Prospektive Untersuchung von oxidativem Stress bei einer West-Nil-Virusinfektion (PROWENI)

WNN

40 Patienten mit neuroinvasiver West-Nil-Erkrankung werden rekrutiert

WNF

40 Probanden mit West-Nil-Fieber werden rekrutiert

steuert

20 Kontrollpersonen werden rekrutiert. Diese Kontrollen werden altersmäßig auf die Fälle abgestimmt.

Messen Sie den Redox-Status

Ein Multiparameter-Index des oxidativen Stresses wird berechnet, um den Redoxstatus in Fällen und altersangepassten Kontrollen zu messen und zusammenzufassen. Der Zusammenhang zwischen dem Redoxstatus und klinischen, neuropsychologischen und radiologischen Ergebnissen wird untersucht. Wir werden auch die relative Sensitivität separater Biomarker für oxidativen Stress und Autophagie als klinische Prädiktoren für die Schwere der WNV-Infektion untersuchen.

Bewertung von neurologischen Defiziten

Im Rahmen der deskriptiven Analyse von Biomarkern zur Schwere der Erkrankung und zur Untersuchung neurologischer Folgeerscheinungen einer WNV-Infektion. Bewertet werden: insbesondere Beurteilungen der Hirnnerven II-XII, motorische Kraft in den oberen und unteren Extremitäten, sensorische Tests für Nadelstiche und Vibrationen, tiefe Sehnenreflexe, Gang, Koordination und Bewegungsanomalien

Neuropsychologische Leistung

Untersuchen Sie die neuropsychologischen Folgen einer WNV-Infektion während einer 12-monatigen Nachbeobachtungszeit in den folgenden Schlüsselbereichen: Aufmerksamkeit, Gedächtnis, exekutive Funktion, Emotion und soziale Kognition, psychomotorische Geschwindigkeit

Längsschnittbeurteilung des Funktionsstatus Untersuchen Sie die neurologischen und neuropsychologischen Folgen einer WNV-Infektion während einer 12-monatigen Nachbeobachtungszeit.

ECOG/WHO PS während einer 12-monatigen Nachbeobachtung.

MRT-Auffälligkeiten

Teil der deskriptiven Analyse klinischer Marker für den Schweregrad der Erkrankung

Eisengehalt im Gehirn

Teil der deskriptiven Analyse klinischer Marker der Krankheitsschwere: Qualitative Analyse pro neuroanatomischer Region durch eisensensitive MRT-Sequenz (SWI)

Ophthalmologische Anomalien

Im Rahmen der deskriptiven Analyse klinischer Marker für den Schweregrad der Erkrankung werden ophthalmologische Auffälligkeiten mittels Spaltlampenuntersuchung beurteilt

Serum-S100b-Konzentration

Als Teil der deskriptiven Analyse klinischer Marker für den Schweregrad der Erkrankung wird die S100b-Konzentration gemessen, um die Integrität der Blut-Hirn-Schranke zu beurteilen

Serum-NSE-Konzentration

Als Teil der deskriptiven Analyse klinischer Marker für den Schweregrad der Erkrankung wird die NSE-Konzentration gemessen, um die Integrität der Blut-Hirn-Schranke zu beurteilen

Analyse der Laborleistungsmerkmale (z. B. Sensitivität) der WNV-spezifischen RT-PCR und Virusisolierung in klinischen Proben im Vergleich zur kombinierten Diagnose einer WNV-Infektion

Eine bestätigte WNV-Infektion ist definiert als eines oder mehrere der folgenden Kriterien:

1. Serokonversion von Anti-WNV-IgG-Antikörpern (Indirekter Immunfluoreszenztest (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Deutschland) in Rekonvaleszentenserum (20 Tage nach Symptombeginn) (alle Teilnehmer)
2. 4-facher Anstieg der Anti-WNV-IgG-Antikörper im Rekonvaleszentenserum im Vergleich zur Screening-Probe (IIFT).
3. Anti-WNV-IgM-Antikörpernachweis (ELISA) im Liquor* (bei VBH) (*Liquorentnahme nur bei klinischer Indikation).
4. Positives WNV-spezifisches RT-PCR-Ergebnis im Serum, Urin oder Liquor in Proben, die beim Screening erhalten wurden.
5. Virusisolierung durch Auswuchstest in Proben, die beim Screening erhalten wurden

Beschreibung der molekularen Epidemiologie infizierender WNV-Stämme und der diagnostischen Leistung des Virusauswuchses.

Der Zeitrahmen für den WNV-Nachweis nach Symptombeginn durch Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) oder Virusisolierung durch Auswuchs aus Blut oder Liquor ist durch den schnellen Rückgang des zirkulierenden Virus begrenzt. Da das WNV-RNA-Nachweisfenster im Urin länger sein kann (bis zu 14 Tage), wird bei allen klinischen Proben bei der Rekrutierung eine RT-PCR durchgeführt. Die Zielsequenzen sind eine konservierte Region in der 5'-UTR-Region und ein Teil des Capsid-Gens von WNV und weisen sowohl Linie 1 als auch 2 WNV nach. WNV wurde erfolgreich aus Urin isoliert, in ca. 40 % der Proben wurden innerhalb von 8 Tagen nach Auftreten der Symptome entnommen. Die WNV-Isolierung wird in Low-Passage-Vero-E6-Zellen und BHK21-Zellen aus Urinproben mit einer hohen WNV-RNA-Belastung (Zyklusschwellenwerte (Ct)-Werte) versucht

Identifizierung potenzieller genetischer Signaturen, die mit Virulenz (Neuroinvasion und Morbidität) in unserer Kohorte korrelieren.

Die Sequenzierung des gesamten Genoms (WGS) wird an einer Teilmenge von RT-PCR-positiven Serum-, Urin- und CSF-Proben durchgeführt. Dies wird es uns ermöglichen, die zeitliche und räumliche Kompartimentierung der West-Nil-Linien in Rumänien zu untersuchen und unser Verständnis der genetischen Kompartimentierung innerhalb von Wirten (Urin, Serum, Liquor) zu erweitern. Darüber hinaus werden die erhaltenen Isolate sequenziert (aus dem Viruswachstumstest), um mögliche Anpassungen zu bewerten, denen das Virus während der Isolierung unterliegt. Abschließend werden in einer genomweiten Assoziationsstudie die gewonnenen Virussequenzen mit den prospektiv erhobenen klinischen Daten verglichen, um mögliche genetische Signaturen zu identifizieren, die mit Virulenz, Neuroinvasion und Morbidität korrelieren. Unsere Daten werden mit bestehenden Daten zu genetischen Determinanten der Virulenz verglichen, wie z. B. das Vorhandensein einer Glykosylierungsstelle im E-Protein, Substitutionen in den Nicht-Strukturproteinen 3, 4B oder 5 oder Variationen in der 3'-nichtkodierenden Region.