DNA:n monistus Blastocoel Fluidissa

Johdanto Avustetun lisääntymistekniikan (ART) tavoitteena on saada terve yksittäinen lapsi, ja IVF-hoitostrategialla on parhaat mahdollisuudet siirtää elinkelpoisin yksittäinen alkio potilaan alkiokohortista. Alkioiden valinta on siksi ensiarvoisen tärkeää tämän tavoitteen onnistumisen kannalta. Alkion morfologian mikroskooppinen arviointi ja pisteytys kehitettiin alkionvalintatekniikaksi IVF:n alkuvuosina (Veeck, 1991), ja siitä lähtien se on pysynyt yleisimmin käytettynä alkionvalintatekniikkana. Kuitenkin tekniikan rajoitettua kykyä maksimoida alkion istutusnopeutta on valitettu jo pitkään, ja siksi parannettuja alkionvalintatekniikoita on etsitty pitkään. Ajastettu seuranta ja pisteytys (Paulson et al., 2018) ja euploidinen alkionsiirto PGT-A:lla (preimplantaatiogeeninen aneuploidi alkion morfologiasta. PGT-A:n etuna on sen riippumattomuus alkionkehityksestä ja morfologisten piirteiden arvioinnista, koska euploidiset blastokystit implantoituvat samalla nopeudella blastokystien morfologiasta riippumatta (Capalbo et al., 2014). Lisäksi PGT-A:n teknisten ja biologisten rajoitusten lisäksi monet voivat pitää PGT-A:n käyttöönoton kustannuksia alkionvalintatekniikkana kohtuuttomina.

PGT:n evoluutiossa ihmisen IVF:ssä PGT on edennyt PGT-v1:stä PGT-v2:ksi perustuen haitallisiin tuloksiin, jotka aiheutuvat biopsiasta 1-2 blastomeeristä katkaisuvaiheen alkioista (PGT-v1) ja blastokystien kehitysolosuhteiden paranemisesta. Todisteet viittasivat siihen, että PGT-v.1 aiheutti merkittävän riskin alkion elinkelpoisuudelle, eikä euploidisten alkioiden siirrosta ollut mitään hyötyä (Gleicher et al., 2017). Suurin osa tutkimuksista on raportoinut, että PGT-v2, joka vaatii biopsian 5-10 trofektodermisolusta (TE) ei aiheuta merkittävää riskiä biopsiattujen blastokystien kehityspotentiaalille (istuttamisen elinkelpoisuudelle). Viime aikoina on kuitenkin raportoitu, että TE-biopsia ei välttämättä ole täysin riskitön (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). Tällä hetkellä PGT-A:lla on neljä haastetta, jotka estävät sen rutiininomaisen käytön blastokystien valintatekniikkana; (1) korkean teknisen asiantuntemuksen tarve, (2) TE-biopsian invasiivisuus, (3) koko tekniikan kustannukset ja (4) se, että TE-biopsiaan kohdistuu näytteenottovirhe - yksi TE-biopsia 5-10 solut eivät välttämättä edusta tarkasti koko blastokystan ploidisuutta.

Perinteisen PGT:n sivuvaikutus on DNA:n analyysi blastocoel-nesteessä (BF). Tämän ilmiön raportoivat ensimmäisenä Palini et al. (2013). DNA:n alkuperän BF:ssä on ehdotettu olevan seurausta alkion euploidisaatiosta, eli aneuploidisen DNA:n tai aneuploidisten solujen eliminaatiosta säätelyprosessien, kuten apoptoosin ja/tai nekroosin, kautta (Leaver ja Wells, 2019). Blastokystan romahtaminen ennen lasitusta (Mukaida et ai., 2006, Iwayama et ai., 2011) tarjoaa mahdollisuuden suorittaa minimaalisesti invasiivista PGT-A:ta (miPGT-A), eli biopsiaa BF:stä. Tutkimuksessa, jossa tutkittiin ploidista yhteensopivuutta PGT-A:n ja TE-biopsian ja PGT-A:n välillä BF-biopsian kanssa, kirjoittajat havaitsivat, että kliininen raskausaste oli 77 % blastokysteillä, joissa ei ollut DNA:n monistumista, ja 37 % blastokysteillä, joissa oli DNA-monistumista. Magli et ai., 2018). Pelkästään DNA:n kertymistä BF:ään voitaisiin siksi käyttää lisätoimenpiteenä blastokystien priorisoimiseksi siirtoa varten. BF-biopsian ja koko genomisen amplifikaation (WGA) toteuttaminen täydentävänä valintatoimenpiteenä rajoittaa/vähentää kolmea PGT-A:n päähaastetta; (1) tekninen asiantuntemus, (2) invasiivisuus ja (3) kustannukset.

Tässä satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa (RCT) tutkijat tutkivat DNA:n monistumista blastokystanestebiopsioissa (BF-biopsia) täydentävänä valintamenetelmänä blastokystien valitsemiseksi siirrettäväksi yhdessä blastokystien morfologiapisteiden kanssa. Verrataan kliinisiä implantaatiotuloksia FET-soluista, joissa siirrettiin pistemäärällä valittu yksittäinen blastokysti ilman DNA-monistumista ja pistemäärällä valittuja yksittäisiä blastokystia.