Focos de Heterogeneidade Tumoral em Gliomas Difusos de Baixo Grau (FDLGG)
Focos de heterogeneidade tumoral em gliomas difusos de baixo grau com mutação IDH1 revelam ativação de STAT3 e regulação negativa da enzima fosfoetanolamina ETNPPL atuando como um regulador negativo do crescimento de gliomas
Fundo:
Gliomas difusos de baixo grau (DLGG) são câncer primário de crescimento lento do cérebro e da medula espinhal. Representam até 15% dos tumores em desenvolvimento nesses órgãos com desfecho fatal para os pacientes devido a sua evolução. As razões dessa transformação para tumores mais malignos ainda permanecem mal definidas. Anteriormente, a equipe de pesquisa em neuro-oncologia do Hospital Universitário de Montpellier encontrou focos de heterogeneidade tumoral em 20 a 30% dos pacientes que desenvolveram um DLGG e publicou seus resultados. Os pesquisadores assumiram que esses focos representam o início precoce da transformação de um glioma difuso de baixo grau para um glioblastoma, tumor com células altamente malignas e expectativa de vida média de dois anos para o paciente.
Métodos:
Os investigadores selecionaram pacientes adultos sem cirurgia prévia nem tratamento neuro-oncológico quando inscritos. Eles apresentaram uma mutação específica para uma enzima do metabolismo denominada IDH1, sigla para Isocitrato Desidrogenase 1, encontrada em 70% das DLGG. Os pacientes também foram selecionados por apresentarem focos de heterogeneidade tumoral. Após o consentimento, os pesquisadores estudaram por imuno-histoquímica as vias desreguladas entre o DLGG e os focos. Os pesquisadores também extraíram RNAs, moléculas que expressam a vida e o metabolismo das células tumorais, e os compararam para saber quais genes se expressavam diferencialmente entre o DLGG e os focos. Todos os RNAs foram testados para controle de qualidade antes de serem processados. Os investigadores então estudaram 8 pacientes com conformidade com ética, autorizações e diretrizes institucionais. Genes de interesse foram estudados in vitro para avaliar suas funções. Os investigadores encontraram uma enzima pouco descrita do catabolismo das fosfoetanolaminas e descobriram um novo papel tumoral antiproliferativo para ela.
•Discussão: Os pesquisadores primeiro mostraram que os focos têm uma porcentagem maior de células p-STAT3+, o que indica a ativação da via STAT3 nessas células. A STAT3 fosforilada se transloca para o núcleo celular para regular muitos genes envolvidos na proliferação, apoptose e angiogênese. Como tal, a fosforilação de proteínas STAT, notavelmente STAT3, está envolvida na patogênese de muitos cânceres, incluindo GBM, promovendo a progressão do ciclo celular, estimulando a angiogênese e prejudicando a vigilância imune do tumor.
Os investigadores descobriram que o RNA e a proteína ETNPPL são reduzidos em focos de células e ausentes em glioblastomas. Isso é consistente com as análises do banco de dados de gliomas que mostram que a expressão de ETNPLL está inversamente correlacionada com STAT3 e MKI67, cuja expressão é maior em focos e glioblastomas. Além disso, a análise de Kaplan-Meier mostra que pacientes com baixa expressão de ETNPPL têm menor sobrevida global. Essas observações sugeriram que essa enzima pode se opor à proliferação de células de glioma. Os investigadores demonstraram esta hipótese superexpressando ETNPPL em 3 culturas de células de glioblastoma. Dois foram sensíveis à superexpressão de ETNPPL, que reduziu seu crescimento, enquanto nenhum efeito foi detectado nas células Gli4. Essas culturas derivadas de glioblastoma têm diferentes tipos de mutações.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Descrição detalhada
Os gliomas com mutação IDH1 são tumores cerebrais de crescimento lento que progridem para gliomas de alto grau. Os primeiros eventos moleculares que causam essa progressão são mal definidos. Estudos anteriores revelaram que 20% desses tumores já apresentam focos de transformação. Esses focos oferecem oportunidades para entender melhor a progressão maligna. Os investigadores usaram imuno-histoquímica e perfis de RNA de alto rendimento para caracterizar os focos de células. Estes têm maior coloração p-STAT3 revelando ativação da sinalização JAK/STAT. Eles regulam negativamente os genes envolvidos na via Hippo/Yap (AMOT, CCDC80, LIX1), sinalização Wnt (CPE, DAAM2, GPR37, SFRP2), sinalização EGFR (EPS15, MLC1), citoesqueleto e comunicação célula-célula (EZR, GJA1) enquanto aumentam SKA3, uma proteína associada ao cinetócoro. Além disso, as células focais apresentam níveis reduzidos da metabólica lipídica etanolamina-fosfato fosfoliase (ETNPPL/AGXT2L1). Esta enzima está envolvida no catabolismo da fosfoetanolamina envolvida na síntese da membrana. Os investigadores detectaram a proteína ETNPPL em células de glioma, bem como em astrócitos no cérebro humano. Sua localização nuclear sugere papéis adicionais para esta enzima. A expressão de ETNPPL está inversamente correlacionada com o grau de glioma e os investigadores não encontraram proteína ETNPPL em glioblastomas.
