Prospektiv undersökning av oxidativ stress vid West Nile-virusinfektion (PROWENI)

WNND

40 försökspersoner med West-Nile Neuroinvasive Disease kommer att rekryteras

WNF

40 personer med West-Nile Fever kommer att rekryteras

kontroller

20 kontroll kommer att rekryteras. Dessa kontroller kommer att åldersmatchas efter fallen.

Mät redoxstatus

Ett multiparameterindex för oxidativ stress kommer att beräknas för att mäta och sammanfatta redoxstatus i fall och åldersmatchade kontroller. Samband mellan redoxstatus och kliniska, neuropsykologiska och radiologiska utfall kommer att undersökas. Vi kommer också att undersöka den relativa känsligheten hos separata biomarkörer för oxidativ stress och autofagi som kliniska prediktorer för svårighetsgrad av WNV-infektion.

Bedömning av neurologiska underskott

Som en del av den beskrivande analysen av biomarkörer för sjukdomens svårighetsgrad och för att studera neurologiska följder av WNV-infektion. Kommer att bedömas: specifikt bedömningar av kranialnerver II-XII, motorisk styrka i övre och nedre extremiteter, sensoriska tester för nålstick och vibrationer, djupa senreflexer, gång, koordination och rörelseavvikelser

Neuropsykologisk prestation

Studera de neuropsykologiska följderna av WNV-infektion under en 12-månaders uppföljningsperiod inom följande nyckeldomäner: Uppmärksamhet, Minne, Exekutiv funktion, Emotion & Social Kognition, Psykomotorisk hastighet

Longitudinell bedömning av funktionsstatus Studera de neurologiska och neuropsykologiska följderna av WNV-infektion under en 12-månaders uppföljningsperiod.

ECOG/WHO PS under en 12-månaders uppföljning.

MRT-avvikelser

Del av beskrivande analys av kliniska markörer för sjukdomens svårighetsgrad

Järnhalt i hjärnan

En del av den beskrivande analysen av kliniska markörer för sjukdomens svårighetsgrad: Kvalitativ analys per neuroanatomisk region genom järnkänslig MRI-sekvens (SWI)

Oftalmologiska avvikelser

Som en del av den beskrivande analysen av kliniska markörer för sjukdomens svårighetsgrad kommer oftalmologiska avvikelser att bedömas genom spaltlampsundersökning

serum S100b koncentration

Som en del av den beskrivande analysen av kliniska markörer för sjukdomens svårighetsgrad kommer S100b-koncentrationen att mätas för att bedöma blod-hjärnbarriärens integritet

serum NSE-koncentration

Som en del av den beskrivande analysen av kliniska markörer för sjukdomens svårighetsgrad kommer NSE-koncentrationen att mätas för att bedöma blod-hjärnbarriärens integritet

Analys av laboratorieprestandaegenskaper (t.ex. känslighet) för WNV-specifik RT-PCR och viral isolering i kliniska prover, jämfört med sammansatt diagnos av WNV-infektion

Bekräftad WNV-infektion definieras som ett eller flera av följande kriterier:

1. Serokonvertering av anti-WNV IgG-antikroppar (Indirekt immunofluorescenstestning (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Tyskland) i konvalescentserum (20 dagar efter symtomdebut) (alla deltagare)
2. 4-faldig ökning av anti-WNV IgG-antikroppar i konvalescent serum, jämfört med screeningprovet (IIFT).
3. Anti-WNV IgM-antikroppsdetektion (ELISA) i CSF* (vid VBH) (*CSF provtas endast när kliniskt indicerat).
4. Positiv WNV-specifik RT-PCR resulterar i serum, urin eller CSF i prover som erhållits vid screening.
5. Virusisolering genom utväxtanalys i prover som erhållits vid screening

Beskrivning av molekylär epidemiologi för infekterande WNV-stam(er) och diagnostisk prestanda för viral utväxt.

Tidsramen för WNV-detektion efter symtomdebut genom omvänd transkriptaspolymeraskedjereaktion i realtid (RT-PCR) eller virusisolering genom utväxt från blod eller CSF begränsas av den snabba nedgången av cirkulerande virus. Eftersom WNV RNA-detektionsfönstret i urin kan vara längre (upp till 14 dagar), kommer RT-PCR att utföras på alla kliniska prover vid rekrytering. Målsekvenserna är en konserverad region i 5'UTR-regionen och en del av kapsidgenen av WNV och detekterar både linje 1 och 2 WNV. WNV har framgångsrikt isolerats från urin, på ca. 40 % av proverna erhölls inom 8 dagar efter symtomdebut. WNV-isolering kommer att göras i lågpassage Vero E6-celler och BHK21-celler från urinprover med en hög WNV RNA-belastning (cykeltröskelvärden (Ct)-värden

Identifiering av potentiella genetiska signaturer som korrelerar med virulens (neuro-invasion och sjuklighet) i vår kohort.

Helgenomsekvensering (WGS) kommer att utföras på en undergrupp av RT-PCR-positiva serum-, urin- och CSF-prover. Detta kommer att tillåta oss att undersöka den tidsmässiga och rumsliga uppdelningen av West Nile-linjerna i Rumänien samt utöka vår förståelse av genetisk uppdelning inom värdar (urin, serum, CSF). Dessutom kommer de erhållna isolaten att sekvenseras (från den virala utväxtanalysen) för att bedöma potentiella anpassningar som viruset genomgår under isolering. Slutligen, i en genomomfattande associationsstudie, kommer de erhållna virala sekvenserna att jämföras med de prospektivt insamlade kliniska data, för att identifiera potentiella genetiska signaturer som korrelerar med virulens, neuroinvasion och sjuklighet. Våra data kommer att jämföras med befintliga data om genetiska bestämningsfaktorer för virulens, såsom närvaron av ett glykosyleringsställe i E-proteinet, substitutioner i icke-strukturella proteiner 3, 4B eller 5, eller variation i den icke-kodande 3'-regionen.