DNS-amplifikáció Blastocoel Fluidban

Bevezetés Az asszisztált reprodukciós technológia (ART) célja egy egészséges szingli születése, ahol az IVF kezelési stratégiájának a legnagyobb esélye a legéletképesebb embrió átvitele a páciens embriócsoportjából. Az embriószelekció tehát kiemelten fontos e cél sikeréhez. Az embriómorfológia mikroszkópos értékelését és pontozását embriószelekciós technikaként fejlesztették ki az IVF korai éveiben (Veeck, 1991), és azóta is a legszélesebb körben alkalmazott embriószelekciós technika maradt. Azonban a technika korlátozott képessége miatt az embrióbeültetési sebesség maximalizálására régóta panaszkodnak, ezért régóta keresik a fejlettebb embriószelekciós technikákat. A time-lapse monitorozás és pontozás (Paulson és mtsai, 2018) és az euploid embriótranszfer PGT-A-val (preimplantációs genetikai vizsgálat az aneuploiditás meghatározására; Gleicher és mtsai, 2017) olyan újdonságok, amelyek a hagyományos mikroszkópos értékelés és pontozás felváltására vetélkedtek. az embrió morfológiája. A PGT-A előnye, hogy független az embriófejlődéstől és a morfológiai jellemzők értékelésétől, mivel az euploid blasztociszták ugyanolyan sebességgel implantálódnak, függetlenül a blasztociszta morfológiai pontszámától (Capalbo et al., 2014). Sőt, a PGT-A technikai és biológiai korlátai mellett a PGT-A, mint embriószelekciós technika megvalósításának költségeit sokan túl magasnak tartják.

A PGT humán IVF-ben való evolúciója során a PGT a PGT-v1-ről PGT-v2-re fejlődött a hasítási stádiumú embriók 1-2 blasztomerjének biopsziájának (PGT-v1) és a blasztociszták fejlődési körülményeinek javulása alapján. A bizonyítékok arra utaltak, hogy a PGT-v.1 jelentős kockázatot jelent az embriók életképességére nézve, és az euploid embriók átviteléből nem származik előny (Gleicher et al., 2017). A legtöbb tanulmány arról számolt be, hogy a PGT-v2, amely 5-10 trofektoderma (TE) sejt biopsziáját igényli, nem jelent jelentős kockázatot a biopsziás blasztociszták fejlődési potenciáljára (beültetési életképességére). A közelmúltban azonban olyan jelentések születtek, amelyek arra utalnak, hogy a TE-biopszia nem biztos, hogy teljesen kockázatmentes (Gleicher et al., 2017, Ozgur és mtsai, 2019). Jelenleg a PGT-A négy kihívással néz szembe, amelyek megakadályozzák a blasztociszta szelekciós technikaként való rutinszerű használatát; (1) a magas műszaki szakértelem szükségessége, (2) a TE biopszia invazivitása, (3) a teljes technika költsége, és (4) hogy a TE biopszia mintavételi torzításnak van kitéve - egyetlen TE biopszia 5-10 a sejtek nem feltétlenül reprezentálják pontosan a teljes blasztociszta ploiditását.

A hagyományos PGT egy spin-offja a DNS elemzése blastocoel fluidban (BF). Erről a jelenségről először Palini és munkatársai számoltak be. (2013). A BF-ben lévő DNS eredete az embrió euploidizációjának eredménye, azaz az aneuploid DNS vagy aneuploid sejtek eliminációja olyan szabályozási folyamatokon keresztül, mint az apoptózis és/vagy nekrózis (Leaver és Wells, 2019). A vitrifikáció előtti blasztociszta összeomlás gyakorlata (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) lehetőséget ad minimálisan invazív PGT-A (miPGT-A), azaz a biopsziás BF elvégzésére. A PGT-A TE biopsziával és a PGT-A BF biopsziával végzett ploiditási összhangját vizsgáló tanulmányban a szerzők azt találták, hogy a klinikai terhesség aránya 77% volt az olyan blasztociszták esetében, amelyeknél nem volt DNS-amplifikáció, és 37% a DNS-amplifikációval rendelkező blasztociszták esetében. Magli et al., 2018). Ezért a DNS puszta felhalmozódása a BF-ben kiegészítő intézkedésként használható a blasztociszták átviteli prioritásainak meghatározására. A BF-biopszia és a teljes genomiális amplifikáció (WGA) kiegészítő szelekciós intézkedésként behatárolja/csökkenti a PGT-A három fő kihívását; (1) műszaki szakértelem, (2) invazivitás és (3) költségek.

A jelen randomizált, kontrollált vizsgálatban (RCT) a kutatók a DNS-amplifikációt blasztociszta-folyadék-biopsziákban (BF-biopszia) vizsgálják, mint kiegészítő szelekciós technikát a blasztociszták kiválasztására transzferre, a blasztociszta morfológiai pontszámokkal együtt. Összehasonlítják azoknak a FET-eknek a klinikai beültetési eredményeit, amelyekben a pontszámmal kiválasztott, DNS-amplifikáció nélküli egyetlen blasztocisztát és a pontszámmal kiválasztott egyedi blasztocisztákat átvitték.