Fetální biomarkery chronického mateřského stresu během těhotenství (FELICITy)

Odůvodnění:

Kohorta populace žen navštěvujících perinatologické centrum Porodnicko-gynekologické kliniky Klinikum rechts der Isar Technische Universität München (TUM) kvůli porodu bude spadat do skupiny osob s vyšší mírou vnímaného stresu, která by mohla současně nesou plody, které vykazují změněnou aktivitu sympatiku a vagu.

Experimentální design:

Tato studie bude provedena na Porodnické a gynekologické klinice na Klinikum rechts der Isar Technische Universität München (TUM), což je terciární centrum perinatologie vysoké složitosti se sídlem v Mnichově v Německu, které slouží přibližně 2000 matkám/novorozencům ročně. Porodníci TUM identifikují potenciální pacientky podle zařazovacích kritérií studie, konzistentně s ojedinělými těhotnými ženami ve věku 18 až 45 let v jejich třetím trimestru (alespoň 28 týdnů gestace) a bez a) závažných změn placenty; b) malformace plodu; c) závažné onemocnění matky během těhotenství (tj. preklampsie), d) zneužívání drog nebo alkoholu matkou, e) předčasný porod (méně než 37 týdnů) a f) pH pupečníkové krve

Potenciální účastníci budou doporučeni k účasti na informační schůzce, kde budou vysvětleny postupy, dokončena formální registrace a budou získány formuláře souhlasu od samotných účastníků a souhlas rodičů pro jejich děti. Tyto protokoly jsou v přísném souladu s Výborem etických zásad pro lékařský výzkum z TUM a jsou schváleny Etickou komisí nemocnice „Klinikum rechts der Isar“. Po přijetí účastníci vstoupí do fáze I-IV.

Fáze I: Screening:

V této počáteční fázi budou vyšetřovatelé shromažďovat demografické informace od souhlasných žen a účastnice budou kategorizovány jako stresované nebo kontrolní po vyhodnocení Cohenovy škály vnímání stresu-10 (PSS-10). Tento dotazník měří míru, do jaké jsou situace v životě hodnoceny jako stresující, a je široce používaným psychologickým nástrojem k měření nespecifického vnímaného stresu. PSS předpovídá objektivní biologické markery stresu a zvýšené riziko onemocnění u osob s vyšší úrovní vnímaného stresu. Zejména skóre PSS bylo použito ke spojení prenatálního stresu, úzkosti a depresivních symptomů jako prediktorů úmyslu kojit a ke zkoumání korelátů vnímaného stresu u těhotných žen. Zvýšený prenatální stres matky, měřený jako PSS a úzkost, byl spojen s temperamentovými variacemi malých kojenců a může představovat rizikový faktor pro psychopatologii později v životě. PSS-10 byl ověřen v německy mluvící populaci a bude rychlým nástrojem pro screening stresu mezi potenciálními subjekty. Pro účely této studie bude účastník se skóre PSS-10 ≥19 kategorizován jako stresovaný a zařazen do fáze II. U každého schváleného subjektu kategorizovaného jako stresovaný bude další vyšetřovaný účastník odpovídající mateřskému a gestačnímu věku se skóre PSS-10 < 19 zařazen do fáze II jako kontrola. Nábor bude pokračovat až do dosažení cílové kohorty n=75 subjektů/skupinu.

Fáze II: Psychologické vyšetření matky a prenatální záznamy plodu:

1. Dotazníky: V kontextu zapsaných účastnic vstupujících do této fáze budou požádány, aby vyplnily široce používaný a ověřený sebehodnotící dotazník za účelem posouzení obav souvisejících s těhotenstvím. Účastníci budou muset vyplnit Dotazník prenatální tísně (PDQ-12) navržený tak, aby zhodnotil specifické obavy a obavy týkající se těhotenství a obsahuje položky týkající se zdravotních problémů, fyzických příznaků, rodičovství, vztahů, tělesných změn, porodu a porodu. zdraví miminka. Tento nástroj byl dříve použit v mnoha studiích zahrnujících těhotné ženy z různých kulturních a socioekonomických prostředí a je účinným nástrojem pro hodnocení stresu souvisejícího s těhotenstvím. PDQ-12 byl přeložen do němčiny a byl ověřen. Účastníci navíc vyplní dotazník o úrovni svého vzdělání, socioekonomické situaci, etnické příslušnosti a klinické historii.
2. Hodnocení ANS: Během stejné návštěvy bude měřena fetální srdeční frekvence (FHR) rutinní kardiotokografií (CTG) a současně transabdominální elektrokardiografií (transabdominálně-fetální EKG). Elektrofyziologický signál obsahuje mateřské EKG (mECG), fetální EKG (fECG) a šum, bude zaznamenáván pomocí 5 jednorázových elektrod. Pět jednorázových elektrod bude umístěno na břicho matky standardizovaným způsobem. Před umístěním elektrod bude impedance kůže snížena použitím brusného papíru v místě umístění elektrody. Data budou analyzována off-line po stažení počítače. Pro případ, že u metody fECG je ztráta signálu vysoká, což je známý problém (častější mezi 28. až 32. gestačním týdnem, ale může se vyskytnout i po tomto období), bude současně provedeno konvenční externí CTG pomocí ultrazvukového snímače umístěného na mateřské břicho. Vyšetřovatelé budou analyzovat dopad PS na aktivitu ANS nasazením pokročilých metod monitorování FHR: fázově rektifikované průměrování signálu (PRSA), multidimenzionální analýza variability FHR a hodnocení synchronizace srdeční frekvence matky a plodu FECG registrace a také CTG registrace. provádí se jednou během těhotenství po dobu alespoň 40 minut, aby se zjistil stav aktivity plodu. Během porodu bude současně prováděno konvenční CTG a pokud možno fEKG a mEKG.

Fáze III: Dodání:

1. Hodnocení mateřského kortizolu: Kortizol, hormonální produkt aktivace osy hypotalamus-hypofýza-nadledviny (HPA) byl navržen jako potenciální mechanismus spojující stres matky a perinatální výsledek. Jednotlivé vzorky krve a/nebo slin poskytují měření v jediném okamžiku a vzhledem k jeho hlavním fyziologickým denním výkyvům nemusí být nejinformativnějším měřítkem pro hodnocení celkové nebo dlouhodobé aktivity HPA během prenatálního období. Nedávno použití měření vlasového kortizolu ukázalo, že poskytuje retrospektivní index integrované sekrece kortizolu po dobu několika měsíců. Předpokládá se, že kortizol je začleněn do vznikajících vlasů a pomalu s nimi roste. Proto se předpokládá, že množství kortizolu v konkrétním vlasovém segmentu odráží integrovanou systémovou koncentraci steroidního hormonu během růstového období konkrétního vlasového segmentu. Vlasový a slinný kortizol vysoce korelují u subhumánních primátů a bylo prokázáno zvýšené koncentrace vlasového kortizolu u těhotných žen. Proto má vlasový kortizol potenciál sloužit jako integrované měřítko aktivity HPA po delší dobu až 3-6 měsíců. V den porodu se odeberou prameny vlasů (průměr ~3 mm) z oblasti zadního vertexu na hlavě co nejblíže k pokožce hlavy, jak to doporučuje Society of Hair Testing (Soc of Hair testing, 1997). Na základě přibližné rychlosti růstu vlasů 1 cm za měsíc se předpokládá, že proximální 3 cm dlouhý segment vlasů odráží integrovanou sekreci hormonu po dobu tří měsíců před odběrem vzorků. Vzorek vlasů o délce 3 cm bude pro ochranu zabalen do hliníkové fólie a uložen při pokojové teplotě. Vzorky vlasů budou zaslány na stanovení kortizolu.
2. Odběr mateřské krve (není součástí této studie – krev bude uložena v biobance): Pro poskytnutí vzorků séra a plazmy bude odebráno maximálně 20 ml. Vzorky krve budou uchovávány ve 2-4 x 1,8 ml označených lahvičkách Cryotube po jednom cyklu centrifugace pro vzorky séra (2750 ot./min x 10 min při teplotě místnosti) a skladovány při -80 °C a po 10 jemných převráceních pro vzorky plazmy a skladovány při -20 °C. Vzorky krve budou zpracovány a zmrazeny během 2-4 hodin. U všech vzorků bude zaznamenán časový interval mezi odběrem a zmrazením.
3. Vzorky pupečníkové krve: Jakmile je dítě narozeno a před separací placenty, pupeční šňůra se upne a vzorky pupečníkové krve budou odebrány a rozděleny do dvou zkumavek pro vzorky séra a plazmy podle stejného postupu, jak je podrobně popsáno výše. Třetí vzorek bude odebrán do zkumavky PAXgene, opatrně 10krát převrácen a ponechán při teplotě místnosti po dobu 5 hodin ve svislé poloze. Zkumavky pak budou skladovány při -80 °C po 10-16 hodinách při -20 °C. (vzorek PAXgene není součástí této studie – krev bude uložena v biobance)
4. Vzorky placenty (není součástí této studie – vzorky budou uloženy v biobance): Po dodání placenty bude mateřská strana vypreparována. Budou odebrány dvě biopsie (přibližně 1 cm³), aby se zabránilo kontaminaci decidua. Vzorky se umístí do lahviček Cryotube a okamžitě se skladují při -20 °C.
5. Záznamy novorozenců: Specializovaná porodní asistentka pro novorozence brzy po porodu odebere novorozencům vzorky slin/bukální tkáně jemným třením dásní na obou stranách houbičkou soupravy Oracollect-DNA (DNA Genotek, Kanada) a uloží je při RT. Budou zaznamenána klinická data včetně tělesných metrik pH a skóre APGAR.

