Investigação Prospectiva do Estresse Oxidativo na Infecção pelo Vírus do Nilo Ocidental (PROWENI)

WNND

40 indivíduos com Doença Neuroinvasiva do Nilo Ocidental serão recrutados

WNF

40 indivíduos com febre do Nilo Ocidental serão recrutados

controles

20 controles serão recrutados. Esses controles terão idade correspondente aos casos.

Meça o status redox

Um índice multiparamétrico de estresse oxidativo será calculado para medir e resumir o estado redox em casos e controles pareados por idade. Será investigada a associação entre o status redox e desfechos clínicos, neuropsicológicos e radiológicos. Também examinaremos a sensibilidade relativa de biomarcadores separados de estresse oxidativo e autofagia como preditores clínicos da gravidade da infecção pelo WNV.

Avaliação de déficits neurológicos

Como parte da análise descritiva dos biomarcadores da gravidade da doença e para estudar as sequelas neurológicas da infecção pelo WNV. Serão avaliados: avaliações específicas dos nervos cranianos II- XII, força motora nas extremidades superiores e inferiores, testes sensoriais para alfinetadas e vibração, reflexos tendinosos profundos, marcha, coordenação e anormalidades do movimento

Desempenho neuropsicológico

Estudar as sequelas neuropsicológicas da infecção pelo WNV durante um período de acompanhamento de 12 meses nos seguintes domínios principais: Atenção, Memória, Função Executiva, Emoção e Cognição Social, Velocidade Psicomotora

Avaliação longitudinal do estado funcional Estude as sequelas neurológicas e neuropsicológicas da infecção pelo WNV durante um período de acompanhamento de 12 meses.

ECOG/OMS PS durante um acompanhamento de 12 meses.

Anormalidades na ressonância magnética

Parte da análise descritiva de marcadores clínicos de gravidade da doença

Teor de ferro cerebral

Parte da análise descritiva dos marcadores clínicos de gravidade da doença: Análise qualitativa por região neuroanatômica por sequência de ressonância magnética (SWI) sensível ao ferro

Anormalidades oftalmológicas

Como parte da análise descritiva dos marcadores clínicos de gravidade da doença, as anormalidades oftalmológicas serão avaliadas por exame de lâmpada de fenda

concentração sérica de S100b

Como parte da análise descritiva de marcadores clínicos de gravidade da doença, a concentração de S100b será medida para avaliar a integridade da barreira hematoencefálica

concentração sérica de NSE

Como parte da análise descritiva de marcadores clínicos de gravidade da doença, a concentração de NSE será medida para avaliar a integridade da barreira hematoencefálica

Análise das características de desempenho laboratorial (por exemplo, sensibilidade) de RT-PCR específico para WNV e isolamento viral em amostras clínicas, em comparação com diagnóstico composto de infecção por WNV

A infecção confirmada pelo WNV é definida como um ou mais dos seguintes critérios:

1. Soroconversão de anticorpos IgG anti-WNV (teste de imunofluorescência indireta (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Alemanha) em soro convalescente (20 dias após o início dos sintomas) (todos os participantes)
2. Aumento de 4 vezes de anticorpos IgG anti-WNV no soro convalescente, em comparação com a amostra de triagem (IIFT).
3. Detecção de anticorpo IgM anti-WNV (ELISA) no LCR* (em VBH) (*LCR amostrado apenas quando clinicamente indicado).
4. Resultado positivo de RT-PCR específico para WNV em soro, urina ou LCR em amostras obtidas na triagem.
5. Isolamento do vírus por ensaio de crescimento em amostras obtidas na triagem

Descrição da epidemiologia molecular da(s) cepa(s) infectante(s) do WNV e desempenho do diagnóstico de crescimento viral.

O período de tempo para a detecção do WNV após o início dos sintomas pela reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa em tempo real (RT-PCR) ou isolamento do vírus por crescimento a partir do sangue ou LCR é limitado pelo rápido declínio do vírus circulante. Como a janela de detecção de RNA do WNV na urina pode ser mais longa (até 14 dias), a RT-PCR será realizada em todas as amostras clínicas no momento do recrutamento. As sequências-alvo são uma região conservada na região 5'UTR e parte do gene do capsídeo do WNV e detecta as linhagens 1 e 2 do WNV. O WNV foi isolado com sucesso da urina, em aprox. 40% das amostras obtidas até 8 dias após o início dos sintomas. O isolamento do WNV será tentado em células Vero E6 de passagem baixa e células BHK21 de amostras de urina com alta carga de RNA do WNV (valores do Limiar do ciclo (Ct)

Identificação de potenciais assinaturas genéticas que se correlacionam com virulência (neuroinvasão e morbidade) em nossa coorte.

O sequenciamento completo do genoma (WGS) será realizado em um subconjunto de amostras de soro, urina e LCR positivos para RT-PCR. Isso nos permitirá investigar a compartimentalização temporal e espacial das linhagens do Nilo Ocidental na Romênia, bem como expandir nossa compreensão da compartimentalização genética dentro dos hospedeiros (urina, soro, LCR). Além disso, os isolados obtidos serão sequenciados (a partir do ensaio de crescimento viral) para avaliar as possíveis adaptações que o vírus sofre durante o isolamento. Finalmente, em um estudo de associação ampla do genoma, as sequências virais obtidas serão comparadas com os dados clínicos coletados prospectivamente, para identificar potenciais assinaturas genéticas que se correlacionam com virulência, neuroinvasão e morbidade. Nossos dados serão comparados com dados existentes sobre determinantes genéticos de virulência como a presença de sítio de glicosilação na proteína E, substituições nas proteínas não estruturais 3, 4B ou 5, ou variação na região 3' não codificante.