Säkerhet för autolog MSC-infusion för att behandla epilepsi (AMSCDRSE)

Huvudmålet med denna fas 1 kliniska prövning var att utvärdera säkerheten av en autolog mesenkymal stamcellsapplikation (MSC) som terapi för läkemedelsresistent symtomatisk epilepsi i en encenterstudie. Det är välkänt att läkemedelsresistent symtomatisk epilepsi är en dramatiskt invaliderande sjukdom för vilken tillämpad stationär och öppenvård inte har någon verklig klinisk effekt. Därför behövs nya tillvägagångssätt för att nå remission, för att stoppa sjukdomsprogression och för att öka patienternas livskvalitet. För denna studie inkluderades vuxna (18-60 år gamla) patienter (pts) av båda könen som led av läkemedelsresistent symtomatisk epilepsi med frekventa (>5 händelser per månad) anfall i studien. Läkemedelsresistens definierades som avsaknad av något tydligt kliniskt svar (dvs ingen minskning av anfallsfrekvens eller minskning av sjukdomsprogression) hos pts med symtomatisk epilepsi mot karbamazepin, valproinsyra, topiramat, lamotrigin eller fenobarbital (dvs. epileptiska läkemedel[AED]) som monoterapier och i olika kombinationer under det föregående kalenderåret. Kriterierna för uteslutning var patientvägran att delta, ogynnsamma reaktioner på terapi, CNS-inflammatoriska tillstånd, kroniska psykoser, CNS-tumörer, återfall av kroniska somatiska eller neurologiska sjukdomar och blodpositivitet för hepatit B eller C eller HIV. Planen inkluderade inkludering av 30 poäng i studiegruppen och 30 poäng i kontrollgruppen under en period av 5 år. Pts randomiserades till standardbehandling med AED (kontrollgrupp) eller AED plus autologa mesenkymala stamceller (MSC, studiegrupp). MSC:erna erhölls från benmärgsprover från samma patient och renades och expanderades ex vivo i ett specialiserat cellulärt biotekniklaboratorium. MSC:erna karakteriserades genom immunfenotypning som CD90+CD105+CD45-CD34-celler. Efter 3 veckors odling in vitro odlades en del av MSC:n ytterligare under 7 dagar i Neurocult-XF-proliferationsmedium för att erhålla neuroinducerade MSC:er. Neuroinduktion bevisades genom närvaron av de genetiska markörerna nestin och neuronspecifikt enolas. Slutligen skördades 40-101 x 106 autologa odlade MSC:er och 2,7 - 8,0 x 106 autologa neuroinducerade MSC:er, återsuspenderades i koksaltlösning innehållande 5 % autologt blodserum för injektion och överfördes, efter en mätning av livsdugligheten (98 % celler), till kliniken.

Ptterna i studiegruppen fick en långsamt administrerad (över 5-10 minuter) intravenös injektion av ex vivo expanderade autologa MSC i en volym av 20 ml, och 5-7 dagar senare fick varje patient i studiegruppen ytterligare en långsamt förlossad endolumbal injektion av neuroinducerade MSC i en volym av 5 ml. Både ogynnsamma reaktioner på MSC-injektionerna (över en dag efter utförandet av procedurerna) och de tidiga (upp till en månad) och sena (upp till 6 månader) kliniska effekterna, inklusive komplikationer, utvärderades. Ogynnsamma reaktioner på MSC-injektionerna inkluderade lokal smärta eller blödning vid injektionsstället och systemiska reaktioner i det centrala nervsystemet (CNS, dvs hypertermi, trötthet och myalgi). Senare undersöktes potentiella ogynnsamma systemreaktioner av CNS och kärlsystemet, inklusive infektiösa och icke-infektiösa komplikationer av progressionen av sjukdomen som skulle kontrolleras. Alla händelser dokumenterades på läkarkort. I de fall dessa händelser uppvisade farliga egenskaper, förklarades de till ledamöter av övervakningsnämnden (centrets etiska kommitté) för utvärdering av uteslutningen av patienterna från studien eller avslutande av den kliniska studien.

