Prospectief onderzoek naar oxidatieve stress bij West-Nijlvirusinfectie (PROWENI)

WNND

Er zullen 40 proefpersonen met West-Nijl neuro-invasieve ziekte worden aangeworven

WNF

Er zullen 40 proefpersonen met West-Nijlkoorts worden aangeworven

controles

20 controle zal worden aangeworven. Deze bedieningselementen worden qua leeftijd afgestemd op de cases.

Meet de redoxstatus

Een multiparameterindex van oxidatieve stress zal worden berekend om de redoxstatus te meten en samen te vatten in gevallen en leeftijdsafhankelijke controles. Associatie tussen de redoxstatus en klinische, neuropsychologische en radiologische uitkomsten zal worden onderzocht. We zullen ook de relatieve gevoeligheid onderzoeken van afzonderlijke biomarkers van oxidatieve stress en autofagie als klinische voorspellers van de ernst van WNV-infectie.

Beoordeling van neurologische tekorten

Als onderdeel van de beschrijvende analyse van biomarkers van de ernst van de ziekte en om neurologische gevolgen van WNV-infectie te bestuderen. Wordt beoordeeld: met name onderzoek naar hersenzenuwen II-XII, motorische kracht in bovenste en onderste extremiteiten, sensorisch testen op speldenprik en trillingen, diepe peesreflexen, gang, coördinatie en bewegingsafwijkingen

Neuropsychologische prestaties

Bestudeer de neuropsychologische gevolgen van WNV-infectie gedurende een follow-upperiode van 12 maanden in de volgende sleuteldomeinen: aandacht, geheugen, uitvoerende functie, emotie en sociale cognitie, psychomotorische snelheid

Longitudinale beoordeling van functionele status Bestudeer de neurologische en neuropsychologische gevolgen van WNV-infectie gedurende een follow-upperiode van 12 maanden.

ECOG/WHO PS tijdens een follow-up van 12 maanden.

MRI-afwijkingen

Onderdeel van beschrijvende analyse van klinische markers van de ernst van de ziekte

Hersenen ijzergehalte

Deel van de beschrijvende analyse van klinische markers van de ernst van de ziekte: Kwalitatieve analyse per neuroanatomisch gebied door ijzergevoelige MRI-sequentie (SWI)

Oogheelkundige afwijkingen

Als onderdeel van de beschrijvende analyse van klinische markers van de ernst van de ziekte, zullen oogheelkundige afwijkingen worden beoordeeld door middel van spleetlamponderzoek

serum S100b-concentratie

Als onderdeel van de beschrijvende analyse van klinische markers van de ernst van de ziekte zal de S100b-concentratie worden gemeten om de integriteit van de bloed-hersenbarrière te beoordelen

serum NSE-concentratie

Als onderdeel van de beschrijvende analyse van klinische markers van de ernst van de ziekte zal de NSE-concentratie worden gemeten om de integriteit van de bloed-hersenbarrière te beoordelen

Analyse van laboratoriumprestatiekenmerken (bijv. gevoeligheid) van WNV-specifieke RT-PCR en virale isolatie in klinische monsters, vergeleken met samengestelde diagnose van WNV-infectie

Bevestigde WNV-infectie wordt gedefinieerd als een of meer van de volgende criteria:

1. Seroconversie van anti-WNV IgG-antilichamen (Indirecte immunofluorescentietest (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Duitsland) in herstellend serum (20 dagen na aanvang van de symptomen) (alle deelnemers)
2. 4-voudige toename van anti-WNV IgG-antilichamen in herstellend serum, vergeleken met het screeningsmonster (IIFT).
3. Anti-WNV IgM-antilichaamdetectie (ELISA) in CSF* (bij VBH) (*CSF alleen bemonsterd indien klinisch geïndiceerd).
4. Positief WNV-specifiek RT-PCR-resultaat in serum, urine of CSF in monsters verkregen bij screening.
5. Virusisolatie door uitgroeitest in monsters verkregen bij screening

Beschrijving van moleculaire epidemiologie van infecterende WNV-stam(men) en diagnostische prestaties van virale uitgroei.

Het tijdsbestek voor WNV-detectie na het begin van de symptomen door real-time reverse transcriptase-polymerasekettingreactie (RT-PCR) of virusisolatie door uitgroei uit bloed of CSF wordt beperkt door de snelle achteruitgang van het circulerend virus. Omdat het WNV RNA-detectievenster in urine langer kan zijn (tot 14 dagen), zal RT-PCR worden uitgevoerd op alle klinische monsters bij rekrutering. De doelwitsequenties zijn een geconserveerd gebied in het 5'UTR-gebied en maken deel uit van het capside-gen van WNV en detecteren zowel lijn 1 als lijn 2 WNV. WNV is met succes geïsoleerd uit urine, in ca. 40% van de monsters verkregen binnen 8 dagen na het begin van de symptomen. WNV-isolatie zal worden geprobeerd in laagdoorlaatbare Vero E6-cellen en BHK21-cellen uit urinemonsters met een hoge WNV RNA-belasting (Cycle threshold (Ct)-waarden

Identificatie van potentiële genetische handtekeningen die correleren met virulentie (neuro-invasie en morbiditeit) in ons cohort.

Whole Genome Sequencing (WGS) zal worden uitgevoerd op een subset van RT-PCR-positieve serum-, urine- en CSF-monsters. Dit zal ons in staat stellen om de temporele en ruimtelijke compartimentering van de West-Nijllijnen in Roemenië te onderzoeken en om ons begrip van genetische compartimentering binnen gastheren (urine, serum, CSF) uit te breiden. Bovendien zullen de verkregen isolaten worden gesequenced (vanuit de virale uitgroeitest) om mogelijke aanpassingen te beoordelen die het virus ondergaat tijdens isolatie. Ten slotte zullen in een genoombrede associatiestudie de verkregen virale sequenties worden vergeleken met de prospectief verzamelde klinische gegevens, om potentiële genetische handtekeningen te identificeren die correleren met virulentie, neuro-invasie en morbiditeit. Onze gegevens zullen worden vergeleken met bestaande gegevens over genetische determinanten van virulentie zoals de aanwezigheid van een glycosyleringsplaats in het E-eiwit, substituties in niet-structurele eiwitten 3, 4B of 5, of variatie in het 3' niet-coderende gebied.