Amplificación de ADN en líquido Blastocoel

Introducción El objetivo de la tecnología de reproducción asistida (ART) es el nacimiento de un feto único sano, y la estrategia de tratamiento en la FIV tiene la mejor oportunidad de transferir el embrión más viable de la cohorte de embriones de un paciente. La selección de embriones, por lo tanto, es fundamental para el éxito de este objetivo. La evaluación microscópica y la puntuación de la morfología embrionaria se desarrollaron como una técnica de selección de embriones en los primeros años de la FIV (Veeck, 1991) y desde entonces se ha mantenido como la técnica de selección de embriones más practicada. Sin embargo, durante mucho tiempo se ha lamentado la capacidad limitada de la técnica para maximizar las tasas de implantación de embriones y, por lo tanto, se han buscado durante mucho tiempo técnicas de selección de embriones más mejoradas. La monitorización y puntuación de lapso de tiempo (Paulson et al., 2018) y la transferencia de embriones euploides mediante PGT-A (prueba genética preimplantacional para aneuploidía; Gleicher et al., 2017) son innovaciones recientes que se han convertido en contendientes para reemplazar la evaluación y puntuación microscópica convencional. de la morfología del embrión. Una ventaja de PGT-A es su independencia del desarrollo embrionario y las evaluaciones de las características morfológicas, ya que los blastocistos euploides se implantan al mismo ritmo independientemente de la puntuación de la morfología del blastocisto (Capalbo et al., 2014). Además, además de las limitaciones técnicas y biológicas de PGT-A, muchos pueden considerar prohibitivos los costos de implementación de PGT-A como técnica de selección de embriones.

En la evolución de PGT en FIV humana, PGT ha progresado de PGT-v1 a PGT-v2 en función de los resultados adversos de la biopsia de 1-2 blastómeros de embriones en etapa de escisión (PGT-v1) y la mejora en las condiciones de desarrollo de blastocistos. La evidencia sugirió que PGT-v.1 representaba un riesgo significativo para la viabilidad del embrión, sin ningún beneficio derivado de la transferencia de embriones euploides (Gleicher et al., 2017). La mayoría de los estudios han informado que PGT-v2, que requiere la biopsia de 5 a 10 células de trofoectodermo (TE), no representa un riesgo significativo para el potencial de desarrollo (viabilidad de implantación) de los blastocistos biopsiados. Sin embargo, recientemente ha habido informes que sugieren que la biopsia TE puede no estar completamente libre de riesgos (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). Actualmente, PGT-A enfrenta cuatro desafíos que impiden su uso rutinario como técnica de selección de blastocistos; (1) la necesidad de alta experiencia técnica, (2) la invasividad de la biopsia TE, (3) el costo de la técnica completa y (4) que la biopsia TE está sujeta al sesgo de muestreo: una sola biopsia TE de 5-10 las células pueden no representar con precisión la ploidía de todo el blastocisto.

Un derivado del PGT convencional es el análisis de ADN en fluido de blastocele (BF). Este fenómeno fue informado por primera vez por Palini et al. (2013). Se ha sugerido que el origen del ADN en LM es el resultado de la euploidización del embrión, es decir, la eliminación del ADN de la aneuploidía o de las células aneuploidias a través de procesos reguladores como la apoptosis y/o la necrosis (Leaver y Wells, 2019). La práctica del colapso del blastocisto antes de la vitrificación (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) brinda la oportunidad de realizar un PGT-A mínimamente invasivo (miPGT-A), es decir, el BF de biopsia. En un estudio para investigar la concordancia de ploidía entre PGT-A con biopsia TE y PGT-A con biopsia BF, los autores encontraron que la tasa de embarazo clínico fue del 77 % para blastocistos sin amplificación de ADN transferidos y del 37 % para blastocistos con amplificación de ADN ( Magli et al., 2018). La mera acumulación de ADN en el BF, por tanto, podría utilizarse como medida complementaria para priorizar los blastocistos para la transferencia. La implementación de la biopsia BF y la amplificación genómica completa (WGA) como medida de selección complementaria limita/reduce tres de los principales desafíos de PGT-A; (1) experiencia técnica, (2) invasividad y (3) costos.

En el presente ensayo controlado aleatorizado (RCT), los investigadores investigarán la amplificación del ADN en biopsias de líquido de blastocisto (biopsia BF) como una técnica de selección complementaria para seleccionar blastocistos para la transferencia junto con puntuaciones de morfología de blastocisto. Se compararán los resultados clínicos de implantación de los FET en los que se transfirieron blastocistos únicos seleccionados por puntuación sin amplificación de ADN y blastocistos únicos seleccionados por puntuación.