Veiligheid van autologe MSC-infusie om epilepsie te behandelen (AMSCDRSE)

Het belangrijkste doel van deze klinische fase 1-studie was het evalueren van de veiligheid van een toepassing van autologe mesenchymale stamcellen (MSC) als therapie voor geneesmiddelresistente symptomatische epilepsie in een één-centrum-onderzoek. Het is algemeen bekend dat medicijnresistente symptomatische epilepsie een dramatisch invaliderende aandoening is waarvoor toegepaste stationaire en poliklinische therapieën geen echt klinisch effect hebben. Daarom zijn nieuwe benaderingen nodig om remissie te bereiken, ziekteprogressie te stoppen en de levenskwaliteit van de patiënt te verhogen. Voor deze studie werden volwassen (18-60 jaar oude) patiënten (pts) van beide geslachten die leden aan geneesmiddelresistente symptomatische epilepsie met frequente (>5 voorvallen per maand) aanvallen in de studie opgenomen. Geneesmiddelresistentie werd gedefinieerd door het ontbreken van een duidelijke klinische respons (d.w.z. geen afname van de aanvalsfrequentie of vermindering van ziekteprogressie) van de patiënten met symptomatische epilepsie op carbamazepine, valproïnezuur, topiramaat, lamotrigine of fenobarbital (d.w.z. epileptische geneesmiddelen [AED's]) als monotherapieën en in verschillende combinaties gedurende het voorgaande kalenderjaar. De criteria voor uitsluiting waren de weigering van de patiënt om deel te nemen, ongunstige reacties op therapie, CZS-ontstekingsaandoeningen, chronische psychosen, CZS-tumoren, recidieven van chronische somatische of neurologische aandoeningen en bloedpositiviteit voor hepatitis B of C of HIV. Het plan omvatte de opname van 30 punten in de onderzoeksgroep en 30 punten in de controlegroep over een periode van 5 jaar. De patiënten werden gerandomiseerd naar standaardbehandeling met AED's (controlegroep) of AED's plus autologe mesenchymale stamcellen (MSC's, studiegroep). De MSC's werden verkregen uit beenmergmonsters van dezelfde patiënt en werden ex vivo gezuiverd en geëxpandeerd in een gespecialiseerd laboratorium voor cellulaire biotechnologie. De MSC's werden gekarakteriseerd door immunofenotypering als CD90+CD105+CD45-CD34-cellen. Na 3 weken kweken in vitro werd een deel van de MSC aanvullend 7 dagen gekweekt in Neurocult-XF-proliferatiemedium om neurogeïnduceerde MSC's te verkrijgen. Neuro-inductie werd bewezen door de aanwezigheid van de genetische markers nestin en neuron-specifieke enolase. Uiteindelijk werden 40-101 x 106 autologe gekweekte MSC's en 2,7 - 8,0 x 106 autologe neurogeïnduceerde MSC's geoogst, geresuspendeerd in een zoutoplossing met 5% autoloog bloedserum voor injectie en, na een meting van de levensvatbaarheid (98% cellen), overgebracht naar het klinisch centrum.

De patiënten in de onderzoeksgroep kregen één langzaam toegediende (gedurende 5-10 minuten) intraveneuze injectie van ex vivo geëxpandeerde autologe MSC's in een volume van 20 ml, en 5-7 dagen later ontving elke patiënt in de onderzoeksgroep een extra langzaam toegediende injectie. endolumbale injectie van de neurogeïnduceerde MSC's in een volume van 5 ml. Zowel de ongunstige reacties op de MSC-injecties (gedurende één dag na de uitvoering van de procedures) als de vroege (tot een maand) en late (tot 6 maanden) klinische effecten, inclusief complicaties, werden geëvalueerd. Ongunstige reacties op de MSC-injecties omvatten lokale pijn of bloeding op de injectieplaats en systemische reacties van het centrale zenuwstelsel (CZS, d.w.z. hyperthermie, vermoeidheid en myalgie). Latere mogelijke ongunstige systemische reacties van het CZS en vasculaire systeem, waaronder infectieuze en niet-infectieuze complicaties van de progressie van de te beheersen ziekte, werden onderzocht. Alle gebeurtenissen werden gedocumenteerd in medische kaarten. In gevallen waarin deze gebeurtenissen gevaarlijke kenmerken vertoonden, werden ze gemeld aan de leden van de toezichtsraad (de ethische commissie van het centrum) voor de evaluatie van de uitsluiting van de patiënten van de studie of de beëindiging van de klinische studie.

