Biomarcadores fetales de estrés materno crónico durante el embarazo (FELICITy)

Razón fundamental:

Una cohorte de la población de mujeres que asisten al centro de perinatología del Departamento de Obstetricia y Ginecología del Klinikum rechts der Isar de la Technische Universität München (TUM) por tener un parto, se ubicará en el grupo de personas con mayor nivel de estrés percibido que podría concomitantemente portan fetos que muestran actividad simpática y vagal alterada.

Diseño experimental:

Este estudio se realizará en el Departamento de Obstetricia y Ginecología del Klinikum rechts der Isar de la Technische Universität München (TUM) un centro terciario de Perinatología de alta complejidad ubicado en Munich, Alemania y que atiende a unas 2000 madres/recién nacidos por año. Los obstetras de TUM identificarán a los sujetos prospectivos de acuerdo con los criterios de inclusión del estudio, consistentes en mujeres embarazadas de feto único entre 18 a 45 años de edad en su tercer trimestre (al menos 28 semanas de gestación) y sin a) alteraciones placentarias graves; b) malformaciones fetales; c) enfermedad grave de la madre durante el embarazo (es decir, preclampsia), d) abuso materno de drogas o alcohol, e) parto prematuro (menos de 37 semanas) y f) pH de la sangre del cordón umbilical

Se recomendará a los posibles participantes para que asistan a una sesión informativa, en la que se explicarán los procedimientos, se completará la inscripción formal y se obtendrán los formularios de consentimiento de los propios participantes y el consentimiento de los padres para sus bebés. Estos protocolos están en estricta conformidad con el Comité de Principios Éticos para la Investigación Médica de la TUM y cuentan con la aprobación del Comité de Ética del Hospital "Klinikum rechts der Isar". Una vez aceptados, los participantes ingresarán a la Fase I-IV.

Fase I: Detección:

En esta etapa inicial, los investigadores recopilarán información demográfica de las mujeres que hayan dado su consentimiento y las participantes se clasificarán como estresadas o controles después de calificar la Escala de estrés percibido de Cohen-10 (PSS-10). Este cuestionario mide el grado en que las situaciones de la vida son valoradas como estresantes y es un instrumento psicológico ampliamente utilizado para medir el estrés percibido inespecífico. El PSS predice marcadores biológicos objetivos de estrés y un mayor riesgo de enfermedad entre las personas con mayores niveles de estrés percibido. En particular, las puntuaciones de PSS se utilizaron para relacionar el estrés prenatal, la ansiedad y los síntomas depresivos como predictores de la intención de amamantar y para examinar los correlatos del estrés percibido en mujeres embarazadas. El aumento del estrés prenatal materno, medido como PSS y ansiedad, se asoció con la variación temperamental de los bebés pequeños y puede representar un factor de riesgo de psicopatología más adelante en la vida. El PSS-10 ha sido validado en poblaciones de habla alemana y será una herramienta rápida para evaluar el estrés entre los posibles sujetos. A los efectos del estudio actual, un participante con una puntuación PSS-10 ≥19 se clasificará como estresado y entrará en la Fase II. Por cada sujeto consentido categorizado como estresado, el siguiente participante examinado que coincida con la edad materna y gestacional con una puntuación PSS-10 < 19 entrará en la Fase II como control. El reclutamiento continuará hasta alcanzar la cohorte prevista de n=75 sujetos/grupo.

Fase II: Evaluación psicológica materna y registros prenatales fetales:

