

• Krótkie poradnictwo behawioralne dotyczące zaprzestania nawyków tytoniowych, spożywania orzechów betel i alkoholu zgodnie z techniką WHO 5A i 5R na początku i każdej wizycie kontrolnej.
• Profilaktyka stomatologiczna
• Usunięcie czynników drażniących w jamie ustnej, takich jak ostre zęby, aparaty lub protezy, zatrzymane trzecie trzonowce policzkowo-odwiedzione, nawyki parafunkcjonalne
• Instrukcje utrzymania higieny jamy ustnej
• Kontrola schorzeń ogólnoustrojowych (anemia, cukrzyca, nadciśnienie, zaburzenia tarczycy) przez skierowanie do specjalisty
• Usunięcie wszystkich czynników predysponujących do zakażenia Candida jamy ustnej
• Promowanie bezpiecznych praktyk seksualnych
• Poradnictwo żywieniowe i dietetyczne (sezonowe i regionalne produkty bogate w składniki odżywcze, witaminy, przeciwutleniacze, unikanie pikantnych/kwaśnych/gorących potraw i napojów)
• Regularny nadzór pod kątem transformacji złośliwej Badania: Ortopantomogram, morfologia krwi, próby wątrobowe, próby nerkowe, lipidogram, hormon przytarczyc, stężenie Ca2+ w surowicy, poziom witaminy D3 w surowicy, poziom elektrolitów w surowicy Wybór miejsca leukoplakii jamy ustnej w badaniu U uczestników z wieloma obszarami zajęcia, niejednorodne i większe zmiany będą wybierane do leczenia i oceny.

Protokół terapii fotodynamicznej:

Protokół przygotowania i aplikacji 2,5% TB jako PS:

Protokół przewiduje aplikację 2,5% TB, przygotowanego zgodnie ze standardowymi procedurami i dostosowaniem proporcji według Epstein i in., na zmiany, przy użyciu końcówek aplikatorów bawełnianych, z marginesem 3 mm od otaczającej zdrowej tkanki i pozostawienie na 5 minut, unikając kontaktu ze śliną przy użyciu wałków bawełnianych, retraktora policzkowego i aparatu ssącego Protokół terapii fotodynamicznej LED u pacjentów z leukoplakią jamy ustnej Sprzęt Źródło światła LED Długość fali 630-660 nm Moc szczytowa 0,04 W/cm2 Fluencja 15 J/cm2 Rozmiar plamki 0,66 cm2 Odległość Wewnątrzustnie: Na powierzchni błony śluzowej jamy ustnej (tryb kontaktowy) Tryb Ciągły, ruch okrężny, nakładający się, zgodnie z ruchem wskazówek zegara w sposób koncentryczny z końcówką LED prostopadłą do powierzchni Czas trwania cyklu 360 sekund na obszarze 1 cm2 zdiagnozowanej zmiany leukoplakii. Cykle na sesję Jeden cykl na sesję Liczba sesji Cztery, jedna sesja/tydzień (@ Dzień 0, 1 tydzień, 2 tygodnie, 3 tygodnie Obszar interwencji Wewnątrzustnie nad zmianą leukoplakii (niejednorodna i większa zmiana ma pierwszeństwo u uczestników z zajęciem wielu miejsc) Czas leczenia 360 sekund/6 minut dla zmiany leukoplakii o wielkości 1 cm2/12 minut dla 2 cm2 Dozymetria i kalibracja urządzenia LED Co miesiąc przy użyciu miernika mocy i spektrometru

Protokół aplikacji miejscowej maści kalcypotriol (0,005%) u pacjentów z leukoplakią jamy ustnej:

Wszystkim pacjentom zostanie pokazane miejsce zmiany leukoplakii i zostanie im zademonstrowana aplikacja miejscowej maści kalcypotriol (0,005%). Pacjentom zaleca się stosowanie maści Cal dwa razy dziennie przez 4 tygodnie po posiłkach.

Kroki w aplikacji miejscowej maści kalcypotriol (0,005%):

Osuszenie miejsca zmiany sterylną gazą Nałożenie środka jako maści za pomocą patyczka bawełnianego Pozostawienie maści na co najmniej 30 minut Unikanie połykania leku Unikanie picia/jedzenia/plucia przez co najmniej 30 minut po aplikacji leku Powtórzenie protokołu uczestnikowi z fizyczną demonstracją na każdej wizycie kontrolnej

Szkolenie operatorów:

Operator i asystent, podający i asystujący w wewnątrzustnej terapii PDT, zostaną przeszkoleni w protokole zgodnie z badaniem.

