DNA-amplifiering i Blastocoel-vätska

Inledning Målet med assisterad reproduktionsteknologi (ART) är att leverera en frisk singel, där behandlingsstrategin vid IVF har störst chans att överföra det enskilt mest livskraftiga embryot från en patients embryokohort. Embryonval är därför avgörande för framgången för detta mål. Den mikroskopiska bedömningen och poängsättningen av embryomorfologi utvecklades som en embryoselektionsteknik under de första åren av IVF (Veeck, 1991) och har sedan dess förblivit den mest använda embryoselektionstekniken. Teknikens begränsade förmåga att maximera embryoimplantationshastigheten har emellertid länge beklagats och därför har mer förbättrade embryoselektionstekniker länge eftersträvats. Time-lapse-övervakning och poängsättning (Paulson et al., 2018) och euploid embryonöverföring med PGT-A (genetisk testning för aneuploidi före implantation; Gleicher et al., 2017) är nya innovationer som har blivit utmanare för att ersätta konventionell mikroskopisk bedömning och poängsättning av embryomorfologi. En fördel med PGT-A är dess oberoende av embryonutveckling och morfologiska egenskapersbedömningar, eftersom euploida blastocyster implanteras med samma hastighet oavsett blastocystmorfologipoäng (Capalbo et al., 2014). Dessutom, förutom PGT-A:s tekniska och biologiska begränsningar, kan kostnaderna för implementering av PGT-A som en embryoselektionsteknik anses vara oöverkomliga av många.

I utvecklingen av PGT i human IVF har PGT utvecklats från PGT-v1 till PGT-v2 baserat på de negativa resultaten av biopsi av 1-2 blastomerer från embryon i klyvningsstadiet (PGT-v1) och förbättringen av blastocystutvecklingsförhållandena. Bevisen antydde att PGT-v.1 utgjorde en betydande risk för embryonens livsduglighet, utan någon nytta av överföringen av euploida embryon (Gleicher et al., 2017). Majoriteten av studierna har rapporterat att PGT-v2, som kräver biopsiering av 5-10 trophectoderm (TE) celler, inte utgör någon betydande risk för utvecklingspotentialen (implantationsviabiliteten) hos biopsierade blastocyster. Men nyligen har det kommit rapporter som tyder på att TE-biopsi kanske inte är helt riskfri (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). För närvarande står PGT-A inför fyra utmaningar som förhindrar dess rutinmässiga användning som en blastocystvalsteknik; (1) behovet av hög teknisk expertis, (2) invasiviteten av TE-biopsi, (3) kostnaden för hela tekniken och (4) att TE-biopsi är föremål för provtagningsbias - en enda TE-biopsi på 5-10 celler kanske inte exakt representerar ploidin för hela blastocysten.

En spin-off av konventionell PGT är analysen av DNA i blastocoel-vätska (BF). Detta fenomen rapporterades först av Palini et al. (2013). Ursprunget till DNA i BF har föreslagits vara resultatet av embryoeuploidisering, det vill säga eliminering av aneuploid-DNA eller aneuploidiska celler genom regulatoriska processer som apoptos och/eller nekros (Leaver och Wells, 2019). Praxis med blastocystkollaps före vitrifikation (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) ger möjlighet att utföra minimalt invasiv PGT-A (miPGT-A), dvs. biopsierande BF. I en studie för att undersöka ploidiöverensstämmelse mellan PGT-A med TE-biopsi och PGT-A med BF-biopsi, fann författarna att den kliniska graviditetsfrekvensen var 77 % för blastocyster utan DNA-amplifiering och 37 % för blastocyster med DNA-amplifiering ( Magli et al., 2018). Blotta ackumuleringen av DNA i BF kan därför användas som en kompletterande åtgärd för att prioritera blastocyster för överföring. Att implementera BF-biopsi och helgenomisk amplifiering (WGA) som en kompletterande urvalsåtgärd begränsar/minskar tre av PGT-A:s huvudutmaningar; (1) teknisk expertis, (2) invasivitet och (3) kostnader.

I den nuvarande randomiserade kontrollerade studien (RCT) kommer utredarna att undersöka DNA-amplifiering i blastocystvätskebiopsier (BF-biopsi) som en kompletterande urvalsteknik för att välja blastocyster för överföring i samband med blastocystmorfologipoäng. De kliniska implantationsresultaten för FET där poängvalda enkla blastocyster utan DNA-amplifiering och poängvalda enkla blastocyster överfördes kommer att jämföras.