1. Cuestionarios: en el contexto, a los participantes inscritos que ingresen a esta fase se les pedirá que completen un cuestionario de autoevaluación ampliamente utilizado y validado para evaluar las preocupaciones relacionadas con el embarazo. Las participantes deberán completar el Cuestionario de angustia prenatal (PDQ-12) diseñado para evaluar inquietudes e inquietudes específicas relacionadas con el embarazo e incluye elementos sobre inquietudes relacionadas con problemas médicos, síntomas físicos, crianza de los hijos, relaciones, cambios corporales, trabajo de parto y parto, y el salud del bebé. Este instrumento se ha aplicado previamente en numerosos estudios con mujeres embarazadas de diversos entornos culturales y socioeconómicos y es un instrumento eficaz para evaluar el estrés relacionado con el embarazo. PDQ-12 ha sido traducido al alemán y fue validado. Además, los participantes completarán un cuestionario sobre su nivel educativo, situación socioeconómica, etnia e historial clínico.
2. Valoración del SNA: En la misma visita se medirá la frecuencia cardiaca fetal (FCF) mediante una cardiotocografía (CTG) de rutina y simultáneamente un electrocardiograma transabdominal (ECG transabdominal-fetal). La señal electrofisiológica contiene el ECG materno (mECG), ECG fetal (fECG) y ruido, se registrará mediante 5 electrodos desechables. Los cinco electrodos desechables se colocarán sobre el abdomen materno de manera estandarizada. Antes de colocar los electrodos, se reducirá la impedancia de la piel utilizando papel abrasivo en el lugar de colocación de los electrodos. Los datos se analizarán fuera de línea después de la descarga de la computadora. Para el caso de que la pérdida de señal sea alta con el método fECG, que es un problema conocido (más frecuente entre las 28 y 32 semanas de gestación, pero también puede ocurrir después de ese período), se realizará simultáneamente una CTG externa convencional utilizando un transductor de ultrasonido colocado en el Abdomen materno. Los investigadores analizarán el impacto de la PS en la actividad del SNA mediante el despliegue de métodos avanzados de monitorización de la FCF: promedio de señal rectificada en fase (PRSA), análisis de variabilidad de la FCF multidimensional y evaluación de la sincronización de la frecuencia cardíaca materno-fetal. Se realizarán registros de FECG y CTG. realizado una vez durante el embarazo durante al menos 40 minutos para obtener el estado de actividad fetal. Durante el trabajo de parto se realizará simultáneamente CTG convencional y si es posible fECG y mECG.

Fase III: Entrega:

1. Evaluación del cortisol materno: se ha sugerido que el cortisol, el producto hormonal de la activación del eje hipotálamo-pituitario-suprarrenal (HPA), es un mecanismo potencial que vincula el estrés materno y el resultado perinatal. Las muestras individuales de sangre y/o saliva brindan una medida en un solo momento y, considerando sus principales fluctuaciones fisiológicas diarias, puede que no sean la medida más informativa para evaluar la actividad HPA general o a largo plazo durante el período prenatal. Recientemente, el uso de mediciones de cortisol en el cabello demostró que proporciona un índice retrospectivo de la secreción integrada de cortisol durante períodos de varios meses. Se postula que el cortisol se incorpora al cabello emergente y crece lentamente con él. Por lo tanto, se supone que la cantidad de cortisol en un segmento de cabello en particular refleja la concentración sistémica integrada de hormonas esteroides durante un período de crecimiento de un segmento de cabello específico. El cortisol capilar y salival están altamente correlacionados en primates no humanos y se ha demostrado un aumento de las concentraciones de cortisol capilar en mujeres embarazadas. Por lo tanto, el cortisol en el cabello tiene el potencial de servir como una medida integrada de la actividad HPA durante un período prolongado de tiempo de hasta 3 a 6 meses. El día del parto, se recolectarán mechones de cabello (~3 mm de diámetro) de la región del vértice posterior de la cabeza lo más cerca posible del cuero cabelludo según lo recomendado por la Society of Hair Testing (Soc of Hair testing, 1997). Sobre la base de una tasa aproximada de crecimiento del cabello de 1 cm por mes, se supone que el segmento proximal de cabello de 3 cm de largo refleja la secreción hormonal integrada durante el período de tres meses anterior a la toma de muestras. La muestra de cabello de 3 cm se envolverá en papel de aluminio para su protección y se almacenará a temperatura ambiente. Se enviarán muestras de cabello para determinación de cortisol.
2. Recolección de sangre materna (no forma parte de este estudio; la sangre se almacenará en el biobanco): se recolectará un máximo de 20 ml para proporcionar muestras de suero y plasma. Las muestras de sangre se almacenarán en viales de criotubo etiquetados de 2 a 4 x 1,8 ml después de un ciclo de centrifugación para muestras de suero (2750 rpm x 10 min a temperatura ambiente) y se almacenarán a -80 °C y después de 10 inversiones suaves para muestras de plasma y se almacenarán a temperatura ambiente. -20 °C. Las muestras de sangre se procesarán y congelarán en un plazo de 2 a 4 h. Se registrará el intervalo de tiempo entre la recolección y la congelación de todos los especímenes.
3. Muestras de sangre del cordón umbilical: una vez que nace el bebé y antes de la separación de la placenta, se pinza el cordón umbilical y se extraen muestras de sangre del cordón umbilical y se distribuyen en dos tubos para muestras de suero y plasma siguiendo el mismo procedimiento que se detalla anteriormente. Se recogerá una tercera muestra en un tubo PAXgene, se invertirá cuidadosamente 10 veces y se dejará a TA durante 5 h en posición vertical. Luego, los tubos se almacenarán a -80 °C después de 10 a 16 horas a -20 °C. (la muestra de PAXgene no forma parte de este estudio; la sangre se almacenará en el biobanco)
4. Muestras de placenta (no forman parte de este estudio; las muestras se almacenarán en el biobanco): una vez que se haya expulsado la placenta, se diseccionará el lado materno. Se tomarán dos biopsias (aproximadamente 1 cm³) evitando la contaminación de la decidua. Las muestras se colocan en viales de criotubos y se almacenan inmediatamente a -20 °C.
5. Registros de recién nacidos: poco después del nacimiento, una partera especializada en neonatología recolectará muestras de saliva/bucales de los recién nacidos frotando suavemente las encías de ambos lados con la esponja del kit Oracollect-DNA (DNA Genotek, Canadá) y las almacenará a temperatura ambiente. Se registrarán los datos clínicos, incluidas las métricas corporales, el pH y la puntuación de APGAR.

