Investigación prospectiva del estrés oxidativo en la infección por el virus del Nilo Occidental (PROWENI)

WNND

Se reclutarán 40 sujetos con enfermedad neuroinvasiva del Nilo Occidental

WNF

Se reclutarán 40 sujetos con Fiebre del Nilo Occidental

control S

Se reclutarán 20 controles. Estos controles tendrán la edad correspondiente a los casos.

Medir el estado redox

Se calcularán índices multiparamétricos de estrés oxidativo para medir y resumir el estado redox en casos y controles de la misma edad. Se investigará la asociación entre el estado redox y los resultados clínicos, neuropsicológicos y radiológicos. También examinaremos la sensibilidad relativa de biomarcadores separados de estrés oxidativo y autofagia como predictores clínicos de la gravedad de la infección por WNV.

Evaluación de déficits neurológicos

Como parte del análisis descriptivo de biomarcadores de gravedad de la enfermedad y para estudiar las secuelas neurológicas de la infección por WNV. Se evaluarán: específicamente evaluaciones de los nervios craneales II-XII, fuerza motora en las extremidades superiores e inferiores, pruebas sensoriales para pinchazos y vibraciones, reflejos tendinosos profundos, marcha, coordinación y anormalidades en el movimiento

Rendimiento neuropsicológico

Estudie las secuelas neuropsicológicas de la infección por el VNO durante un período de seguimiento de 12 meses en los siguientes dominios clave: atención, memoria, función ejecutiva, emoción y cognición social, velocidad psicomotora

Evaluación longitudinal del estado funcional Estudie las secuelas neurológicas y neuropsicológicas de la infección por WNV durante un período de seguimiento de 12 meses.

ECOG/OMS PS durante un seguimiento de 12 meses.

Anomalías en la resonancia magnética

Parte del análisis descriptivo de los marcadores clínicos de gravedad de la enfermedad

Contenido de hierro en el cerebro

Parte del análisis descriptivo de marcadores clínicos de gravedad de la enfermedad: Análisis cualitativo por región neuroanatómica por secuencia de resonancia magnética sensible al hierro (SWI)

Anomalías oftalmológicas

Como parte del análisis descriptivo de los marcadores clínicos de la gravedad de la enfermedad, las anomalías oftalmológicas se evaluarán mediante un examen con lámpara de hendidura.

concentración sérica de S100b

Como parte del análisis descriptivo de los marcadores clínicos de la gravedad de la enfermedad, se medirá la concentración de S100b para evaluar la integridad de la barrera hematoencefálica.

concentración sérica de NSE

Como parte del análisis descriptivo de los marcadores clínicos de la gravedad de la enfermedad, se medirá la concentración de NSE para evaluar la integridad de la barrera hematoencefálica.

Análisis de las características de rendimiento de laboratorio (p. ej., sensibilidad) de la RT-PCR específica para el WNV y el aislamiento viral en muestras clínicas, en comparación con el diagnóstico compuesto de infección por el WNV

La infección confirmada por WNV se define como uno o más de los siguientes criterios:

1. Seroconversión de anticuerpos IgG anti-WNV (Prueba de inmunofluorescencia indirecta (IIFT) Flavivirus 2, Euroimmun®, Lübeck, Alemania) en suero convaleciente (20 días después del inicio de los síntomas) (todos los participantes)
2. Aumento de 4 veces de anticuerpos IgG anti-WNV en suero convaleciente, en comparación con la muestra de cribado (IIFT).
3. Detección de anticuerpos IgM anti-WNV (ELISA) en LCR* (en VBH) (*LCR muestreado solo cuando esté clínicamente indicado).
4. Resultado positivo de RT-PCR específico para WNV en suero, orina o LCR en muestras obtenidas en la selección.
5. Aislamiento del virus mediante ensayo de crecimiento en muestras obtenidas en la selección

Descripción de la epidemiología molecular de la(s) cepa(s) del WNV que infectan y el rendimiento del diagnóstico de crecimiento viral.

El marco de tiempo para la detección del WNV después del inicio de los síntomas mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-PCR) o el aislamiento del virus mediante el crecimiento de la sangre o el LCR está limitado por la rápida disminución del virus circulante. Debido a que la ventana de detección de ARN del WNV en la orina puede ser más larga (hasta 14 días), se realizará una RT-PCR en todas las muestras clínicas en el momento del reclutamiento. Las secuencias diana son una región conservada en la región 5'UTR y parte del gen de la cápside del WNV y detecta tanto el linaje 1 como el linaje 2 del WNV. WNV se ha aislado con éxito de la orina, en aprox. 40% de las muestras obtenidas dentro de los 8 días del inicio de los síntomas. El aislamiento del WNV se intentará en células Vero E6 de paso bajo y células BHK21 a partir de muestras de orina con una alta carga de ARN del WNV (valores de umbral de ciclo (Ct)

Identificación de firmas genéticas potenciales que se correlacionan con la virulencia (neuroinvasión y morbilidad) en nuestra cohorte.

La secuenciación del genoma completo (WGS) se realizará en un subconjunto de muestras de suero, orina y LCR positivas para RT-PCR. Esto nos permitirá investigar la compartimentación temporal y espacial de los linajes del Nilo Occidental en Rumania, así como ampliar nuestra comprensión de la compartimentación genética dentro de los huéspedes (orina, suero, LCR). Además, los aislamientos obtenidos se secuenciarán (a partir del ensayo de crecimiento viral) para evaluar las posibles adaptaciones que sufre el virus durante el aislamiento. Finalmente, en un estudio de asociación del genoma completo, las secuencias virales obtenidas se compararán con los datos clínicos recopilados prospectivamente, para identificar firmas genéticas potenciales que se correlacionen con la virulencia, la neuroinvasión y la morbilidad. Nuestros datos se compararán con datos existentes sobre determinantes genéticos de virulencia, como la presencia de un sitio de glicosilación en la proteína E, sustituciones en proteínas no estructurales 3, 4B o 5, o variación en la región no codificante 3'.