- ICH GCP
- Registro de ensaios clínicos dos EUA
- Ensaio Clínico NCT06551649
Secretoma de células mesenquimais amnióticas humanas para neurodegeneração e neuroinflamação (CONTRASTOME)
Contrastando inflamação crônica e neurodegeneração usando o secretoma de células mesenquimais amnióticas humanas como uma estratégia terapêutica inovadora
As doenças neurodegenerativas são condições debilitantes caracterizadas por inflamação crónica, levando à disfunção tanto dos componentes celulares não neuronais do sistema nervoso central como das células imunitárias do sangue periférico. Assim, é crucial desenvolver uma estratégia terapêutica inovadora que não só contraste eficazmente a neurodegeneração, mas também vise reduzir a inflamação.
O objetivo geral do estudo é fornecer uma demonstração pré-clínica in vitro do potencial imunomodulador e pró-regenerativo do secretoma das células estromais mesenquimais amnióticas humanas (hAMSC) na neutralização da neurodegeneração.
Este potencial será avaliado em modelos tridimensionais in vitro de doenças neurodegenerativas, como esclerose lateral amiotrófica (ELA) e doença desmielinizante crônica (esclerose múltipla - EM). Para tanto, o estudo inclui a coleta de amostras de pacientes sem tratamento farmacológico e sem dispositivos médicos. Pacientes com diagnóstico de ELA, pacientes com diagnóstico de EM e voluntários saudáveis serão recrutados para coletar amostras de sangue e biópsias de pele. Plataformas organoides específicas do paciente e de controle, imitando a heterogeneidade celular e as interações tridimensionais dentro do sistema nervoso central, incluindo o compartimento inflamatório, serão desenvolvidas para serem usadas como uma ferramenta valiosa para investigar a eficácia in vitro do secretoma hAMSC.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Roma, Itália, 00168
- Fondazione Policlinico Universitario A. Gemelli IRCCS
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Rome, Itália, 00168
- Fondazione Policlinico Universitario Agostino Gemelli IRCCS
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Adulto
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critérios de inclusão:
- Para pacientes com esclerose lateral amiotrófica (ELA): idade entre 50 e 60 anos e idade semelhante de início e duração da doença.
- Para pacientes com esclerose múltipla (EM): com diagnóstico de EM recentemente confirmado, com idade entre 20 e 50 anos e considerando a proporção homem/mulher na EM de aproximadamente 2:1.
- Para voluntários saudáveis: cônjuges de pacientes não afetados por qualquer doença neurológica e que correspondam à proporção de idade e sexo para ambas as condições.
Critérios de exclusão:
- Pacientes que não consentem em participar do estudo.
- Pacientes com EM que receberam tratamento com imunomoduladores ou corticosteróides e estão em fase aguda da doença.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Ciência básica
- Alocação: Não randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Experimental: Pacientes com diagnóstico de esclerose lateral amiotrófica
Pacientes com esclerose lateral amiotrófica serão recrutados para obter coleta de sangue venoso e biópsia de pele, para otimizar um modelo celular tridimensional de esclerose múltipla em que determinar os efeitos neuroprotetores e antiinflamatórios / imunomoduladores do secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
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O tecido da pele será usado para isolar fibroblastos, que serão então reprogramados em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs).
Essas iPSCs serão diferenciadas para desenvolver organoides de controle e específicos do paciente.
As amostras de sangue serão utilizadas para isolar células mononucleares do sangue periférico (PBMC) para estudar a contribuição da inflamação nos modelos in vitro desenvolvidos.
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Experimental: Pacientes com diagnóstico de esclerose múltipla
Pacientes com esclerose múltipla serão recrutados para obter coleta de sangue venoso e biópsia de pele, para otimizar um modelo celular tridimensional de esclerose múltipla em que determinar os efeitos neuroprotetores e antiinflamatórios / imunomoduladores do secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
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O tecido da pele será usado para isolar fibroblastos, que serão então reprogramados em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs).
Essas iPSCs serão diferenciadas para desenvolver organoides de controle e específicos do paciente.
As amostras de sangue serão utilizadas para isolar células mononucleares do sangue periférico (PBMC) para estudar a contribuição da inflamação nos modelos in vitro desenvolvidos.