Fase IV: Registros posnatales:

Siguiendo a la cohorte reclutada en la fase I y reflejando el estudio de neurodesarrollo animal, realizaremos un estudio longitudinal para explorar la viabilidad de medir biomarcadores de reprogramación epigenética inducida por PS.

1. Evaluación del desarrollo infantil: en la etapa final del estudio, se le pedirá a la madre que complete un cuestionario final para evaluar la depresión posparto y la lactancia que recibirá por correo postal. Si bien el estudio actual se centra en los eventos prenatales, la atención posnatal temprana se ve muy afectada por la depresión materna y puede alterar la reprogramación epigenética del cerebro infantil. Por lo tanto, el nivel de participación materna en el cuidado del niño durante los primeros meses podría afectar directamente el estado de metilación y se registrará. Se preguntará a las madres sobre las rutinas de alimentación y cuidado para completar la evaluación de atención posnatal.
2. El desarrollo cognitivo de los bebés se evaluará mediante la Escala Bayley III de desarrollo infantil (BSID) a los 18 meses de edad. El BSID está compuesto por una serie de pruebas destinadas a evaluar el desarrollo cognitivo, motor y conductual de los bebés de 0 a 3 años. Los componentes del Índice de Desarrollo Mental y el Índice de Desarrollo Psicomotor tienen una puntuación media de 100 y una desviación estándar de 15 (rango de 55 a 145). Las puntuaciones entre 70 y 84 indican un rendimiento levemente retrasado y las puntuaciones ≤ 69 indican un rendimiento significativamente retrasado. Se espera que aproximadamente el 13,5 % de los bebés evaluados se encuentren en esas categorías. La angustia psicológica materna durante el embarazo se asoció de forma dosis-respuesta con las puntuaciones BSID en niños de 2 años. Un Psicólogo especializado, que no conocerá la categorización del estrés materno, administrará las pruebas, que tendrán una duración aproximada de 40 minutos.
3. Se tomará una nueva muestra de saliva de los bebés en esta visita final. Los biomarcadores se cuantificarán a partir del ADN salival obtenido de los bebés pequeños. Se medirá el ECG para la evaluación del ANS. Los niveles de metilación se correlacionarán con el estrés, la depresión y la ansiedad maternos, con el desarrollo cognitivo del bebé y la capacidad del SNA para evaluar la eficacia de estos nuevos biomarcadores.