Амплификация ДНК в бластоцелевой жидкости

Введение Целью вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) является рождение здорового одноплодного плода, при этом стратегия лечения при ЭКО имеет наилучшие шансы на перенос единственного наиболее жизнеспособного эмбриона из когорты эмбрионов пациента. Таким образом, отбор эмбрионов имеет первостепенное значение для достижения этой цели. Микроскопическая оценка и подсчет морфологии эмбрионов были разработаны как метод отбора эмбрионов в первые годы ЭКО (Veeck, 1991) и с тех пор остаются наиболее широко применяемым методом отбора эмбрионов. Тем не менее, ограниченная способность этого метода максимизировать частоту имплантации эмбрионов долгое время вызывала сожаление, и поэтому в течение длительного времени искали более совершенные методы отбора эмбрионов. Покадровый мониторинг и оценка (Paulson et al., 2018) и перенос эуплоидных эмбрионов с использованием PGT-A (преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию; Gleicher et al., 2017) являются недавними инновациями, которые стали претендентами на замену традиционной микроскопической оценки и оценки. морфологии эмбриона. Преимуществом PGT-A является его независимость от оценки развития эмбриона и морфологических признаков, поскольку эуплоидные бластоцисты имплантируются с одинаковой скоростью независимо от оценки морфологии бластоцисты (Capalbo et al., 2014). Более того, помимо технических и биологических ограничений PGT-A, стоимость внедрения PGT-A как метода отбора эмбрионов многими может показаться непомерно высокой.

В ходе эволюции PGT в ЭКО человека PGT прогрессировал от PGT-v1 до PGT-v2 на основании неблагоприятных результатов биопсии 1-2 бластомеров эмбрионов на стадии дробления (PGT-v1) и улучшения условий развития бластоцисты. Данные свидетельствуют о том, что PGT-v.1 представляет значительный риск для жизнеспособности эмбрионов, при этом перенос эуплоидных эмбрионов не приносит пользы (Gleicher et al., 2017). В большинстве исследований сообщается, что PGT-v2, который требует биопсии 5-10 клеток трофэктодермы (TE), не представляет значительного риска для потенциала развития (жизнеспособности имплантации) биопсийных бластоцист. Однако в последнее время появились сообщения, предполагающие, что биопсия ТЭ не может быть полностью безопасной (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). В настоящее время PGT-A сталкивается с четырьмя проблемами, препятствующими его рутинному использованию в качестве метода отбора бластоцист; (1) потребность в высоких технических знаниях, (2) инвазивность биопсии ТЭ, (3) стоимость всей методики и (4) то, что биопсия ТЭ зависит от систематической ошибки выборки - одна биопсия ТЭ из 5-10 клетки могут не точно отражать плоидность всей бластоцисты.

Дополнительным продуктом традиционной PGT является анализ ДНК в жидкости бластоцеля (BF). Впервые об этом явлении сообщили Palini et al. (2013). Было высказано предположение, что происхождение ДНК в BF является результатом эуплоидизации эмбриона, т. Е. Устранения анеуплоидной ДНК или анеуплоидных клеток посредством регуляторных процессов, таких как апоптоз и/или некроз (Leaver and Wells, 2019). Практика коллапса бластоцисты перед витрификацией (Mukaida et al., 2006; Iwayama et al., 2011) дает возможность проводить малоинвазивную PGT-A (miPGT-A), т. е. биопсию БФ. В исследовании по изучению соответствия плоидности между PGT-A с биопсией TE и PGT-A с биопсией BF авторы обнаружили, что частота клинической беременности составила 77% для бластоцист без амплификации ДНК и 37% для бластоцист с амплификации ДНК. Магли и др., 2018). Таким образом, простое накопление ДНК в BF может быть использовано в качестве дополнительной меры для определения приоритетности переноса бластоцист. Внедрение BF-биопсии и полногеномной амплификации (WGA) в качестве дополнительной меры отбора ограничивает/уменьшает три основные проблемы PGT-A; (1) техническая экспертиза, (2) инвазивность и (3) стоимость.

В настоящем рандомизированном контролируемом исследовании (РКИ) исследователи будут изучать амплификацию ДНК в биоптатах жидкости бластоцисты (BF-биопсия) в качестве дополнительного метода отбора для отбора бластоцист для переноса в сочетании с оценкой морфологии бластоцисты. Будут сравниваться клинические результаты имплантации FET, в которых были перенесены одиночные бластоцисты с выбранной оценкой без амплификации ДНК и отдельные бластоцисты с выбранной оценкой.