Um Estudo de Fatores Biológicos, Genéticos e Constitucionais e Monitorização Não Invasiva para Avaliar Riscos Pessoais de Cancro (PRO-ACTIVE)

O estudo observacional consiste numa parte retrospectiva e numa parte prospetiva.

Para a parte retrospectiva, serão selecionados 400 doentes com tumores mamários operados entre 2000 e 2015, dos quais 200 com tumores mamários hereditários e 200 com tumores mamários não hereditários e com as seguintes características clínicas, morfológicas e de classe molecular (luminal A e B, triplos negativos) e estadio comparável.

O tecido tumoral será submetido a investigações imunocitoquímicas para estudar os seguintes parâmetros: angiogénese (CD31), fibroblastos (CD34 e vimentina), macrófagos (CD68) e macrófagos associados ao tumor (M1: CD11c; M2: CD163); células plasmáticas (CD138), linfócitos T (CD8); mastócitos (CD117).

Os dados serão correlacionados com o prognóstico e com o risco de desenvolver cancro da mama hereditário.

A parte prospetiva, por outro lado, prevê o recrutamento de diferentes coortes de doentes que são inicialmente rastreados no WP1.

Serão avaliados 600 doentes conhecidos por cancro da mama (N=200), cancro do ovário (N=200) e cancro colorretal (N=200) candidatos a teste genético germinativo no contexto de uma consulta de oncogenética. Os doentes serão selecionados antes da cirurgia e, se concordarem em participar no estudo, assinarão o consentimento informado num contexto de consulta de oncogenética.

Os doentes selecionados serão submetidos a colheita de sangue (5 ml em tubos EDTA) para extração de ácidos nucleicos (DNA e RNA).

Com base no resultado do teste genético germinativo, os doentes serão classificados em 3 coortes:

• COORTE 2A, sujeitos com hereditariedade (probandos): assume-se a identificação de cerca de 10% (N=60) de probandos dos 600 sujeitos examinados (20 por patologia).
• COORTE 2B, sujeitos identificados por aconselhamento genético como estando em risco de serem portadores de uma síndrome neoplásica hereditária, não comprovada por testes genéticos: uma população de 60 sujeitos, 20 para cada tipo de tumor, com características clínicas semelhantes de idade e fenótipo em comparação com a coorte 2A.
• COORTE 2C, um subgrupo adicional de doentes (N=150), 50 para cada tipo de tumor, com resultados negativos na análise genética diagnóstica. Nos doentes selecionados na coorte 2C, o DNA/RNA será analisado para a identificação de variantes genéticas causadoras em genes que escaparam à investigação diagnóstica de rotina.

Além disso, será selecionada uma coorte adicional de doentes, COORTE 3, que inclui 250 doentes submetidos a tratamento cirúrgico radical e com as seguintes características:

• cancro da mama localmente avançado com fenótipo triplo negativo ou com histologia lobular (N=50);
• carcinoma seroso de alto grau do ovário (N=50);
• melanoma em estadio III (N=50);
• cancro do pulmão de não pequenas células em estadio IIB e IIIA (N=50);
• cancro do cólon com envolvimento ganglionar e invasão vascular (N=50).

Os doentes recrutados nas COORTES 2A, 2B e 3 serão submetidos às seguintes colheitas de sangue para o WP2:

• 20 ml em tubos Cell-Free DNA BCT® CE (Streck) para análise de ctDNA. As amostras são centrifugadas a 1600 (±150) g durante 10 minutos à temperatura ambiente. Após centrifugação, o plasma é submetido a uma centrifugação adicional durante 10 minutos a 3000 (±150) g.
• 20 ml em tubos Cell Save para isolamento de CTCs.
• 30 ml para o estudo de populações imunes circulantes (WP3). Além disso, o tecido tumoral colhido durante a fase cirúrgica será recolhido e analisado no WP4 e para o estudo do microambiente com técnicas de "Next Generation Sequencing" aplicadas ao tumor como um todo e ao nível da célula única e às populações imunes (TILs).