A superexpressão de ETNPPL reduz o crescimento de células-tronco de glioma, indicando que essa enzima se opõe à gliomagênese. Coletivamente, esses resultados sugerem que uma alteração combinada no metabolismo lipídico da membrana e na via STAT3 promove a progressão maligna do glioma com mutação IDH1.
Foram selecionados tumores com focos de pelo menos quatro milímetros de diâmetro, avaliados pela coloração de hematoxilina e eosina. Quatro brocas (duas em focos e duas na outra parte do tumor) foram realizadas nos blocos tumorais FFPE usando um punção de dois milímetros de um aparelho Tissue Micro Array em condições livres de RNAse. Após os punções, a seleção adequada das áreas tumorais foi verificada por meio de colorações de hematoxilina e eosina dos cortes. O RNA total foi extraído usando o kit Qiagen RNeasy FFPE, quantificado com Nanodrop 1000 (Thermo Fisher) e o número de integridade do RNA (RIN) foi determinado usando um Bioanalyzer 2100. O RIN era em média 2,5, mas ainda era adequado para marcação e hibridação em chips de DNA de acordo com o departamento técnico da Affymetrix. Após amplificação e marcação com um kit Affymetrix WT Pico, os cDNA foram hibridizados em chips Human Gene 2.1 ST. Os dados foram normalizados com o software Affymetrix Expression Console (algoritmo GC-RMA) e os perfis de RNA foram gerados usando o software Affymetrix Transcriptome Analysis Console (3.1.0.5). Os genes expressos diferencialmente foram selecionados com base em uma mudança de dobra linear ≥ 1,1 e valor de p ≤ 0,05 (n = 8 tumores). Os dados que apóiam as descobertas de nosso estudo estão disponíveis abertamente nos dados de genômica funcional Gene Expression Omnibus.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Montpellier, França, 34295
- Uh Montpellier
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
Um indivíduo deve preencher todos os seguintes critérios para ser elegível para inscrição no estudo:
- Idade entre 18 e 70 anos.
- Sofrendo de glioma difuso de baixo grau com mutação IDH1.
- Nenhum tratamento pré-operatório ou oncológico antes de ingressar no estudo.
- Termo de consentimento informado assinado.
Critério de exclusão:
- Sujeito incapaz de ler e/e escrever
- Gliomas de grau 3 ou 4
- Tumor com status IDH1-WT
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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aumento estatisticamente significativo no número de células tumorais
Prazo: 1 dia
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aumento estatisticamente significativo no número de células tumorais
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1 dia
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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determinar marcadores preditivos do desenvolvimento deste tumor
Prazo: 1 dia
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determinar marcadores preditivos do desenvolvimento deste tumor
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1 dia
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Diretor de estudo: VALERIE RIGAUX, MD, PhD, University Hospital, Montpellier
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (REAL)
Conclusão Primária (REAL)
Conclusão do estudo (REAL)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (REAL)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (REAL)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- RECHMPL19_0469
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Descrição do plano IPD
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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