Segurança da infusão autóloga de MSC para tratar a epilepsia (AMSCDRSE)

O principal objetivo deste ensaio clínico de fase 1 foi avaliar a segurança da aplicação de células-tronco mesenquimais (MSC) autólogas como terapia para epilepsia sintomática resistente a medicamentos em um estudo de um centro. É bem conhecido que a epilepsia sintomática resistente a medicamentos é um distúrbio dramaticamente invalidante para o qual as terapias estacionárias e ambulatoriais aplicadas não têm efeito clínico real. Portanto, novas abordagens são necessárias para alcançar a remissão, interromper a progressão da doença e aumentar a qualidade de vida do paciente. Para este estudo, pacientes adultos (18-60 anos de idade) (pts) de ambos os sexos sofrendo de epilepsia sintomática resistente a medicamentos com convulsões frequentes (> 5 eventos por mês) foram incluídos no estudo. A resistência aos medicamentos foi definida pela falta de qualquer resposta clínica evidente (ou seja, sem diminuição na frequência de convulsões ou redução na progressão da doença) dos pacientes com epilepsia sintomática à carbamazepina, ácido valpróico, topiramato, lamotrigina ou fenobarbital (ou seja, anti- drogas epilépticas [DAEs]) como monoterapias e em diferentes combinações durante o ano civil anterior. Os critérios de exclusão foram a recusa do paciente em participar, reações desfavoráveis ​​à terapia, condições inflamatórias do SNC, psicoses crônicas, tumores do SNC, recaídas de doenças somáticas ou neurológicas crônicas e sorologia positiva para hepatite B ou C ou HIV. O plano incluiu a inclusão de 30 pts no grupo de estudo e 30 pts no grupo de controle durante um período de 5 anos. Os pacientes foram randomizados para tratamento padrão com AEDs (grupo controle) ou AEDs mais células-tronco mesenquimais autólogas (MSCs, grupo de estudo). As MSCs foram obtidas de amostras de medula óssea do mesmo paciente e foram purificadas e expandidas ex vivo em laboratório especializado em biotecnologia celular. As MSCs foram caracterizadas por imunofenotipagem como células CD90+CD105+CD45-CD34. Após 3 semanas de cultivo in vitro, uma porção das MSC foi adicionalmente cultivada por 7 dias em meio de proliferação Neurocult-XF para obter MSCs neuroinduzidas. A neuroindução foi comprovada pela presença dos marcadores genéticos nestina e enolase neuroespecífica. Finalmente, 40-101 x 106 MSCs cultivadas autólogas e 2,7 - 8,0 x 106 MSCs neuroinduzidas autólogas foram colhidas, ressuspensas em solução salina contendo 5% de soro sanguíneo autólogo para injeção e, após uma medição da viabilidade (98% de células), transferidas ao centro clínico.

Os pacientes do grupo de estudo receberam uma injeção intravenosa de entrega lenta (durante 5 a 10 minutos) de MSCs autólogas expandidas ex vivo em um volume de 20 ml e, 5 a 7 dias depois, cada paciente do grupo de estudo recebeu uma injeção adicional de entrega lenta injeção endolumbal das MSCs neuroinduzidas em um volume de 5 ml. Foram avaliadas tanto as reações desfavoráveis ​​às injeções de MSC (mais de um dia após a realização dos procedimentos) quanto os efeitos clínicos precoces (até um mês) e tardios (até 6 meses), incluindo complicações. As reações desfavoráveis ​​às injeções de MSC incluíram dor local ou hemorragia no local da injeção e reações sistêmicas do sistema nervoso central (SNC, ou seja, hipertermia, fadiga e mialgia). Posteriormente, foram examinadas potenciais reações sistêmicas desfavoráveis ​​do sistema nervoso central e vascular, incluindo complicações infecciosas e não infecciosas da progressão da doença a ser controlada. Todos os eventos foram documentados em fichas médicas. Nos casos em que esses eventos apresentaram características perigosas, eles foram comunicados aos membros do conselho de monitoramento (comitê de ética do centro) para avaliação da exclusão dos pacientes do estudo ou encerramento do estudo clínico.