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Comparador Ativo: Voluntários saudáveis, cônjuges não afetados dos pacientes
Os cônjuges dos pacientes serão inscritos como controles saudáveis, combinando sua idade e proporção entre homens e mulheres para ambas as condições, para obter coleta de sangue venoso e biópsia de pele, a fim de desenvolver um modelo de controle contra o qual avaliar a eficácia pré-clínica do humano secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas.
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O tecido da pele será usado para isolar fibroblastos, que serão então reprogramados em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs).
Essas iPSCs serão diferenciadas para desenvolver organoides de controle e específicos do paciente.
As amostras de sangue serão utilizadas para isolar células mononucleares do sangue periférico (PBMC) para estudar a contribuição da inflamação nos modelos in vitro desenvolvidos.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Medição do comprimento de neurites em um modelo celular tridimensional de esclerose lateral amiotrófica.
Prazo: 18 meses
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Serão gerados organoides de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) isoladas de biópsias de pele de 6 pacientes com esclerose lateral amiotrófica (ELA) e 6 controles saudáveis.
A degeneração de neurites será medida em microscopia de fluorescência como o comprimento total da fibra positiva para βIII-TUBULINA dividido pelo número de células positivas para βIII-TUBULINA em micrômetros.
As medições serão feitas de pelo menos 5 ALS e 5 organoides de controle para analisar correlações e diferenças entre os grupos.
O nível de significância para testes e modelos estatísticos é fixado em 0,05.
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18 meses
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Porcentagem de células apoptóticas em modelo celular tridimensional de esclerose lateral amiotrófica.
Prazo: 18 meses
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Serão gerados organoides de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) isoladas de biópsias de pele de 6 pacientes com esclerose lateral amiotrófica (ELA) e 6 controles saudáveis.
A apoptose será avaliada pela porcentagem de células positivas para iodeto de propídio, representando a proporção de células mortas em relação ao número total de células.
As medições serão feitas de pelo menos 5 ALS e 5 organoides de controle para analisar correlações e diferenças entre os grupos.
O nível de significância para testes e modelos estatísticos é fixado em 0,05.
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18 meses
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Medição da área da mielina danificada em um modelo celular tridimensional de esclerose múltipla.
Prazo: 18 meses
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Serão gerados organoides de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) isoladas de biópsias de pele de 6 pacientes com esclerose múltipla (EM) e 6 controles saudáveis.
Os danos à bainha de mielina serão avaliados por imunofluorescência como a redução na área corada com marcador de mielina versus área total da seção.
As medições serão feitas de pelo menos 5 MS e 5 organoides de controle para analisar correlações e diferenças entre os grupos.
O nível de significância para testes e modelos estatísticos é fixado em 0,05.
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18 meses
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Número de células microgliais inflamadas em um modelo celular tridimensional de esclerose múltipla.
Prazo: 18 meses
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Serão gerados organoides de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) isoladas de biópsias de pele de 6 pacientes com esclerose múltipla (EM) e 6 controles saudáveis.
A ativação microglial será avaliada por variações morfológicas, classificando as células como homeostáticas, ramificadas, hiperramificadas ou amebóides.
O aumento da microglia inflamatória será definido como a proporção de células morfológicas ativadas em relação à contagem total de células.
Os marcadores inflamatórios HLA-DR e iNOS serão avaliados em termos de células positivas para CD68 e IBA1 e intensidade de fluorescência.
As medições serão feitas de pelo menos 5 MS e 5 organoides de controle para analisar correlações e diferenças entre os grupos.
O nível de significância para testes e modelos estatísticos é fixado em 0,05.
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18 meses
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Medição do comprimento de neurites em organoides de esclerose lateral amiotrófica após tratamento com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
Prazo: 24 meses
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O comprimento de neuritos em organoides derivados de esclerose lateral amiotrófica (ELA) tratados com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas (hAMSC) será quantificado usando microscopia de fluorescência como o comprimento total da fibra positiva para βIII-TUBULINA dividido pelo número de células positivas para βIII-TUBULINA .
A capacidade do secretoma hAMSC de restaurar organoides de ALS (pelo menos 5) para valores próximos aos organoides de doadores saudáveis (pelo menos 5) será avaliada.