Dessutom utvärderades de möjliga fördelaktiga effekterna av MSC-baserad terapi i studiegruppens punkter. Dessa effekter upptäcktes via kliniska observationer vid utvalda behandlingstidpunkter (d.v.s. 3 och 12 månader efter appliceringen av den MSC-baserade behandlingen) och elektroencefalografimätningar före och ett år efter behandlingen. För att fastställa möjliga förändringar i sjukdomsprogression utvärderades tecken på kognitiv funktionsnedsättning, beteendestörningar och förändringar i anfallsegenskaper och frekvens. För utvärderingen av kognitiv funktionsnedsättning använde vi Mini-Mental State Examination. Sjukdomens handikappande effekt på det dagliga livet var poängsättning med hjälp av Subjective Handicap of Epilepsy Scale. Tillståndsångest och depression utvärderades med hjälp av sjukhusets ångest- och depressionsskala. Förändringar i anfallsegenskaper och frekvens utvärderades med hjälp av National Hospital Scale of Seizure Severity. Processerna med frivillig uppmärksamhet och prestation studerades med Schulte-tabeller enligt Kraepelins metoder. Schulte-tabeller användes för att studera sensorimotoriska reaktionstider och fördelningen och stabiliteten av uppmärksamhet. Metoden "Account of Kraepelin" användes för att studera hälsa, trötthet och uppmärksamhetens stabilitet. Bedömningen av korttidsminnet gjordes via metoden att memorera 10 ord; den här metoden syftar till att bestämma volymen och hastigheten för oralt-audiellt minne.

De huvudsakliga kliniska egenskaperna som används för sjukdomsövervakning var "ja" eller "nej"-svar (avseende terapi), anfallsfrekvens (per månad) och sjukdomsremission vid tidig (3 månader) och sen (12 månader och mer) tidpunkten poäng efter behandlingen. För att utvärdera partiella svar på terapi, utvärderades antalet pts som uppvisade 50 % minskning av anfallsfrekvensen. Anfallstyp (dvs generaliserad tonisk-klonisk, partiell komplex, enkla partiella och flera typer av anfall) utvärderades också tillsammans med förändringar i anfallstyp under behandlingsförloppet.

Elektroencefalografiinspelningar utfördes vid intagningen och över övervakningsperioden med användning av ett Mizar EEG 201-encefalografisystem med biopotentialregistrering från 16 kroppspunkter enligt "10-20"-schemat. De observerade elektriska alfa-, beta-, theta- och deltavågorna analyserades i 3-minuterssegment (med ytterligare omräkning för varje 1-minuterssegment) före (vid antagning) och 1 år efter MSC-applikation. Toppfrekvensen för alfavågorna beräknades också. Både det spontana tillståndet och tillståndet efter laddningssonden (hyperventilation och fotostimulering) utvärderades för varje patient. Egenskaperna hos elektroencefalografierna (EEG) tillskrevs lokala och diffusa kortikala förändringar. Vi utvärderade paroxysmalitetsindex, kvantiteter av lokala och generaliserade toppar av epileptiforma vågor per minut, toppfrekvens för EEG-aktivitet, index för långsam aktivitet och sammanfattade punkter av EEG-patologiska tecken. EEG med epileptiform aktivitet inkluderade spikar, spik-långsamma vågor och spikar med hög amplitud. EEG-registreringarna utfördes utifrån standardkriterier och ytterligare föreslagna kriterier. Alla bedömningar utfördes för punkterna i kontroll- och studiegrupperna, och de erhållna data jämfördes för att fastställa de potentiella skillnaderna på grund av den ytterligare utförda MSC-baserade behandlingen. En patients terapi avbröts när som helst om omedelbara ogynnsamma reaktioner på MSC-injektionerna observerades. De slutliga observationerna av patienterna inkluderade kliniska och EEG-bedömningar 12 månader (eller mer) efter tillämpningen av den MSC-baserade behandlingen. De sammanfattade uppgifterna för punkterna i kontroll- och studiegrupperna samlades in i en elektronisk databas för vidare analys och tolkningar.