Também foram avaliados os possíveis efeitos benéficos da terapia baseada em MSC nos pacientes do grupo de estudo. Esses efeitos foram detectados por meio de observações clínicas em pontos de tempo de terapia selecionados (ou seja, 3 e 12 meses após a aplicação da terapia baseada em MSC) e medições eletroencefalográficas antes e um ano após a terapia. Para determinar as possíveis alterações na progressão da doença, foram avaliados sinais de comprometimento cognitivo, distúrbios comportamentais e alterações nas características e frequência das crises. Para a avaliação do comprometimento cognitivo, utilizou-se o Mini-Exame do Estado Mental. O efeito incapacitante da doença na vida diária foi pontuado usando a Escala de Handicap Subjetivo da Epilepsia. O estado de ansiedade e depressão foram avaliados por meio da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão. Alterações nas características e frequência das crises foram avaliadas usando a Escala Hospitalar Nacional de Gravidade das Convulsões. Os processos de atenção voluntária e desempenho foram estudados com tabelas de Schulte segundo os métodos de Kraepelin. As tabelas de Schulte foram usadas para estudar os tempos de reação sensório-motores e a distribuição e estabilidade da atenção. O método "Conta de Kraepelin" foi usado para estudar a saúde, a fadiga e a estabilidade da atenção. A avaliação da memória de curto prazo foi realizada por meio do método de memorização de 10 palavras; este método visa determinar o volume e a velocidade da memória oral-aural.

As principais características clínicas utilizadas para o monitoramento da doença foram respostas "sim" ou "não" (em relação à terapia), frequência de crises (por mês) e remissão da doença no início (3 meses) e tardio (12 meses e mais) pontos após a terapia. Para avaliar as respostas parciais à terapia, foram avaliados os números de pts que exibiram reduções de 50% na frequência de convulsões. O tipo de convulsão (isto é, tônico-clônica generalizada, complexa parcial, parcial simples e vários tipos de convulsão) também foi avaliado juntamente com as alterações no tipo de convulsão durante o curso do tratamento.

Os registros eletroencefalográficos foram realizados na admissão e durante o período de monitoramento usando um sistema de encefalografia Mizar EEG 201 com registro de biopotencial de 16 pontos do corpo de acordo com o esquema "10-20". As ondas elétricas alfa, beta, teta e delta observadas foram analisadas em segmentos de 3 min (com novo recálculo para cada segmento de 1 minuto) antes (na admissão) e 1 ano após a aplicação do MSC. A frequência de pico das ondas alfa também foi calculada. Tanto o estado espontâneo quanto o estado após a sonda de carregamento (hiperventilação e fotoestimulação) foram avaliados para cada paciente. As características dos eletroencefalogramas (EEG) foram atribuídas a alterações corticais locais e difusas. Avaliamos o índice de paroxismo, quantidades de picos locais e generalizados de ondas epileptiformes por minuto, pico de frequência de atividade de EEG, índice de atividade lenta e pontos resumidos de sinais de patologia de EEG. EEGs com atividade epileptiforme incluíram picos, picos de ondas lentas e picos de alta amplitude. As gravações de EEG foram realizadas com base em critérios padrão e propostos adicionalmente. Todas as avaliações foram realizadas para os pts nos grupos de controle e estudo, e os dados obtidos foram comparados para determinar as possíveis diferenças devido à terapia baseada em MSC realizada adicionalmente. A terapia de um paciente foi encerrada a qualquer momento se fossem observadas reações desfavoráveis ​​imediatas às injeções de MSC. As observações finais dos pacientes incluíram avaliações clínicas e de EEG 12 meses (ou mais) após a aplicação da terapia baseada em MSC. Os dados resumidos para os pts nos grupos de controle e estudo foram coletados em um banco de dados eletrônico para posterior análise e interpretações.