Biomarcadores fetais de estresse materno crônico durante a gravidez (FELICITy)

Justificativa:

Uma coorte da população de mulheres que frequentam o centro de perinatologia do Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Klinikum rechts der Isar da Technische Universität München (TUM) para dar à luz cairá no grupo de pessoas com níveis de estresse percebidos mais altos que podem carregam concomitantemente fetos que mostram atividade simpática e vagal alterada.

Design experimental:

Este estudo será realizado no Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Klinikum rechts der Isar da Technische Universität München (TUM) um centro terciário de Perinatologia de alta complexidade localizado em Munique, Alemanha e que atende cerca de 2000 mães/recém-nascidos por ano. Os obstetras da TUM identificarão os sujeitos prospectivos de acordo com os critérios de inclusão do estudo, consistindo em gestantes únicas entre 18 e 45 anos de idade no terceiro trimestre (pelo menos 28 semanas de gestação) e sem a) alterações placentárias graves; b) malformações fetais; c) doença materna grave durante a gravidez (i.e. pré-clâmpsia), d) abuso materno de drogas ou álcool, e) parto prematuro (menos de 37 semanas) e f) pH do cordão umbilical

Os participantes potenciais serão encaminhados para uma sessão informativa, quando os procedimentos serão explicados, a inscrição formal será concluída e os formulários de consentimento dos próprios participantes e o consentimento dos pais para seus bebês serão obtidos. Esses protocolos estão em estrita conformidade com o Comitê de Princípios Éticos para Pesquisa Médica da TUM e tem a aprovação do Comitê de Ética do Hospital " Klinikum rechts der Isar". Após a aceitação, os participantes entrarão na Fase I-IV.

Fase I: Triagem:

Nesta fase inicial, os investigadores irão coletar informações demográficas de mulheres consentidas e as participantes serão categorizadas como estressadas ou controles após pontuar a Escala de Estresse Percebido de Cohen-10 (PSS-10). Este questionário mede o grau em que as situações na vida de uma pessoa são avaliadas como estressantes e é um instrumento psicológico amplamente utilizado para medir o estresse percebido inespecífico. O PSS prevê marcadores biológicos objetivos de estresse e aumento do risco de doenças entre pessoas com níveis de estresse percebidos mais altos. Em particular, os escores PSS foram usados ​​para relacionar estresse pré-natal, ansiedade e sintomas depressivos como preditores de intenção de amamentar e para examinar correlatos de estresse percebido em mulheres grávidas. O aumento do estresse pré-natal materno, medido como PSS e ansiedade, foi associado à variação temperamental de bebês e pode representar um fator de risco para psicopatologia mais tarde na vida. O PSS-10 foi validado em populações de língua alemã e será uma ferramenta rápida para triagem de estresse entre indivíduos em potencial. Para os propósitos do estudo atual, um participante com pontuação PSS-10 ≥19 será classificado como estressado e entrará na Fase II. Para cada sujeito consentido classificado como estressado, o próximo participante rastreado correspondente para idade materna e gestacional com pontuação PSS-10 < 19 entrará na Fase II como controle. O recrutamento continuará até atingir a coorte pretendida de n=75 indivíduos/grupo.

Fase II: Avaliação psicológica materna e registros pré-natais fetais:

1. Questionários: No contexto, os participantes inscritos que entrarem nesta fase serão solicitados a preencher um questionário de autoavaliação amplamente utilizado e validado para avaliar as preocupações relacionadas à gravidez. Os participantes terão que preencher o Prenatal Distress Questionnaire (PDQ-12) projetado para avaliar preocupações e preocupações específicas relacionadas à gravidez e inclui itens sobre preocupações relacionadas a problemas médicos, sintomas físicos, paternidade, relacionamentos, mudanças corporais, trabalho de parto e parto, e o saúde do bebê. Este instrumento foi previamente aplicado em numerosos estudos envolvendo mulheres grávidas de diversas origens culturais e socioeconômicas e é um instrumento eficaz para avaliar o estresse relacionado à gravidez. O PDQ-12 foi traduzido para o alemão e validado. Além disso, os participantes preencherão um questionário sobre seu nível de escolaridade, situação socioeconômica, etnia e história clínica.
2. Avaliação do ANS: Durante a mesma visita, a frequência cardíaca fetal (FCF) será medida por uma cardiotocografia (CTG) de rotina e simultaneamente por eletrocardiografia transabdominal (ECG transabdominal-fetal). O sinal eletrofisiológico contém o ECG materno (mECG), o ECG fetal (fECG) e o ruído, será registrado por meio de 5 eletrodos descartáveis. Os cinco eletrodos descartáveis ​​serão colocados no abdome materno de forma padronizada. Antes de colocar os eletrodos, a impedância da pele será reduzida usando papel abrasivo no local de colocação do eletrodo. Os dados serão analisados ​​off-line após o download do computador. Caso a perda de sinal seja alta com o método fECG, que é um problema conhecido (mais frequente entre 28 a 32 semanas de gestação, mas também pode ocorrer após esse período), a CTG externa convencional será realizada simultaneamente usando um transdutor de ultrassom colocado no Abdômen materno. Os investigadores analisarão o impacto do PS na atividade do ANS, implantando métodos avançados de monitoramento da FCF: média de sinais retificados por fase (PRSA), análise multidimensional da variabilidade da FCF e avaliação da sincronização da frequência cardíaca materno-fetal, registros FECG, bem como registros CTG serão realizado uma vez durante a gravidez por pelo menos 40 minutos para obter o status da atividade fetal. Durante o trabalho de parto CTG convencional e, se possível, fECG e mECG serão realizados simultaneamente.

Fase III: Entrega:

1. Avaliação do cortisol materno: O cortisol, o produto hormonal da ativação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA), foi sugerido como um mecanismo potencial que liga o estresse materno e o resultado perinatal. Amostras únicas de sangue e/ou saliva fornecem uma medida em um único ponto no tempo e, considerando suas principais flutuações fisiológicas diárias, podem não ser a medida mais informativa para avaliar a atividade HPA geral ou de longo prazo durante o período pré-natal. Recentemente, o uso de medições de cortisol no cabelo demonstrou que fornece um índice retrospectivo da secreção integrada de cortisol em períodos de vários meses . Postula-se que o cortisol é incorporado ao cabelo emergente e cresce lentamente com ele. Portanto, presume-se que a quantidade de cortisol em um segmento de cabelo específico reflita a concentração sistêmica integrada de hormônio esteróide durante um período de crescimento de um segmento de cabelo específico. Cabelo e cortisol salivar são altamente correlacionados em primatas não humanos e foi demonstrado aumento das concentrações de cortisol no cabelo em mulheres grávidas. Portanto, o cortisol do cabelo tem o potencial de servir como uma medida integrada da atividade do HPA por um período prolongado de até 3-6 meses. No dia do parto, fios de cabelo (~ 3 mm de diâmetro) serão coletados da região do vértice posterior da cabeça o mais próximo possível do couro cabeludo, conforme recomendado pela Society of Hair Testing (Soc of Hair testing, 1997). Com base em uma taxa de crescimento capilar aproximada de 1 cm por mês, presume-se que o segmento proximal de 3 cm de comprimento do cabelo reflita a secreção hormonal integrada durante o período de três meses antes da amostragem. A amostra de cabelo de 3 cm será embrulhada em papel alumínio para proteção e armazenada em temperatura ambiente. Amostras de cabelo serão enviadas para dosagem de cortisol.
2. Coleta de sangue materno (não faz parte deste estudo - o sangue será armazenado no biobanco): No máximo 20 ml serão coletados para fornecer amostras de soro e plasma. As amostras de sangue serão armazenadas em frascos de criotubo marcados de 2-4 x 1,8 ml após um ciclo de centrifugação para amostras de soro (2750 rpm x 10 min à temperatura ambiente) e armazenadas a -80 °C e após 10 inversões suaves para amostras de plasma e armazenadas a -20°C. As amostras de sangue serão processadas e congeladas dentro de 2-4 h. O intervalo de tempo entre a coleta e o congelamento será registrado para todas as amostras.
3. Amostras de sangue do cordão umbilical: Uma vez que o bebê nasce e antes da separação da placenta, o cordão é clampeado e as amostras de sangue do cordão umbilical serão coletadas e distribuídas em dois tubos para amostras de soro e plasma seguindo o mesmo procedimento detalhado acima. Uma terceira amostra será coletada em um tubo PAXgene, cuidadosamente invertido 10 vezes e deixado à temperatura ambiente por 5 hs na posição vertical. Os tubos serão então armazenados a -80 °C após 10-16 hs a -20 °C. (a amostra PAXgene não faz parte deste estudo - o sangue será armazenado no biobanco)
4. Amostras de placenta (que não fazem parte deste estudo - as amostras serão armazenadas no biobanco): Assim que a placenta for expelida, o lado materno será dissecado. Serão realizadas duas biópsias (aproximadamente 1 cm³) evitando a contaminação da decídua. As amostras são colocadas em frascos Cryotube e armazenadas imediatamente a -20 °C.
5. Gravações de recém-nascidos: Logo após o nascimento, uma parteira especializada em neonatais coletará amostras de saliva/bucal dos recém-nascidos esfregando suavemente as gengivas em ambos os lados com a esponja do kit Oracollect-DNA (DNA Genotek, Canadá) e armazenadas em RT. Os dados clínicos, incluindo pH corporal e pontuação APGAR, serão registrados.