Monitorowanie terapeutyczne PDT:

Miejsce aplikacji PDT będzie ciągle oceniane pod kątem dyskomfortu, zaostrzenia lub zwiększenia rozmiaru zmiany, owrzodzenia, rumienia, pieczenia, bólu (wzrost wyników NRS NRS≥8) lub reakcji na PS podczas terapii i podczas obserwacji.

Następujące opcje będą rozważane podczas terapii PDT:

Zatrzymanie/Odroczenie leczenia. Uczestnicy będą przepytywani, aby dowiedzieć się o jakichkolwiek działaniach niepożądanych, które mogą odczuwać po rozpoczęciu leczenia PDT.

Monitorowanie terapeutyczne maści kalcypotriol (0,005%):

Miejsce aplikacji kalcypotriolu będzie ciągle oceniane pod kątem dyskomfortu, zaostrzenia lub zwiększenia rozmiaru zmiany, owrzodzenia, rumienia, pieczenia, bólu (wzrost wyników NRS – różnica NRS≥5 od poprzedniej wizyty) lub rozwoju jakiejkolwiek reakcji na kalcypotriol (0,005%) podczas aplikacji i podczas obserwacji.

Następujące opcje będą rozważane podczas terapii kalcypotriolem (0,005%):

Zatrzymanie/Odroczenie jego aplikacji. Uczestnicy będą przepytywani, aby dowiedzieć się o jakichkolwiek działaniach niepożądanych, które mogą odczuwać po aplikacji kalcypotriolu (0,005%).

Odchylenie od protokołu: Jeśli u uczestników wystąpi zaostrzenie lub zwiększenie rozmiaru zmiany, owrzodzenie, rumień, pieczenie, ból (wzrost wyników NRS – różnica NRS≥5 od poprzedniej wizyty) lub reakcja na PS/kalcypotriol (0,005%), zostaną wycofani z badania.

Kiedy/Jeśli u uczestników rozwiną się zmiany podejrzane o nowotworzenie (erozja, owrzodzenie, stwardnienie, wzrost egzofityczny) podczas obserwacji, przejdą biopsję wycinkową w celu wykluczenia zmian złośliwych i będą leczeni zgodnie z instytucjonalnym protokołem dla złośliwych zmian jamy ustnej przez skierowanie do IRCH.

5.6 Dawki leku Wszyscy uczestnicy w trzech grupach otrzymają to samo standardowe konwencjonalne nieinwazyjne leczenie zalecane dla leukoplakii zgodnie z aktualnymi dowodami naukowymi. Miejscowa PDT będzie używać błękitu toluidynowego 2,5% jako fotouczulacza do PDT i będzie stosowana maść kalcypotriol (0,005%).

5.7 Czas trwania leczenia PDT i miejscowa terapia kalcypotriolem będą podawane zgodnie z protokołem wymienionym powyżej. Ponieważ leukoplakia wiąże się z ryzykiem transformacji złośliwej, wszyscy uczestnicy grupy badawczej będą pozostawać pod regularną obserwacją zgodnie ze standardowym protokołem.

5.8. Badania specyficznie związane z projektami

Procedura badania:

Strukturyzowany kwestionariusz zostanie użyty do rejestracji przeszłej historii medycznej, historii obecnej choroby i objawów itp., a następnie kliniczne/fizyczne badanie uczestników w celu zdiagnozowania leukoplakii jamy ustnej zgodnie z klasyfikacją Van der Walla OL.

Ocena kliniczna:

• Badanie zewnątrzustne: Pod kątem owrzodzenia, ropnia, przetoki, blizn, zapalenia zatok przynosowych, porażeń, tików, dystonii, asymetrii twarzy, niedrożności nosa
• Obrzęk twarzy: miejsce, wielkość, kolor, konsystencja, kontur, tkliwość
• Węzły chłonne szyjne: miejsce, wielkość, konsystencja, kontur, tkliwość
• Badanie wewnątrzustne:

Historia białej zmiany Lokalizacja, początek, kolor, tekstura, stwardnienie, postęp, pieczenie, szczękościsk, dysfagia, zła higiena jamy ustnej, czas trwania (miesiące), ból (NRS 0-10), pieczenie (NRS 0-10), krwawienie, obrzęk, kserostomia, ostre zęby, przeszłe leczenia leukoplakii Historia nawyków jamy ustnej: typ, ilość, częstotliwość/dzień, czas trwania w miesiącach, obecny status i okres zaprzestania.

