DNA-amplifikation i Blastocoel-væske

Introduktion Målet med assisteret reproduktionsteknologi (ART) er levering af en sund singleton, hvor behandlingsstrategien i IVF har den bedste chance er overførsel af det mest levedygtige embryo fra en patients embryokohorte. Embryovalg er derfor altafgørende for succesen med dette mål. Den mikroskopiske vurdering og scoring af embryomorfologi blev udviklet som en embryoselektionsteknik i de tidlige år af IVF (Veeck, 1991) og har lige siden været den mest udbredte embryoselektionsteknik. Imidlertid har teknikkens begrænsede evne til at maksimere embryoimplantationshastigheder længe været beklaget, og derfor har der længe været søgt efter mere forbedrede embryoselektionsteknikker. Time-lapse overvågning og scoring (Paulson et al., 2018) og euploid embryooverførsel ved hjælp af PGT-A (præimplantations genetisk testning for aneuploidi; Gleicher et al., 2017) er nyere innovationer, der er blevet konkurrenter til at erstatte konventionel mikroskopisk vurdering og scoring af embryomorfologi. En fordel ved PGT-A er dets uafhængighed af embryoudvikling og morfologiske egenskabsvurderinger, da euploide blastocyster implanteres med samme hastighed, uanset blastocystmorfologiscore (Capalbo et al., 2014). Udover PGT-A's tekniske og biologiske begrænsninger kan omkostningerne ved implementering af PGT-A som embryoselektionsteknik af mange betragtes som uoverkommelige.

I udviklingen af ​​PGT i human IVF har PGT udviklet sig fra PGT-v1 til PGT-v2 baseret på de negative resultater af biopsiering af 1-2 blastomerer fra embryoner i spaltningsstadiet (PGT-v1) og forbedringen i blastocystudviklingsbetingelser. Evidensen tydede på, at PGT-v.1 udgjorde en betydelig risiko for embryones levedygtighed, uden nogen fordel som følge af overførsel af euploide embryoner (Gleicher et al., 2017). De fleste undersøgelser har rapporteret, at PGT-v2, som kræver biopsiing af 5-10 trophectoderm (TE) celler, ikke udgør nogen signifikant risiko for udviklingspotentialet (implantationslevedygtighed) af biopsierede blastocyster. Men for nylig har der været rapporter, der tyder på, at TE-biopsi muligvis ikke er helt fri for risiko (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). I øjeblikket står PGT-A over for fire udfordringer, der forhindrer dets rutinemæssige brug som blastocystudvælgelsesteknik; (1) behovet for høj teknisk ekspertise, (2) invasiviteten af ​​TE-biopsi, (3) omkostningerne ved den fulde teknik, og (4) at TE-biopsi er genstand for prøveudtagningsbias - en enkelt TE-biopsi på 5-10 celler repræsenterer muligvis ikke nøjagtigt ploidien af ​​hele blastocysten.

En spin-off af konventionel PGT er analysen af ​​DNA i blastocoel væske (BF). Dette fænomen blev først rapporteret af Palini et al. (2013). Oprindelsen af ​​DNA'et i BF er blevet foreslået at være resultatet af embryoeuploidisering, dvs. eliminering af aneuploidisk DNA eller aneuploidiske celler gennem regulatoriske processer såsom apoptose og/eller nekrose (Leaver og Wells, 2019). Praksisen med blastocystkollaps før forglasning (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) giver mulighed for at udføre minimalt invasiv PGT-A (miPGT-A), dvs. den biopsierende BF. I en undersøgelse for at undersøge ploidioverensstemmelse mellem PGT-A med TE-biopsi og PGT-A med BF-biopsi fandt forfatterne, at den kliniske graviditetsrate var 77 % for blastocyster uden DNA-amplifikation blev overført og 37 % for blastocyster med DNA-amplifikation ( Magli et al., 2018). Den blotte akkumulering af DNA i BF kan derfor bruges som en supplerende foranstaltning til at prioritere blastocyster til overførsel. Implementering af BF-biopsi og helgenomisk amplifikation (WGA) som en supplerende selektionsforanstaltning begrænser/reducerer tre af PGT-A's hovedudfordringer; (1) teknisk ekspertise, (2) invasivitet og (3) omkostninger.

I det nuværende randomiserede kontrollerede forsøg (RCT) vil efterforskerne undersøge DNA-amplifikation i blastocystvæskebiopsier (BF-biopsi) som en supplerende selektionsteknik til at udvælge blastocyster til overførsel i forbindelse med blastocystmorfologiscore. De kliniske implantationsresultater af FET'er, hvor score-selekterede enkelt blastocyst uden DNA-amplifikation og score-selekterede enkelt blastocyster blev overført, vil blive sammenlignet.