Проспективное исследование окислительного стресса при вирусной инфекции Западного Нила (PROWENI)

WNND

Будет набрано 40 человек с нейроинвазивным заболеванием Западного Нила.

ВНФ

Будет завербовано 40 человек с лихорадкой Западного Нила.

контролирует

Будет набрано 20 контрольных. Возраст этих элементов управления будет соответствовать случаям.

Измерьте окислительно-восстановительный статус

Будут рассчитаны многопараметрические индексы окислительного стресса для измерения и обобщения окислительно-восстановительного статуса в случаях и контрольных группах соответствующего возраста. Будет исследована связь между окислительно-восстановительным статусом и клиническими, нейропсихологическими и рентгенологическими результатами. Мы также рассмотрим относительную чувствительность отдельных биомаркеров окислительного стресса и аутофагии в качестве клинических предикторов тяжести инфекции ВЗН.

Оценка неврологического дефицита

В рамках описательного анализа биомаркеров тяжести заболевания и изучения неврологических последствий инфекции ВЗН. Будут оцениваться: особенно оценка черепных нервов II-XII, двигательная сила в верхних и нижних конечностях, сенсорное тестирование на укол и вибрацию, глубокие сухожильные рефлексы, походка, координация и двигательные нарушения.

Нейропсихологическая производительность

Изучите нейропсихологические последствия инфекции ВЗН в течение 12-месячного периода наблюдения в следующих ключевых областях: внимание, память, исполнительная функция, эмоции и социальное познание, скорость психомоторики.

Продольная оценка функционального состояния Изучите неврологические и нейропсихологические последствия инфекции ВЗН в течение 12-месячного периода наблюдения.

ECOG/WHO PS в течение 12 месяцев наблюдения.

МРТ-аномалии

Часть описательного анализа клинических маркеров тяжести заболевания

Содержание железа в мозге

Часть описательного анализа клинических маркеров тяжести заболевания: качественный анализ нейроанатомической области с помощью чувствительной к железу последовательности МРТ (SWI)

Офтальмологические аномалии

В рамках описательного анализа клинических маркеров тяжести заболевания офтальмологические нарушения будут оцениваться с помощью осмотра с помощью щелевой лампы.

концентрация S100b в сыворотке

В рамках описательного анализа клинических маркеров тяжести заболевания будет измеряться концентрация S100b для оценки целостности гематоэнцефалического барьера.

концентрация NSE в сыворотке

В рамках описательного анализа клинических маркеров тяжести заболевания будет измеряться концентрация NSE для оценки целостности гематоэнцефалического барьера.

Анализ характеристик лабораторных показателей (например, чувствительности) ВЗН-специфичной ОТ-ПЦР и выделения вируса в клинических образцах по сравнению с комбинированным диагнозом ВЗН-инфекции

Подтвержденная инфекция ВЗН определяется как один или несколько из следующих критериев:

1. Сероконверсия антител IgG к ВЗН (тестирование непрямой иммунофлуоресценции (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Любек, Германия) в сыворотке реконвалесцентов (20 дней после появления симптомов) (все участники)
2. 4-кратное увеличение антител IgG к ВЗН в сыворотке выздоравливающих по сравнению со скрининговым образцом (IIFT).
3. Обнаружение антител IgM к ВЗН (ELISA) в ЦСЖ* (при ВГБ) (*образцы ЦСЖ берутся только при наличии клинических показаний).
4. Положительный результат ОТ-ПЦР, специфичный для ВЗН, в сыворотке, моче или спинномозговой жидкости в образцах, полученных при скрининге.
5. Выделение вируса методом анализа роста в образцах, полученных при скрининге

Описание молекулярной эпидемиологии инфекционного штамма (штаммов) ВЗН и диагностической эффективности вирусного роста.

Временные рамки для обнаружения ВЗН после появления симптомов с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой в реальном времени (ОТ-ПЦР) или выделения вируса путем выделения из крови или спинномозговой жидкости ограничены быстрым снижением количества циркулирующего вируса. Поскольку окно обнаружения РНК ВЗН в моче может быть более продолжительным (до 14 дней), ОТ-ПЦР будет проводиться на всех клинических образцах при наборе. Последовательности-мишени представляют собой консервативную область в области 5'UTR и часть капсидного гена ВЗН и обнаруживают обе линии 1 и 2 ВЗН. ВЗН был успешно выделен из мочи прибл. 40% образцов, полученных в течение 8 дней после появления симптомов. Выделение ВЗН будет предпринято в клетках Vero E6 с низким пассажем и клетках BHK21 из образцов мочи с высокой нагрузкой РНК ВЗН (порог цикла (Ct) - значения

Выявление потенциальных генетических признаков, которые коррелируют с вирулентностью (нейроинвазией и заболеваемостью) в нашей когорте.

Полногеномное секвенирование (WGS) будет выполнено на подмножестве образцов сыворотки, мочи и спинномозговой жидкости с положительным результатом ОТ-ПЦР. Это позволит нам исследовать временную и пространственную компартментализацию линий Западного Нила в Румынии, а также расширить наше понимание генетической компартментализации внутри хозяев (моча, сыворотка, спинномозговая жидкость). Кроме того, полученные изоляты будут секвенированы (из анализа вирусного роста) для оценки потенциальных адаптаций, которым подвергается вирус во время выделения. Наконец, в рамках полногеномного ассоциативного исследования полученные вирусные последовательности будут сравниваться с проспективно собранными клиническими данными для выявления потенциальных генетических сигнатур, которые коррелируют с вирулентностью, нейроинвазией и заболеваемостью. Наши данные будут сравниваться с существующими данными о генетических детерминантах вирулентности, таких как наличие сайта гликозилирования в белке Е, замены в неструктурных белках 3, 4В или 5 или вариации в 3'-некодирующей области.