Wszyscy uczestnicy otrzymają krótkie poradnictwo behawioralne dotyczące zaprzestania nawyków zgodnie z wytycznymi krajowymi i protokołem departamentu Badanie wewnątrzustne innych tkanek: Tkanki śluzówkowo-dziąsłowe, zęby, przyzębie, okluzja

Pobranie próbek dla pro-onkogennych cytokin ślinowych IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF przed i po terapii:

Cztery sterylne gąbki oftalmiczne PVA (Merocel) zostaną użyte do pobrania próbek wydzielin jamy ustnej do badania czterech cytokin z błony śluzowej policzków jamy ustnej. Jest to metoda nieinwazyjna i sprawia, że jest specyficzna dla miejsca, co jest zaletą w porównaniu z innymi szacunkami surowicy i śliny. Procedura ta zostanie wykonana przed i po terapii podczas obserwacji. Uczestnicy zostaną poproszeni o powstrzymanie się od jedzenia, picia i płukania ust przez co najmniej 2 godziny przed pobraniem próbki. Gąbki zostaną wstępnie zwilżone sterylnym roztworem soli fizjologicznej, utrzymywane w kontakcie ze zmianą/błoną śluzową policzka bez pocierania lub ruchu przez 1 minutę, a następnie natychmiast przechowywane w sterylnych pojemnikach w -80 °C do dalszej analizy metodą ELISA. Fotograficzny i kliniczny zapis miejsca próbki zostanie zachowany wraz z formularzem pacjenta do przyszłego odniesienia.

Ilościowe oznaczanie poziomów pro-onkogennych cytokin ślinowych (IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF) metodą ELISA (pg/ng na ml) Gąbki oftalmiczne (Merocel) zostaną rozmrożone w temperaturze pokojowej przez 10 min. Gąbki zostaną następnie umieszczone w mikroprobówce odśrodkowej zawierającej filtr 0,2 μm (probówka odśrodkowa SpinX), zrównoważone przez dodanie 300 μl buforu ekstrakcyjnego i inkubowane przez 30 min w 4 °C, a następnie odwirowane w 4 °C przez 30 min przy 14 000 obr./min. Po wirowaniu powstały supernatant zostanie zebrany do ilościowego oznaczania poziomów (IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF) metodą ELISA z użyciem komercyjnie dostępnych zestawów. Supernatant będzie przechowywany w -80 °C do użycia.

Przeciwciało monoklonalne przeciwko antygenom (IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF) zostało wstępnie powleczone na studzienkach dostarczonych pasków mikropłytek. Antygeny obecne w próbce lub standardzie będą inkubowane z płytkami, aby umożliwić wiązanie antygenów z przeciwciałem. Następnie dodane zostanie pierwotne monoklonalne przeciwciało anty-(IL6, TNF-α, PCNA, Survivin i VEGF) odpowiednio sprzężone z biotyną w odpowiednich mikropłytkach. Następnie dodane zostanie przeciwciało awidyna-HRP sprzężone specyficzne dla pierwotnego przeciwciała. Po inkubacji i po przemyciu, aby usunąć niezwiązane przeciwciało enzymatyczne, dodany zostanie reagent substratowy TMB jednoetapowy reagujący z HRP. Rozwój koloru zostanie zatrzymany przez dodanie kwasu, a absorbancja będzie mierzona przy 450 nm. Krzywa odniesienia zostanie uzyskana przez wykreślenie różnych stężeń próbek standardowych w porównaniu z absorbancją, a poziomy antygenów w testowanych próbkach zostaną obliczone na podstawie jego standardowego wykresu.

Zdarzenia niepożądane Ból jamy ustnej: Skala numeryczna oceny bólu (NRS) jest narzędziem przesiewowym bólu, powszechnie używanym do oceny nasilenia bólu w danym momencie przy użyciu skali 0-10, gdzie zero oznacza „brak bólu”, a 10 oznacza „najgorszy możliwy ból”. Pacjent jest proszony o zakreślenie liczby między 0 a 10, która najlepiej pasuje do intensywności bólu. W wielu ustawieniach klinicznych ból jest regularnie oceniany w opiece ambulatoryjnej przy użyciu NRS; te wyniki są rejestrowane w elektronicznej dokumentacji medycznej (EHR) pacjenta, pozwalając badaczom i klinicystom śledzić intensywność bólu w czasie (70). Początkowy wynik NRS zostanie pobrany przy rekrutacji do badania. Kolejne wyniki NRS, a także percepcja pacjenta dotycząca zmiany bólu od ostatniego pomiaru (tj. „dużo mniej”, „trochę mniej”, „mniej więcej tak samo”, „trochę więcej” lub „dużo więcej”) będą rejestrowane na początku i na każdej wizycie protokołu PDT/kalcypotriolu oraz podczas kolejnej obserwacji w dniu 7, 14, 21, 28 i 120 po leczeniu. Każdy wynik NRS będzie dokonywany na nowej, nieoznaczonej skali. Pacjenci nie będą mogli przeglądać swoich poprzednich wyników.