Fase IV: Registros pós-natais:

Dando sequência à coorte recrutada na fase I e espelhando o estudo de neurodesenvolvimento animal, realizaremos um estudo longitudinal para explorar a viabilidade de medir biomarcadores de reprogramação epigenética induzida por PS.

1. Avaliação do desenvolvimento infantil: Na fase final do estudo, a mãe será solicitada a preencher um questionário final para avaliar a depressão pós-parto e amamentação que ela receberá pelo correio. Embora o estudo atual esteja focado em eventos pré-natais, os cuidados pós-natais iniciais são fortemente afetados pela depressão materna e podem alterar a reprogramação epigenética do cérebro infantil. Portanto, o nível de envolvimento materno nos cuidados infantis durante os primeiros meses pode afetar diretamente o estado de metilação e será registrado. As mães serão questionadas sobre rotinas de alimentação e cuidados para completar a avaliação pós-natal.
2. O desenvolvimento cognitivo dos bebês será avaliado pela Bayley Scale III of Infant development (BSID) aos 18 meses de idade. O BSID é composto por uma série de testes destinados a avaliar o desenvolvimento cognitivo, motor e comportamental de lactentes de 0 a 3 anos de idade. Os componentes Índice de Desenvolvimento Mental e Índice de Desenvolvimento Psicomotor têm pontuação média de 100 e desvio padrão de 15 (variando de 55 a 145). Pontuações entre 70-84 indicam desempenho levemente atrasado e pontuações ≤ 69 indicam desempenho significativamente atrasado. Espera-se que aproximadamente 13,5% dos bebês testados caiam nessas categorias. Sofrimento psicológico materno durante a gravidez foi associado de maneira dose-resposta com escores BSID em crianças de 2 anos de idade. Um Psicólogo especializado, cego quanto à categorização do estresse materno, administrará os testes, que terão duração aproximada de 40 minutos.
3. Uma nova amostra de saliva será coletada dos bebês nesta visita final. Os biomarcadores serão quantificados a partir do DNA salivar obtido dos lactentes. O ECG será medido para avaliação do SNA. Os níveis de metilação serão correlacionados com o estresse materno, depressão e ansiedade, com o desenvolvimento cognitivo do bebê e a capacidade do SNA para avaliar a eficácia desses novos biomarcadores.