Fáze IV: Postnatální nahrávky:

V návaznosti na kohortu přijatou ve fázi I a odrážející neurovývojovou studii na zvířatech provedeme longitudinální studii, abychom prozkoumali proveditelnost měření biomarkerů epigenetického přeprogramování vyvolaného PS.

1. Hodnocení vývoje kojence: V závěrečné fázi studie bude matka požádána, aby vyplnila závěrečný dotazník k posouzení poporodní deprese a kojení, který obdrží poštou. Zatímco současná studie je zaměřena na prenatální události, raná postnatální péče je silně ovlivněna mateřskou depresí a může změnit epigenetické přeprogramování mozku dítěte. Úroveň zapojení matek do péče o dítě během prvních měsíců by proto mohla přímo ovlivnit stav metylace a bude zaznamenána. Matky budou dotázány na rutiny krmení a péče, aby dokončily hodnocení poporodní péče.
2. Kognitivní vývoj kojenců bude hodnocen Bayleyovou stupnicí III vývoje kojenců (BSID) ve věku 18 měsíců. BSID se skládá ze série testů zaměřených na hodnocení kognitivního, motorického a behaviorálního vývoje u kojenců ve věku 0-3 let. Složky Index duševního rozvoje a Index psychomotorického rozvoje mají průměrné skóre 100 a směrodatnou odchylku 15 (rozsah 55 až 145). Skóre mezi 70-84 znamená mírně opožděný výkon a skóre ≤ 69 znamená výrazně opožděný výkon. Očekává se, že do těchto kategorií bude spadat přibližně 13,5 % testovaných kojenců. Psychický stres matky během těhotenství byl u dvouletých dětí spojen v závislosti na dávce se skóre BSID. Specializovaný psycholog, který bude nevidomý ohledně kategorizace mateřského stresu, bude administrovat testy, které budou trvat asi 40 minut.
3. Při této poslední návštěvě bude kojencům odebrán nový vzorek slin. Biomarkery budou kvantifikovány ze slinné DNA získané od malých kojenců. Pro posouzení ANS bude změřeno EKG. Úrovně methylace budou korelovat se stresem matky, depresí a úzkostí, s kognitivním vývojem dítěte a schopností ANS hodnotit účinnost těchto nových biomarkerů.