Pieczenie jamy ustnej: Ta sama procedura ze skalą NRS będzie stosowana do oceny pieczenia jamy ustnej Reakcja alergiczna: Wszyscy uczestnicy zostaną poproszeni o natychmiastowe zgłoszenie jakiejkolwiek miejscowej/ogólnoustrojowej reakcji alergicznej powstałej z powodu interwencji, takich jak zaczerwienienie i obrzęk z powodu fotouczulacza błękitu toluidynowego, reakcje błony śluzowej lub skóry z powodu kalcypotriolu, do badacza w dowolnym momencie badania. Interwencje zostaną wycofane, a interwencje naprawcze zostaną rozpoczęte natychmiast, a zdarzenie niepożądane zostanie zarejestrowane i zgłoszone zgodnie z protokołem instytucjonalnym.

Zmiana złośliwa: Każda zmiana w zmianie w miejscu leczenia lub innych obszarach jamy ustnej w dowolnym momencie badania, która jest podejrzana/oczywista dla zmiany złośliwej (owrzodzenie, stwardnienie), przejdzie biopsję i zostanie wycofana z badania po potwierdzeniu Nawrót: Jakiekolwiek ponowne pojawienie się zmiany w miejscu leczenia i oceny vii. Dziennik pacjenta: Rejestracja bólu, pieczenia, statusu nawyków, wielkości zmiany (zwiększenie/zmniejszenie/zanik/nawrót), alergii, zaczerwienienia, obrzęku i pominiętych leków) Wszyscy uczestnicy zostaną poproszeni o rejestrację częstotliwości, czasu trwania i czynników zaostrzających ból i pieczenie. Status nawyku, jego obecne użycie, częstotliwość spożycia, okres zaprzestania również zostaną zarejestrowane w tabeli dostarczonej pacjentom. Pacjent zostanie poinstruowany, aby samodzielnie badał zmianę i jakikolwiek wzrost lub zmniejszenie rozmiaru zostanie odnotowane w tabeli dostarczonej w dzienniku. Wyniki wyjściowe zostaną zarejestrowane przed randomizacją, aby zapobiec błędom w ocenie przez badacza. Wyniki będą rejestrowane na każdej sesji, po leczeniu w 1 tygodniu, 2 tygodniach, 3 tygodniach, 4 tygodniach i 12 tygodniach przez tego samego badacza dla obu grup.

viii. Kryteria wycofania: Jeśli jakikolwiek pacjent wycofa zgodę po rozpoczęciu leczenia/wystąpi reakcja alergiczna/zmiana złośliwa/zaostrzenie bólu i pieczenia, które nie jest kontrolowane przez środki znieczulające, przeciwbólowe, antyseptyczne (NRS ≥ 8), wówczas uczestnik zostanie wycofany z badania.

Analiza statystyczna:

Dane zostaną wprowadzone do arkusza Excel zgodnie z przygotowanym formularzem Charakterystyki wyjściowe będą porównywane między grupami przy użyciu testu chi-kwadrat (zmienne kategorialne) i testu t-Studenta dla prób niezależnych/testu Wilcoxona (zmienne ciągłe). Zarówno analiza zamiaru leczenia, jak i analiza zgodnie z protokołem zostaną przeprowadzone dla wyniku pierwotnego. Wynik pierwotny, wskaźnik całkowitej odpowiedzi, będzie porównywany między grupami przy użyciu testu z dla dwóch proporcji. Test dokładny Fishera zostanie użyty do analizy zdarzeń niepożądanych. Całkowita odpowiedź i czas do nawrotu będą porównywane między grupami przy użyciu krzywej Kaplana-Meiera, a następnie testu log-rank. Wyniki będą przedstawione jako różnica średnich/proporcji z 95% przedziałem ufności, a p<0,05% będzie uznawane za statystycznie istotne.