Enquête prospective sur le stress oxydatif dans l'infection par le virus du Nil occidental (PROWENI)

WNND

40 sujets atteints de la maladie neuroinvasive du Nil occidental seront recrutés

WNF

40 sujets atteints de fièvre du Nil occidental seront recrutés

les contrôles

20 témoins seront recrutés. Ces témoins seront vieillis en fonction des cas.

Mesurer l'état redox

Des indices multiparamètres de stress oxydatif seront calculés pour mesurer et résumer le statut redox chez les cas et les témoins appariés selon l'âge. L'association entre le statut redox et les résultats cliniques, neuropsychologiques et radiologiques sera étudiée. Nous examinerons également la sensibilité relative de biomarqueurs distincts du stress oxydatif et de l'autophagie en tant que prédicteurs cliniques de la gravité de l'infection par le VNO.

Évaluation des déficits neurologiques

Dans le cadre de l'analyse descriptive des biomarqueurs de gravité de la maladie et pour étudier les séquelles neurologiques de l'infection par le VNO. Seront évalués : en particulier les évaluations des nerfs crâniens II-XII, la force motrice des membres supérieurs et inférieurs, les tests sensoriels pour les piqûres d'épingle et les vibrations, les réflexes tendineux profonds, la démarche, la coordination et les anomalies du mouvement

Performance neuropsychologique

Étudier les séquelles neuropsychologiques de l'infection par le VNO au cours d'une période de suivi de 12 mois dans les domaines clés suivants : attention, mémoire, fonction exécutive, émotion et cognition sociale, vitesse psychomotrice

Évaluation longitudinale de l'état fonctionnel Étudier les séquelles neurologiques et neuropsychologiques de l'infection par le VNO au cours d'une période de suivi de 12 mois.

ECOG/WHO PS lors d'un suivi de 12 mois.

Anomalies IRM

Partie de l'analyse descriptive des marqueurs cliniques de la gravité de la maladie

Teneur en fer du cerveau

Partie de l'analyse descriptive des marqueurs cliniques de gravité de la maladie : Analyse qualitative par région neuroanatomique par séquence IRM sensible au fer (SWI)

Anomalies ophtalmologiques

Dans le cadre de l'analyse descriptive des marqueurs cliniques de la gravité de la maladie, les anomalies ophtalmologiques seront évaluées par un examen à la lampe à fente

concentration sérique de S100b

Dans le cadre de l'analyse descriptive des marqueurs cliniques de la gravité de la maladie, la concentration de S100b sera mesurée pour évaluer l'intégrité de la barrière hémato-encéphalique

concentration sérique de NSE

Dans le cadre de l'analyse descriptive des marqueurs cliniques de la gravité de la maladie, la concentration de NSE sera mesurée pour évaluer l'intégrité de la barrière hémato-encéphalique

Analyse des caractéristiques de performance du laboratoire (p. ex. sensibilité) de la RT-PCR spécifique au VNO et de l'isolement viral dans des échantillons cliniques, par rapport au diagnostic composite de l'infection par le VNO

Une infection confirmée par le VNO est définie par un ou plusieurs des critères suivants :

1. Séroconversion des anticorps IgG anti-WNV (test d'immunofluorescence indirecte (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Allemagne) dans le sérum de convalescence (20 jours après l'apparition des symptômes) (tous les participants)
2. Augmentation de 4 fois des anticorps IgG anti-VNO dans le sérum de convalescence, par rapport à l'échantillon de dépistage (IIFT).
3. Détection d'anticorps IgM anti-WNV (ELISA) dans le LCR* (au VBH) (*LCR échantillonné uniquement lorsque cliniquement indiqué).
4. Résultat positif de RT-PCR spécifique au VNO dans le sérum, l'urine ou le LCR dans les échantillons obtenus lors du dépistage.
5. Isolement du virus par test d'excroissance dans les échantillons obtenus lors du dépistage

Description de l'épidémiologie moléculaire des souches infectantes du VNO et performance diagnostique de l'excroissance virale.

Le délai de détection du VNO après l'apparition des symptômes par réaction en chaîne par polymérase de la transcriptase inverse en temps réel (RT-PCR) ou l'isolement du virus par excroissance à partir du sang ou du LCR est limité par le déclin rapide du virus en circulation. Étant donné que la fenêtre de détection de l'ARN du VNO dans l'urine peut être plus longue (jusqu'à 14 jours), la RT-PCR sera effectuée sur tous les échantillons cliniques au moment du recrutement. Les séquences cibles sont une région conservée dans la région 5'UTR et une partie du gène de capside du WNV et détectent à la fois les lignées 1 et 2 du WNV. Le VNO a été isolé avec succès de l'urine, en env. 40 % des échantillons obtenus dans les 8 jours suivant l'apparition des symptômes. L'isolement du VNO sera tenté dans des cellules Vero E6 à faible passage et des cellules BHK21 à partir d'échantillons d'urine avec une charge élevée d'ARN du VNO (valeurs de seuil de cycle (Ct)

Identification de signatures génétiques potentielles corrélées à la virulence (neuro-invasion et morbidité) dans notre cohorte.

Le séquençage du génome entier (WGS) sera effectué sur un sous-ensemble d'échantillons de sérum, d'urine et de LCR positifs à la RT-PCR. Cela nous permettra d'étudier la compartimentation temporelle et spatiale des lignées du Nil occidental en Roumanie ainsi que d'élargir notre compréhension de la compartimentation génétique au sein des hôtes (urine, sérum, LCR). De plus, les isolats obtenus seront séquencés (à partir du test d'excroissance virale) pour évaluer les adaptations potentielles que subit le virus lors de l'isolement. Enfin, dans une étude d'association à l'échelle du génome, les séquences virales obtenues seront comparées aux données cliniques recueillies de manière prospective, afin d'identifier les signatures génétiques potentielles en corrélation avec la virulence, la neuroinvasion et la morbidité. Nos données seront comparées aux données existantes sur les déterminants génétiques de la virulence tels que la présence d'un site de glycosylation dans la protéine E, les substitutions dans les protéines non structurales 3, 4B ou 5, ou la variation dans la région 3' non codante.