Безопасность инфузий аутологичных МСК для лечения эпилепсии (AMSCDRSE)

Основная цель этого клинического исследования фазы 1 заключалась в оценке безопасности применения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в качестве терапии лекарственно-устойчивой симптоматической эпилепсии в одноцентровом исследовании. Хорошо известно, что лекарственно-резистентная симптоматическая эпилепсия является резко инвалидизирующим заболеванием, при котором применяемые стационарные и амбулаторные методы лечения не дают реального клинического эффекта. Поэтому необходимы новые подходы для достижения ремиссии, остановки прогрессирования заболевания и повышения качества жизни пациентов. В данное исследование были включены взрослые (18-60 лет) пациенты (больные) обоего пола, страдающие фармакорезистентной симптоматической эпилепсией с частыми (>5 эпизодов в месяц) припадками. Лекарственную устойчивость определяли по отсутствию какого-либо явного клинического ответа (т.е. отсутствия снижения частоты припадков или замедления прогрессирования заболевания) у пациентов с симптоматической эпилепсией к карбамазепину, вальпроевой кислоте, топирамату, ламотриджину или фенобарбиталу (т.е. противоэпилептические препараты [АЭП]) в качестве монотерапии и в различных комбинациях в течение одного предшествующего календарного года. Критериями исключения были отказ пациентов от участия, неблагоприятные реакции на терапию, воспалительные состояния ЦНС, хронические психозы, опухоли ЦНС, рецидивы хронических соматических или неврологических заболеваний, положительный результат крови на гепатит В или С или ВИЧ. План предусматривал включение 30 пациентов в основную группу и 30 пациентов в контрольную группу в течение 5 лет. Пациенты были рандомизированы на стандартное лечение противоэпилептическими препаратами (контрольная группа) или противоэпилептическими препаратами в сочетании с аутологичными мезенхимальными стволовыми клетками (МСК, исследовательская группа). МСК были получены из образцов костного мозга того же пациента и очищены и размножены ex vivo в специализированной лаборатории клеточной биотехнологии. МСК характеризовались иммунофенотипированием как CD90+CD105+CD45-CD34-клетки. Через 3 недели культивирования in vitro часть МСК дополнительно культивировали в течение 7 дней в среде для пролиферации Neurocult-XF для получения нейроиндуцированных МСК. Нейроиндукция была подтверждена наличием генетических маркеров нестина и нейронспецифической енолазы. Наконец, собирали 40-101×106 аутологичных культивируемых МСК и 2,7-8,0×106 аутологичных нейроиндуцированных МСК, ресуспендировали в солевом растворе, содержащем 5% аутологичной сыворотки крови для инъекций, и после измерения жизнеспособности (98% клеток) переносили в клинический центр.

Больные основной группы получали одну медленно доставляемую (в течение 5-10 минут) внутривенную инъекцию ex vivo размноженных аутологичных МСК в объеме 20 мл, а через 5-7 дней каждому пациенту основной группы дополнительно вводили медленно доставляемую эндолюмбальное введение нейроиндуцированных МСК в объеме 5 мл. Оценивались как неблагоприятные реакции на инъекции МСК (в течение суток после проведения процедур), так и ранние (до 1 мес) и поздние (до 6 мес) клинические эффекты, включая осложнения. Неблагоприятные реакции на инъекции МСК включали локальную боль или кровоизлияние в месте инъекции и системные реакции центральной нервной системы (ЦНС, т.е. гипертермия, утомляемость и миалгия). В дальнейшем были изучены возможные неблагоприятные системные реакции со стороны ЦНС и сосудистой системы, в том числе инфекционные и неинфекционные осложнения течения заболевания, подлежащие контролю. Все события зафиксированы в медицинских картах. В тех случаях, когда эти явления имели опасные характеристики, о них сообщалось членам наблюдательного совета (этического комитета центра) для оценки исключения пациентов из исследования или прекращения клинического исследования.

Также оценивались возможные положительные эффекты терапии на основе МСК у больных основной группы. Эти эффекты были обнаружены с помощью клинических наблюдений в выбранные моменты времени терапии (т. е. через 3 и 12 месяцев после применения терапии на основе МСК) и измерений электроэнцефалографии до и через год после терапии. Для определения возможных изменений течения заболевания оценивали признаки когнитивных нарушений, поведенческих расстройств, изменения характеристик и частоты приступов. Для оценки когнитивных нарушений мы использовали мини-тест психического состояния. Инвалидизирующее влияние болезни на повседневную жизнь оценивали по шкале субъективной инвалидности эпилепсии. Состояние тревоги и депрессии оценивали с помощью Госпитальной шкалы тревоги и депрессии. Изменения в характеристиках и частоте припадков оценивали с использованием Национальной госпитальной шкалы тяжести припадков. Процессы произвольного внимания и работоспособности изучались с помощью таблиц Шульте по методике Крепелина. Таблицы Шульте использовались для изучения времени сенсомоторной реакции, распределения и устойчивости внимания. Для изучения самочувствия, утомляемости и устойчивости внимания использовали метод «Учет Крепелина». Оценку кратковременной памяти проводили по методике запоминания 10 слов; этот метод направлен на определение объема и скорости устно-слуховой памяти.

Основными клиническими характеристиками, которые использовались для мониторинга заболевания, были ответы «да» или «нет» (относительно терапии), частота приступов (в месяц), ремиссия заболевания в ранние (3 мес) и поздние (12 мес и более) сроки. баллы после терапии. Для оценки частичного ответа на терапию оценивали количество пациентов, у которых наблюдалось 50% снижение частоты припадков. Тип припадка (т.е. генерализованный тонико-клонический, парциально-сложный, простой парциальный и множественный тип припадка) также оценивался наряду с изменением типа припадка в течение курса лечения.

Записи электроэнцефалографии проводились при поступлении и в течение всего периода наблюдения на энцефалографическом комплексе Mizar ЭЭГ 201 с регистрацией биопотенциалов с 16 точек тела по схеме «10-20». Наблюдаемые электрические альфа-, бета-, тета- и дельта-волны анализировались в 3-минутных отрезках (с дальнейшим пересчетом на каждый 1-минутный отрезок) до (при поступлении) и через 1 год после применения МСК. Также была рассчитана пиковая частота альфа-волн. У каждого пациента оценивали как спонтанное состояние, так и состояние после нагрузочного зонда (гипервентиляция и фотостимуляция). Характеристики электроэнцефалограмм (ЭЭГ) объяснялись локальными и диффузными корковыми изменениями. Оценивали индекс пароксизмальности, количество локальных и генерализованных спайков эпилептиформных волн в минуту, пиковую частоту ЭЭГ-активности, индекс медленной активности, суммированные баллы признаков патологии ЭЭГ. ЭЭГ с эпилептиформной активностью включала спайки, спайки-медленные волны и высокоамплитудные спайки. Запись ЭЭГ выполняли на основании стандартных и дополнительно предложенных критериев. Все оценки проводились для пациентов контрольной и основной групп, а полученные данные сопоставлялись для определения потенциальных различий, обусловленных дополнительно проводимой терапией на основе МСК. Терапия пациента прекращалась в любой момент времени при появлении немедленных неблагоприятных реакций на инъекции МСК. Окончательное наблюдение за пациентами включало клиническую и ЭЭГ-оценку через 12 мес (и более) после применения терапии на основе МСК. Обобщенные данные по пациентам контрольной и основной групп были собраны в электронную базу данных для дальнейшего анализа и интерпретации.