O nível de significância é fixado em 0,05.
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24 meses
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Porcentagem de células apoptóticas em organoides de esclerose lateral amiotrófica após tratamento com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
Prazo: 24 meses
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A apoptose será medida pela redução de células positivas para iodeto de propídio, expressa como uma porcentagem do total de células, em organoides derivados de esclerose lateral amiotrófica (ELA) tratados com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas (hAMSC).
A capacidade do secretoma hAMSC de restaurar organoides de ALS (pelo menos 5) para valores próximos aos organoides de doadores saudáveis (pelo menos 5) será avaliada.
O nível de significância é fixado em 0,05.
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24 meses
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Medição da área de mielina danificada em organoides de esclerose múltipla após tratamento com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
Prazo: 24 meses
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A redução de áreas desmielinizadas em organoides derivados de esclerose múltipla (EM) tratados com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas (hAMSC) será medida pelo aumento de marcadores de oligodendrócitos maduros em relação à área total da seção.
A capacidade do secretoma hAMSC de restaurar organoides MS (pelo menos 5) para valores próximos aos organoides de doadores saudáveis (pelo menos 5) será avaliada.
O nível de significância é fixado em 0,05.
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24 meses
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Número de células microgliais imunorreguladoras em organoides de esclerose múltipla após tratamento com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas.
Prazo: 24 meses
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A aquisição de um fenótipo imunorregulador será determinada em organoides derivados de esclerose múltipla (EM) após tratamento com secretoma de células estromais mesenquimais amnióticas humanas (hAMSC), analisando células que são negativas para iNOS, positivas para arginase e baixas em HLA-DR.
A análise de imunofluorescência contará o número de células positivas para marcadores inflamatórios/imunorreguladores do total de células microgliais IBA1+.
Mudanças na intensidade da fluorescência também serão avaliadas.
A capacidade do secretoma hAMSC de restaurar organoides MS (pelo menos 5) para valores próximos aos organoides de doadores saudáveis (pelo menos 5) será avaliada.
O nível de significância é fixado em 0,05.
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24 meses
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Porcentagem de marcadores fenotípicos imunológicos alterados em pacientes com esclerose lateral amiotrófica e esclerose múltipla
Prazo: 18 meses
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O fenótipo imunológico alterado de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de pacientes com esclerose lateral amiotrófica (ELA, n = 15) e esclerose múltipla (EM, n = 15) será comparado com controles saudáveis pareados por idade e sexo PBMC (n =30).
A citometria de fluxo será usada para identificar alterações em linfócitos T e B, e monócitos e seus subconjuntos, incluindo subconjuntos ingênuos e de memória, estado de senescência, expressão de marcadores de ativação e moléculas coestimulatórias.
Será considerada a porcentagem de mais de 40 marcadores e será registrada a expressão positiva para cada marcador.
A variação imunofenotípica entre PBMC do paciente e PBMC do controle saudável será considerada estatisticamente significativa com valor de p < 0,05.
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18 meses
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Colaboradores e Investigadores
Investigadores
- Investigador principal: Ornella Parolini, Fondazione Policlinico Universitario Agostino Gemelli IRCCS
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Estimado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
- Doenças do Sistema Nervoso Central
- Doenças do Sistema Nervoso
- Doenças Neuromusculares
- Doenças Metabólicas
- Doenças autoimunes
- Doenças do sistema imunológico
- Doenças Autoimunes Desmielinizantes, SNC
- Doenças Autoimunes do Sistema Nervoso
- Doenças Desmielinizantes
- Doenças Neurodegenerativas
- Doenças da Medula Espinhal
- Proteinopatias TDP-43
- Deficiências de Proteostase
- Doença do neurônio motor
- Doenças Nutricionais e Metabólicas
- Esclerose múltipla
- Esclerose Lateral Amiotrófica
- Técnicas de investigação
- Manipulação de amostras
- Técnicas de laboratório clínico
- Técnicas e procedimentos de diagnóstico
- Diagnóstico
- Perfurações
- Procedimentos cirúrgicos, operatórios
- Coleção de amostras de sangue
Outros números de identificação do estudo
- 6823
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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