Amplificação de DNA em fluido de blastocele

Introdução O objetivo da tecnologia de reprodução assistida (TRA) é a entrega de um único feto saudável, com a estratégia de tratamento na fertilização in vitro tendo a melhor chance de ser a transferência do embrião único mais viável de uma coorte de embriões de uma paciente. A seleção de embriões, portanto, é fundamental para o sucesso desse objetivo. A avaliação microscópica e pontuação da morfologia embrionária foi desenvolvida como uma técnica de seleção de embriões nos primeiros anos da fertilização in vitro (Veeck, 1991) e desde então tem permanecido como a técnica de seleção de embriões mais amplamente praticada. No entanto, a capacidade limitada da técnica para maximizar as taxas de implantação do embrião tem sido lamentada por muito tempo e, portanto, técnicas de seleção de embriões mais aprimoradas têm sido procuradas por muito tempo. Monitoramento e pontuação de lapso de tempo (Paulson et al., 2018) e transferência de embriões euploides usando PGT-A (teste genético pré-implantação para aneuploidia; Gleicher et al., 2017) são inovações recentes que se tornaram concorrentes para substituir a avaliação e pontuação microscópicas convencionais da morfologia embrionária. Uma vantagem do PGT-A é sua independência do desenvolvimento do embrião e das avaliações das características morfológicas, pois os blastocistos euploides se implantam na mesma taxa, independentemente da pontuação da morfologia do blastocisto (Capalbo et al., 2014). Além disso, além das limitações técnicas e biológicas do PGT-A, os custos de implementação do PGT-A como técnica de seleção de embriões podem ser considerados proibitivos por muitos.

Na evolução da PGT na FIV humana, a PGT progrediu de PGT-v1 para PGT-v2 com base nos resultados adversos da biópsia de 1-2 blastômeros de embriões em estágio de clivagem (PGT-v1) e na melhora das condições de desenvolvimento do blastocisto. As evidências sugeriram que o PGT-v.1 representava um risco significativo para a viabilidade do embrião, sem nenhum benefício resultante da transferência de embriões euplóides (Gleicher et al., 2017). A maioria dos estudos relatou que o PGT-v2, que requer a biópsia de 5-10 células do trofectoderma (TE), não representa risco significativo para o potencial de desenvolvimento (viabilidade de implantação) de blastocistos biopsiados. No entanto, recentemente houve relatos sugerindo que a biópsia TE pode não ser completamente isenta de riscos (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). Atualmente, o PGT-A enfrenta quatro desafios que impedem seu uso rotineiro como técnica de seleção de blastocistos; (1) a necessidade de alto conhecimento técnico, (2) a capacidade de invasão da biópsia TE, (3) o custo da técnica completa e (4) que a biópsia TE está sujeita a viés de amostragem - uma única biópsia TE de 5-10 as células podem não representar com precisão a ploidia de todo o blastocisto.

Um spin-off do PGT convencional é a análise do DNA no fluido da blastocele (BF). Esse fenômeno foi relatado pela primeira vez por Palini et al. (2013). A origem do DNA no BF tem sido sugerida como resultado da euploidização do embrião, ou seja, a eliminação de DNA aneuploidia ou células aneuploidicas por meio de processos regulatórios como apoptose e/ou necrose (Leaver e Wells, 2019). A prática do colapso do blastocisto antes da vitrificação (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) oferece a oportunidade de realizar PGT-A minimamente invasivo (miPGT-A), ou seja, a biópsia BF. Em um estudo para investigar a concordância de ploidia entre PGT-A com biópsia TE e PGT-A com biópsia BF, os autores descobriram que a taxa de gravidez clínica foi de 77% para blastocistos sem amplificação de DNA foram transferidos e 37% para blastocistos com amplificação de DNA ( Magli et al., 2018). O mero acúmulo de DNA no BF, portanto, poderia ser utilizado como medida complementar para priorizar blastocistos para transferência. Implementar BF-biópsia e amplificação genômica total (WGA) como medida de seleção suplementar limita/reduz três dos principais desafios do PGT-A; (1) conhecimento técnico, (2) invasividade e (3) custos.

No presente estudo randomizado controlado (RCT), os investigadores investigarão a amplificação de DNA em biópsias de fluido de blastocisto (BF-biópsia) como uma técnica de seleção suplementar para selecionar blastocistos para transferência em conjunto com os escores de morfologia de blastocisto. Serão comparados os resultados da implantação clínica de FETs em que foram transferidos blastocisto único selecionado por pontuação sem amplificação de DNA e blastocistos selecionados por pontuação única.