Äidin kroonisen stressin sikiön biomarkkerit raskauden aikana (FELICITy)

Perustelut:

Osa naisista, jotka käyvät synnytyksen vuoksi synnytyksen vuoksi synnytyksen vuoksi synnytys- ja gynekologian laitoksen synnytys- ja gynekologian klinikan Klinikum rechts der Isarissa, kuuluvat niihin henkilöihin, joilla on korkeampi stressitaso, joka saattaa kantavat samanaikaisesti sikiöitä, joilla on muuttunut sympaattinen ja vagaalinen toiminta.

Kokeellinen suunnittelu:

Tämä tutkimus tehdään synnytys- ja gynekologian osastolla Technische Universität Münchenin (TUM) Klinikum rechts der Isarissa, korkea-asteen perinatologian korkea-asteen keskuksessa Münchenissä, Saksassa ja joka palvelee noin 2000 äitiä/vastasyntynyttä vuodessa. TUM- synnytyslääkärit tunnistavat mahdolliset koehenkilöt tutkimukseen osallistumiskriteerien mukaisesti, mikä on johdonmukaista 18–45-vuotiaille yksinäisille raskaana oleville naisille kolmannella kolmanneksella (vähintään 28 raskausviikkoa) ja ilman a) vakavia istukan muutoksia; b) sikiön epämuodostumat; c) äidin vakava sairaus raskauden aikana (esim. prelampsia), d) äidin huumeiden tai alkoholin väärinkäyttö, e) ennenaikainen synnytys (alle 37 viikkoa) ja f) napanuoraveren pH

Mahdolliset osallistujat ohjataan osallistumaan tiedotustilaisuuteen, jossa menettelyt selitetään, virallinen ilmoittautuminen saatetaan päätökseen ja hankitaan osallistujien suostumuslomakkeet sekä lasten vanhempien suostumus. Nämä protokollat ​​ovat tiukasti TUM:n lääketieteellisen tutkimuksen eettisten periaatteiden komitean mukaisia ​​ja niillä on sairaalan Klinikum rechts der Isar eettisen komitean hyväksyntä. Hyväksyttyään osallistujat siirtyvät vaiheeseen I-IV.

Vaihe I: Seulonta:

Tässä alkuvaiheessa tutkijat keräävät demografisia tietoja hyväksytyiltä naisilta, ja osallistujat luokitellaan stressaantuneiksi tai kontrolloiduiksi Cohenin koetun stressin asteikon 10 (PSS-10) pisteytyksen jälkeen. Tämä kyselylomake mittaa sitä, missä määrin elämäntilanteita arvioidaan stressaaviksi, ja se on laajalti käytetty psykologinen instrumentti epäspesifisen koetun stressin mittaamiseen. PSS ennustaa stressin objektiivisia biologisia markkereita ja lisääntynyttä sairausriskiä henkilöillä, joilla on korkeampi stressitaso. Erityisesti PSS-pisteitä käytettiin vertaamaan synnytystä edeltävää stressiä, ahdistusta ja masennusoireita imetysaikomusten ennustamiseen ja raskaana olevien naisten koetun stressin korrelaatioiden tutkimiseen. Äidin lisääntynyt prenataalinen stressi, mitattuna PSS:nä ja ahdistuneisuutena, liittyi nuorten imeväisten temperamenttiseen vaihteluun ja voi olla riskitekijä psykopatologialle myöhemmässä elämässä. PSS-10 on validoitu saksankielisissä väestönosissa, ja se on nopea työkalu mahdollisten koehenkilöiden stressin seulomiseen. Tässä tutkimuksessa osallistuja, jonka PSS-10-pistemäärä on ≥19, luokitellaan stressaantuneeksi ja siirtyy vaiheeseen II. Jokaisesta stressaantuneeksi luokitellusta koehenkilöstä seuraava seulottu osallistuja, joka vastaa äidin ja raskauden ikää ja jonka PSS-10-pistemäärä on < 19, viedään vaiheeseen II kontrollina. Rekrytointia jatketaan, kunnes saavutetaan tavoitekohortti n=75 kohdetta/ryhmä.

Vaihe II: Äidin psykologinen arviointi ja sikiön synnytystä edeltävät tallenteet:

1. Kyselylomakkeet: Tässä vaiheessa osallistujia, jotka osallistuvat tähän vaiheeseen, pyydetään täyttämään laajalti käytetty ja validoitu itsearviointilomake raskauteen liittyvien huolenaiheiden arvioimiseksi. Osallistujien on täytettävä Prenatal Distress Questionnaire (PDQ-12), joka on suunniteltu arvioimaan erityisiä raskauteen liittyviä huolia ja huolenaiheita, ja se sisältää kysymyksiä, jotka koskevat lääketieteellisiä ongelmia, fyysisiä oireita, vanhemmuutta, ihmissuhteita, kehon muutoksia, synnytystä ja synnytystä. vauvan terveyttä. Tätä instrumenttia on aiemmin käytetty lukuisissa tutkimuksissa, joissa on ollut mukana raskaana olevia naisia ​​erilaisista kulttuurisista ja sosioekonomisista taustoista, ja se on tehokas väline raskauteen liittyvän stressin arvioinnissa. PDQ-12 on käännetty saksaksi ja validoitu. Lisäksi osallistujat täyttävät kyselyn koulutustasostaan, sosioekonomisesta tilanteestaan, etnisestä taustastaan ​​ja kliinisestä historiastaan.
2. ANS-arviointi: Saman käynnin aikana sikiön syke (FHR) mitataan rutiininomaisella kardiotokografialla (CTG) ja samanaikaisesti transabdominaalisella elektrokardiografialla (transabdominaal-sikiön EKG). Sähköfysiologinen signaali sisältää äidin EKG:n (mECG), sikiön EKG:n (fECG) ja kohinan, se tallennetaan 5 kertakäyttöelektrodilla. Viisi kertakäyttöistä elektrodia asetetaan äidin vatsalle standardoidulla tavalla. Ennen elektrodien asettamista ihon impedanssia pienennetään käyttämällä hiomapaperia elektrodien sijoituskohdassa. Tiedot analysoidaan offline-tilassa tietokoneelle latauksen jälkeen. Jos signaalihäviö on suuri fECG-menetelmällä, mikä on tunnettu ongelma (useammin 28-32 raskausviikolla, mutta saattaa esiintyä myös tämän ajanjakson jälkeen), tavanomainen ulkoinen CTG suoritetaan samanaikaisesti käyttämällä ultraäänianturia, joka on asetettu äidin vatsa. Tutkijat analysoivat PS:n vaikutusta ANS-toimintaan ottamalla käyttöön kehittyneitä FHR-seurannan menetelmiä: vaihekorjattu signaalin keskiarvolaskenta (PRSA), moniulotteinen FHR-vaihteluanalyysi sekä äidin ja sikiön sykesynkronoinnin FECG-rekisteröintien sekä CTG-rekisteröintien arviointi. suoritetaan kerran raskauden aikana vähintään 40 minuutin ajan sikiön aktiivisuuden tilan saamiseksi. Synnytyksen aikana suoritetaan tavanomainen CTG ja mahdollisuuksien mukaan fECG ja mECG samanaikaisesti.

Vaihe III: Toimitus:

1. Äidin kortisolin arviointi: Kortisolia, hypotalamus-aivolisäke-lisämunuaisen (HPA) -akselin aktivoitumisen hormonaalista tuotetta, on ehdotettu mahdolliseksi mekanismiksi, joka yhdistää äidin stressin ja perinataalisen lopputuloksen. Yksittäiset veri- ja/tai sylkinäytteet tarjoavat mittaustuloksen yhdellä hetkellä, ja ottaen huomioon sen suuret fysiologiset päivittäiset vaihtelut, ne eivät välttämättä ole informatiivisin mittari yleisen tai pitkän aikavälin HPA-aktiivisuuden arvioimiseksi synnytystä edeltävänä aikana. Hiusten kortisolimittausten käyttö osoitti äskettäin, että se tarjoaa retrospektiivisen indeksin integroidusta kortisolin erittymisestä useiden kuukausien aikana. Oletuksena on, että kortisoli sisällytetään esiin nouseviin hiuksiin ja kasvaa hitaasti sen mukana. Siksi kortisolin määrän tietyssä hiussegmentissä oletetaan heijastavan integroitua systeemistä steroidihormonipitoisuutta tietyn hiussegmentin kasvujakson aikana. Hiusten ja syljen kortisoli korreloivat vahvasti kädellisillä, ja raskaana olevien naisten hiusten kortisolipitoisuuksien on osoitettu lisääntyneen. Siksi hiusten kortisoli voi toimia integroituna HPA-aktiivisuuden mittana jopa 3-6 kuukauden ajan. Synnytyspäivänä hiussäikeet (halkaisija ~ 3 mm) kerätään pään takaverkon alueelta mahdollisimman läheltä päänahkaa, kuten Society of Hair Testing (Soc of Hair testing, 1997) suosittelee. Perustuen likimääräiseen hiusten kasvunopeuteen 1 cm kuukaudessa, proksimaalisen 3 cm:n pituisen hiussegmentin oletetaan heijastavan integroitua hormonieritystä kolmen kuukauden aikana ennen näytteenottoa. 3 cm hiusnäyte kääritään suojaksi alumiinifolioon ja säilytetään huoneenlämmössä. Hiusnäytteet lähetetään kortisolimääritykseen.
2. Äidin verenotto (ei osa tätä tutkimusta – verta säilytetään biopankissa): Enintään 20 ml kerätään seerumi- ja plasmanäytteiden saamiseksi. Verinäytteet säilytetään 2–4 x 1,8 ml:n leimatuissa Cryotube-pulloissa yhden seeruminäytteiden sentrifugointisyklin jälkeen (2750 rpm x 10 min huoneenlämpötilassa) ja säilytetään -80 °C:ssa ja plasmanäytteiden 10 kevyen kääntämisen jälkeen ja säilytetään -20 °C. Verinäytteet käsitellään ja pakastetaan 2-4 tunnin kuluessa. Keräyksen ja pakastamisen välinen aika kirjataan kaikille näytteille.
3. Napanuoraverinäytteet: Kun vauva on syntynyt ja ennen istukan irtoamista, napanuora kiinnitetään ja napanuoraverinäytteet otetaan ja jaetaan kahteen putkeen seerumi- ja plasmanäytteitä varten noudattaen samaa menettelyä, joka on kuvattu yllä. Kolmas näyte kerätään PAXgene-putkeen, käännetään varovasti ylösalaisin 10 kertaa ja jätetään huoneenlämpötilaan 5 tunniksi pystyasennossa. Putket säilytetään sitten -80 °C:ssa 10-16 tunnin kuluttua -20 °C:ssa. (PAXgene-näyte ei ole osa tätä tutkimusta - veri varastoidaan biopankkiin)
4. Istukkanäytteet (ei kuulu tähän tutkimukseen – näytteet säilytetään biopankissa): Kun istukka on luovutettu, äidin puoli leikataan. Otetaan kaksi biopsiaa (noin 1 cm³), jotta vältetään decidua-kontaminaatio. Näytteet laitetaan Cryotube-pulloihin ja säilytetään välittömästi -20 °C:ssa.
5. Vastasyntyneiden tallenteet: Pian syntymän jälkeen vastasyntyneiden erikoistunut kätilö ottaa sylki-/bukkaalinäytteet vastasyntyneiltä hieromalla varovasti ikeniä molemmilta puolilta Oracollect-DNA-sarjan (DNA Genotek, Kanada) sienellä ja säilytetään huoneenlämpötilassa. Kliiniset tiedot, mukaan lukien kehon pH ja APGAR-pisteet, tallennetaan.

