Sicherheit der autologen MSC-Infusion zur Behandlung von Epilepsie (AMSCDRSE)

Das Hauptziel dieser klinischen Phase-1-Studie war die Bewertung der Sicherheit einer Anwendung autologer mesenchymaler Stammzellen (MSC) als Therapie für arzneimittelresistente symptomatische Epilepsie in einer Ein-Zentrum-Studie. Es ist allgemein bekannt, dass die medikamentenresistente symptomatische Epilepsie eine dramatisch beeinträchtigende Erkrankung ist, bei der angewandte stationäre und ambulante Therapien keine wirkliche klinische Wirkung haben. Daher sind neue Ansätze erforderlich, um eine Remission zu erreichen, das Fortschreiten der Krankheit zu stoppen und die Lebensqualität der Patienten zu verbessern. Für diese Studie wurden erwachsene (18-60 Jahre alte) Patienten (PTS) beiderlei Geschlechts, die an arzneimittelresistenter symptomatischer Epilepsie mit häufigen (> 5 Ereignisse pro Monat) Anfällen litten, in die Studie eingeschlossen. Arzneimittelresistenz wurde definiert durch das Fehlen eines offensichtlichen klinischen Ansprechens (d. h. keine Verringerung der Anfallshäufigkeit oder Verringerung des Krankheitsverlaufs) der Patienten mit symptomatischer Epilepsie auf Carbamazepin, Valproinsäure, Topiramat, Lamotrigin oder Phenobarbital (d. h. Anti- Antiepileptika [AED]) als Monotherapien und in unterschiedlichen Kombinationen im vorangegangenen Kalenderjahr. Ausschlusskriterien waren die Verweigerung der Teilnahme des Patienten, ungünstige Reaktionen auf die Therapie, ZNS-Entzündungszustände, chronische Psychosen, ZNS-Tumoren, Schübe chronischer somatischer oder neurologischer Erkrankungen und Blutpositivität für Hepatitis B oder C oder HIV. Der Plan beinhaltete die Aufnahme von 30 Patienten in die Studiengruppe und 30 Patienten in die Kontrollgruppe über einen Zeitraum von 5 Jahren. Die Patienten wurden randomisiert einer Standardbehandlung mit AEDs (Kontrollgruppe) oder AEDs plus autologe mesenchymale Stammzellen (MSCs, Studiengruppe) zugeteilt. Die MSCs wurden aus Knochenmarksproben desselben Patienten gewonnen und ex vivo in einem spezialisierten Labor für zelluläre Biotechnologie gereinigt und expandiert. Die MSCs wurden durch Immunphänotypisierung als CD90+CD105+CD45-CD34-Zellen charakterisiert. Nach 3 Wochen Kultivierung in vitro wurde ein Teil der MSC zusätzlich für 7 Tage in Neurocult-XF-Proliferationsmedium kultiviert, um neuroinduzierte MSCs zu erhalten. Die Neuroinduktion wurde durch das Vorhandensein der genetischen Marker Nestin und neuronenspezifischer Enolase nachgewiesen. Schließlich wurden 40–101 x 106 autologe kultivierte MSCs und 2,7–8,0 x 106 autologe neuroinduzierte MSCs geerntet, in Kochsalzlösung mit 5 % autologem Blutserum zur Injektion resuspendiert und nach einer Messung der Lebensfähigkeit (98 % Zellen) transferiert zum Klinikum.

Die Patienten in der Studiengruppe erhielten eine langsam verabreichte (über 5-10 Minuten) intravenöse Injektion von ex vivo expandierten autologen MSCs in einem Volumen von 20 ml, und 5-7 Tage später erhielt jeder Patient in der Studiengruppe eine weitere langsam verabreichte endolumbale Injektion der neuroinduzierten MSCs in einem Volumen von 5 ml. Sowohl ungünstige Reaktionen auf die MSC-Injektionen (über einen Tag nach der Durchführung der Verfahren) als auch die frühen (bis zu einem Monat) und späten (bis zu 6 Monate) klinischen Wirkungen, einschließlich Komplikationen, wurden bewertet. Ungünstige Reaktionen auf die MSC-Injektionen umfassten lokale Schmerzen oder Blutungen an der Injektionsstelle und systemische Reaktionen des Zentralnervensystems (ZNS, d. h. Hyperthermie, Müdigkeit und Myalgie). Spätere mögliche ungünstige systemische Reaktionen des ZNS und des Gefäßsystems, einschließlich infektiöser und nichtinfektiöser Komplikationen des zu kontrollierenden Krankheitsverlaufs, wurden untersucht. Alle Ereignisse wurden in Krankenkarten dokumentiert. In Fällen, in denen diese Ereignisse gefährliche Eigenschaften aufwiesen, wurden sie den Mitgliedern des Überwachungsausschusses (der Ethikkommission des Zentrums) zur Beurteilung des Ausschlusses der Patienten aus der Studie oder des Abbruchs der klinischen Studie gemeldet.