Ook werden de mogelijke gunstige effecten van op MSC gebaseerde therapie geëvalueerd in de punten van de onderzoeksgroep. Deze effecten werden gedetecteerd via klinische observaties op geselecteerde therapietijdstippen (d.w.z. 3 en 12 maanden na de toepassing van de MSC-gebaseerde therapie) en elektro-encefalografische metingen voorafgaand aan en één jaar na de therapie. Om de mogelijke veranderingen in ziekteprogressie te bepalen, werden tekenen van cognitieve stoornissen, gedragsstoornissen en veranderingen in aanvalskenmerken en -frequentie geëvalueerd. Voor de evaluatie van cognitieve stoornissen gebruikten we het Mini-Mental State Examination. Het belemmerende effect van ziekte op het dagelijks leven werd gescoord met behulp van de Subjective Handicap of Epilepsy Scale. Toestandsangst en depressie werden beoordeeld met behulp van de ziekenhuisangst- en depressieschaal. Veranderingen in aanvalskenmerken en -frequentie werden geëvalueerd met behulp van de National Hospital Scale of Seizure Severity. De processen van vrijwillige aandacht en prestatie werden bestudeerd met Schulte-tafels volgens de methode van Kraepelin. Schulte-tabellen werden gebruikt om sensomotorische reactietijden en de verdeling en stabiliteit van aandacht te bestuderen. De methode "Account van Kraepelin" werd gebruikt om gezondheid, vermoeidheid en de stabiliteit van aandacht te bestuderen. De beoordeling van het kortetermijngeheugen werd uitgevoerd via de methode van het onthouden van 10 woorden; deze methode heeft tot doel het volume en de snelheid van het oraal-auditieve geheugen te bepalen.

De belangrijkste klinische kenmerken die worden gebruikt voor ziektemonitoring waren "ja" of "nee" reacties (met betrekking tot therapie), aanvalsfrequentie (per maand) en remissie van de ziekte in de vroege (3 maanden) en late (12 maanden en meer) tijd punten na therapie. Om gedeeltelijke reacties op therapie te evalueren, werd het aantal patiënten beoordeeld dat 50% vermindering van de aanvalsfrequentie vertoonde. Het aanvalstype (d.w.z. gegeneraliseerd tonisch-klonisch, partieel complex, enkelvoudig partieel en meerdere soorten aanvallen) werd ook geëvalueerd samen met veranderingen in het aanvalstype tijdens de behandelingskuur.

Elektro-encefalografie-opnamen werden uitgevoerd bij opname en gedurende de bewakingsperiode met behulp van een Mizar EEG 201-encefalografiesysteem met biopotentiaalregistratie van 16 lichaamspunten volgens het "10-20"-schema. De waargenomen elektrische alfa-, bèta-, theta- en deltagolven werden geanalyseerd in segmenten van 3 minuten (met verdere herberekening voor elk segment van 1 minuut) voorafgaand aan (bij opname) en 1 jaar na MSC-toepassing. Ook werd de piekfrequentie van de alfagolven berekend. Zowel de spontane toestand als de toestand na de oplaadsonde (hyperventilatie en fotostimulatie) werden voor elke patiënt beoordeeld. De kenmerken van de elektro-encefalografieën (EEG) werden toegeschreven aan lokale en diffuse corticale veranderingen. We evalueerden de paroxysmaliteitsindex, hoeveelheden lokale en gegeneraliseerde pieken van epileptiforme golven per minuut, piekfrequentie van EEG-activiteit, index van langzame activiteit en samengevatte punten van EEG-pathologietekens. EEG's met epileptiforme activiteit omvatten spikes, spike-trage golven en spikes met hoge amplitude. De EEG-opnamen werden uitgevoerd op basis van standaard en aanvullend voorgestelde criteria. Alle beoordelingen werden uitgevoerd voor de punten in de controle- en studiegroepen, en de verkregen gegevens werden vergeleken om de mogelijke verschillen te bepalen als gevolg van de extra uitgevoerde MSC-gebaseerde therapie. De therapie van een patiënt werd op elk moment stopgezet als onmiddellijk ongunstige reacties op de MSC-injecties werden waargenomen. De laatste observaties van de patiënten omvatten klinische en EEG-beoordelingen 12 maanden (of meer) na de toepassing van de op MSC gebaseerde therapie. De samengevatte gegevens voor de punten in de controle- en studiegroepen werden verzameld in een elektronische database voor verdere analyse en interpretaties.