Vaihe IV: Synnytyksen jälkeiset tallenteet:

Jatkamme vaiheessa I rekrytoitua kohorttia ja peilaamme hermoston kehitystä koskevaa eläintutkimusta, teemme pitkittäistutkimuksen tutkiaksemme mahdollisuutta mitata PS-indusoidun epigeneettisen uudelleenohjelmoinnin biomarkkereita.

1. Vauvan kehityksen arviointi: Tutkimuksen viimeisessä vaiheessa äitiä pyydetään täyttämään lopullinen kysely, jossa hän saa postitse postitse synnytyksen jälkeisen masennuksen ja imetyksen arvioimiseksi. Vaikka nykyinen tutkimus keskittyy synnytystä edeltäviin tapahtumiin, äidin masennus vaikuttaa voimakkaasti varhaiseen synnytyksen jälkeiseen hoitoon, ja se voi muuttaa vauvan aivojen epigeneettistä uudelleenohjelmointia. Siksi äitien lastenhoitoon osallistumisen taso ensimmäisten kuukausien aikana saattaa vaikuttaa suoraan metylaatiostatukseen, ja se kirjataan. Äideiltä kysytään rutiini- ja hoitorutiineja synnytyksen jälkeisen hoidon arvioinnin suorittamiseksi.
2. Imeväisten kognitiivinen kehitys arvioidaan Bayley Scale III of Infant Development (BSID) -asteella 18 kuukauden iässä. BSID koostuu sarjasta testejä, joiden tarkoituksena on arvioida 0–3-vuotiaiden vauvojen kognitiivista, motorista ja käyttäytymiskehitystä. Mielenkehitysindeksin ja psykomotorisen kehityksen indeksin komponenttien keskimääräinen pistemäärä on 100 ja keskihajonta 15 (alue 55-145). Pisteet välillä 70-84 osoittavat lievästi viivästyneen suorituskyvyn ja pisteet ≤ 69 osoittavat merkittävästi viivästynyttä suorituskykyä. Noin 13,5 prosentin testatuista vauvoista odotetaan kuuluvan näihin luokkiin. Äidin psykologinen ahdistus raskauden aikana yhdistettiin annos-vaste-tavalla BSID-pisteisiin 2-vuotiailla lapsilla. Testit, jotka kestävät noin 40 minuuttia, suorittaa erikoispsykologi, joka on sokea äidin stressin luokittelun suhteen.
3. Tällä loppukäynnillä vauvoista otetaan uusi sylkinäyte. Biomarkkerit kvantifioidaan nuorilta imeväisiltä saadusta syljen DNA:sta. EKG mitataan ANS-arviointia varten. Metylaatiotasot korreloivat äidin stressin, masennuksen ja ahdistuksen, vauvan kognitiivisen kehityksen ja ANS-kyvyn kanssa arvioida näiden uusien biomarkkerien tehokkuutta.