Ebenfalls evaluiert wurden die möglichen vorteilhaften Wirkungen einer MSC-basierten Therapie bei den Patienten der Studiengruppe. Diese Wirkungen wurden durch klinische Beobachtungen zu ausgewählten Therapiezeitpunkten (d. h. 3 und 12 Monate nach der Anwendung der MSC-basierten Therapie) und Elektroenzephalographie-Messungen vor und ein Jahr nach der Therapie nachgewiesen. Um die möglichen Veränderungen im Krankheitsverlauf zu bestimmen, wurden Anzeichen einer kognitiven Beeinträchtigung, Verhaltensstörungen und Veränderungen der Anfallsmerkmale und -häufigkeit ausgewertet. Für die Bewertung der kognitiven Beeinträchtigung haben wir die Mini-Mental State Examination verwendet. Die behindernde Wirkung von Krankheiten auf das tägliche Leben wurde anhand der Skala für subjektives Handicap der Epilepsie bewertet. Zustandsangst und Depression wurden unter Verwendung der Krankenhaus-Angst- und Depressionsskala bewertet. Die Veränderungen der Anfallsmerkmale und -häufigkeit wurden anhand der National Hospital Scale of Seizure Severity bewertet. Die Prozesse der freiwilligen Aufmerksamkeit und Leistung wurden mit Schulte-Tabellen nach der Methode von Kraepelin untersucht. Schulte-Tabellen wurden verwendet, um sensomotorische Reaktionszeiten und die Verteilung und Stabilität der Aufmerksamkeit zu untersuchen. Mit der „Account of Kraepelin“-Methode wurden Gesundheit, Müdigkeit und Aufmerksamkeitsstabilität untersucht. Die Bewertung des Kurzzeitgedächtnisses wurde nach der Methode des Auswendiglernens von 10 Wörtern durchgeführt; Diese Methode zielt darauf ab, das Volumen und die Geschwindigkeit des oral-auralen Gedächtnisses zu bestimmen.

Die wichtigsten klinischen Merkmale, die für die Krankheitsüberwachung verwendet werden, waren „Ja“- oder „Nein“-Antworten (in Bezug auf die Therapie), Anfallshäufigkeit (pro Monat) und Remission der Krankheit in der frühen (3 Monate) und späten (12 Monate und mehr) Zeit Punkte nach der Therapie. Um das partielle Ansprechen auf die Therapie zu bewerten, wurde die Anzahl der Patienten bewertet, die eine 50%ige Verringerung der Anfallshäufigkeit zeigten. Der Anfallstyp (d. h. generalisierte tonisch-klonische, partiell komplexe, einfach partielle und multiple Arten von Anfällen) wurde ebenfalls zusammen mit Änderungen des Anfallstyps während des Behandlungsverlaufs bewertet.

Elektroenzephalographische Aufzeichnungen wurden bei der Aufnahme und während des Überwachungszeitraums unter Verwendung eines Mizar EEG 201-Enzephalographiesystems mit Biopotentialregistrierung von 16 Körperpunkten gemäß dem "10-20"-Schema durchgeführt. Die beobachteten elektrischen Alpha-, Beta-, Theta- und Delta-Wellen wurden in 3-Minuten-Segmenten (mit weiterer Neuberechnung für jedes 1-Minuten-Segment) vor (bei Aufnahme) und 1 Jahr nach MSC-Anwendung analysiert. Die Spitzenfrequenz der Alphawellen wurde ebenfalls berechnet. Sowohl der spontane Zustand als auch der Zustand nach der Belastungssonde (Hyperventilation und Photostimulation) wurden für jeden Patienten bewertet. Die Charakteristika der Elektroenzephalographien (EEG) wurden lokalen und diffusen kortikalen Veränderungen zugeschrieben. Wir bewerteten den Paroxysmalitätsindex, die Mengen lokaler und generalisierter Spitzen epileptiformer Wellen pro Minute, die Spitzenfrequenz der EEG-Aktivität, den Index der langsamen Aktivität und zusammengefasste Punkte der EEG-Pathologiezeichen. EEGs mit epileptiformer Aktivität umfassten Spikes, Spike-Slow-Waves und Spikes mit hoher Amplitude. Die EEG - Aufzeichnungen wurden nach Standard - und zusätzlich vorgeschlagenen Kriterien durchgeführt . Alle Auswertungen wurden für die Patienten der Kontroll- und Studiengruppe durchgeführt und die erhaltenen Daten verglichen, um die möglichen Unterschiede aufgrund der zusätzlich durchgeführten MSC-basierten Therapie zu ermitteln. Die Therapie eines Patienten wurde jederzeit beendet, wenn unmittelbare ungünstige Reaktionen auf die MSC-Injektionen beobachtet wurden. Die abschließenden Beobachtungen der Patienten umfassten klinische und EEG-Bewertungen 12 Monate (oder länger) nach der Anwendung der MSC-basierten Therapie. Die zusammengefassten Daten für die Patienten in den Kontroll- und Studiengruppen wurden in einer elektronischen Datenbank zur weiteren Analyse und Interpretation gesammelt.