Amplificazione del DNA nel fluido Blastocoel

Introduzione L'obiettivo della tecnologia di riproduzione assistita (ART) è la consegna di un singolo sano, con la strategia di trattamento in IVF che ha la migliore possibilità di essere il trasferimento del singolo embrione più vitale dalla coorte di embrioni di un paziente. La selezione degli embrioni, quindi, è fondamentale per il successo di questo obiettivo. La valutazione microscopica e il punteggio della morfologia embrionale è stata sviluppata come tecnica di selezione embrionale nei primi anni della fecondazione in vitro (Veeck, 1991) e da allora è rimasta la tecnica di selezione embrionale più ampiamente praticata. Tuttavia, la capacità limitata della tecnica di massimizzare i tassi di impianto di embrioni è stata a lungo lamentata e, pertanto, sono state a lungo ricercate tecniche di selezione degli embrioni più avanzate. Il monitoraggio e il punteggio time-lapse (Paulson et al., 2018) e il trasferimento embrionale euploide mediante PGT-A (test genetico preimpianto per aneuploidia; Gleicher et al., 2017) sono innovazioni recenti che sono diventate contendenti per sostituire la valutazione e il punteggio microscopici convenzionali della morfologia embrionale. Un vantaggio del PGT-A è la sua indipendenza dallo sviluppo embrionale e dalle valutazioni delle caratteristiche morfologiche, poiché le blastocisti euploidi si impiantano alla stessa velocità indipendentemente dal punteggio morfologico della blastocisti (Capalbo et al., 2014). Inoltre, oltre ai limiti tecnici e biologici della PGT-A, i costi di implementazione della PGT-A come tecnica di selezione degli embrioni possono essere considerati proibitivi da molti.

Nell'evoluzione del PGT nella fecondazione in vitro umana, il PGT è progredito da PGT-v1 a PGT-v2 sulla base degli esiti avversi della biopsia di 1-2 blastomeri da embrioni in fase di scissione (PGT-v1) e del miglioramento delle condizioni di sviluppo della blastocisti. Le prove suggerivano che PGT-v.1 rappresentava un rischio significativo per la vitalità dell'embrione, senza alcun beneficio derivante dal trasferimento di embrioni euploidi (Gleicher et al., 2017). La maggior parte degli studi ha riportato che il PGT-v2, che richiede la biopsia di 5-10 cellule di trofectoderma (TE), non presenta alcun rischio significativo per il potenziale di sviluppo (vitalità dell'impianto) delle blastocisti sottoposte a biopsia. Tuttavia, recentemente ci sono state segnalazioni che suggeriscono che la biopsia TE potrebbe non essere completamente priva di rischi (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). Attualmente, PGT-A deve affrontare quattro sfide che ne impediscono l'uso di routine come tecnica di selezione della blastocisti; (1) la necessità di un'elevata competenza tecnica, (2) l'invasività della biopsia TE, (3) il costo della tecnica completa e (4) che la biopsia TE è soggetta a bias di campionamento: una singola biopsia TE di 5-10 le cellule potrebbero non rappresentare accuratamente la ploidia dell'intera blastocisti.

Uno spin-off del PGT convenzionale è l'analisi del DNA nel fluido del blastocele (BF). Questo fenomeno è stato riportato per la prima volta da Palini et al. (2013). È stato suggerito che l'origine del DNA in BF sia il risultato dell'euploidizzazione dell'embrione, ovvero l'eliminazione del DNA aneuploidico o delle cellule aneuploidi attraverso processi regolatori come l'apoptosi e/o la necrosi (Leaver and Wells, 2019). La pratica del collasso della blastocisti prima della vetrificazione (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) offre l'opportunità di eseguire PGT-A minimamente invasiva (miPGT-A), cioè la biopsia BF. In uno studio per indagare la concordanza ploidica tra PGT-A con biopsia TE e PGT-A con biopsia BF, gli autori hanno scoperto che il tasso di gravidanza clinica era del 77% per le blastocisti senza amplificazione del DNA trasferite e del 37% per le blastocisti con amplificazione del DNA. Magli et al., 2018). Il semplice accumulo di DNA nel BF, quindi, potrebbe essere utilizzato come misura supplementare per dare priorità alle blastocisti per il trasferimento. L'implementazione della biopsia BF e dell'amplificazione genomica intera (WGA) come misura di selezione supplementare limita/riduce tre delle principali sfide del PGT-A; (1) competenze tecniche, (2) invasività e (3) costi.

Nel presente studio controllato randomizzato (RCT), gli investigatori studieranno l'amplificazione del DNA nelle biopsie fluide della blastocisti (BF-biopsia) come tecnica di selezione supplementare per selezionare le blastocisti per il trasferimento insieme ai punteggi della morfologia della blastocisti. Saranno confrontati i risultati dell'impianto clinico di FET in cui sono state trasferite singole blastocisti selezionate per punteggio senza amplificazione del DNA e singole blastocisti selezionate per punteggio.