Amplifikace DNA v Blastocoel Fluid

Úvod Cílem technologie asistované reprodukce (ART) je porod zdravého ojedinělého plodu, přičemž léčebnou strategií při IVF je největší šance na přenos jediného nejživotaschopnějšího embrya z kohorty embryí pacienta. Výběr embryí je proto pro úspěch tohoto cíle prvořadý. Mikroskopické hodnocení a skórování morfologie embryí bylo vyvinuto jako technika selekce embryí v prvních letech IVF (Veeck, 1991) a od té doby zůstává nejrozšířenější technikou selekce embryí. Omezená schopnost této techniky maximalizovat míru implantace embryí však byla dlouho kritizována, a proto se dlouho hledaly dokonalejší techniky selekce embryí. Časosběrné monitorování a skórování (Paulson et al., 2018) a euploidní přenos embryí pomocí PGT-A (preimplantační genetické testování aneuploidie; Gleicher et al., 2017) jsou nedávnými inovacemi, které se staly kandidáty na nahrazení konvenčního mikroskopického hodnocení a skórování. morfologie embrya. Výhodou PGT-A je jeho nezávislost na vývoji embrya a hodnocení morfologických vlastností, protože euploidní blastocysty se implantují stejnou rychlostí bez ohledu na skóre morfologie blastocyst (Capalbo et al., 2014). Navíc, kromě technických a biologických omezení PGT-A, mohou být náklady na implementaci PGT-A jako techniky selekce embryí mnohými považovány za neúměrné.

Ve vývoji PGT v lidském IVF PGT progredovala z PGT-v1 na PGT-v2 na základě nepříznivých výsledků biopsie 1-2 blastomer z embryí ve stádiu štěpení (PGT-v1) a zlepšení podmínek vývoje blastocyst. Důkazy naznačovaly, že PGT-v.1 představuje významné riziko pro životaschopnost embryí, přičemž přenos euploidních embryí nemá žádný přínos (Gleicher et al., 2017). Většina studií uvádí, že PGT-v2, který vyžaduje biopsii 5-10 buněk trofektodermu (TE), nepředstavuje žádné významné riziko pro vývojový potenciál (životaschopnost implantace) bioptických blastocyst. Nedávno se však objevily zprávy naznačující, že biopsie TE nemusí být zcela bez rizika (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). V současné době čelí PGT-A čtyřem problémům, které brání jeho rutinnímu použití jako techniky selekce blastocyst; (1) potřeba vysoké technické odbornosti, (2) invazivita biopsie TE, (3) náklady na celou techniku ​​a (4) to, že biopsie TE podléhá zkreslení odběru vzorků – jedna biopsie TE 5–10 buňky nemusí přesně reprezentovat ploidii celé blastocysty.

Spin-off konvenční PGT je analýza DNA v blastocoelové tekutině (BF). Tento jev byl poprvé popsán Palini et al. (2013). Předpokládá se, že původ DNA v kojeneckém věku je výsledkem euploidizace embrya, tj. eliminace aneuploidní DNA nebo aneuploidních buněk prostřednictvím regulačních procesů, jako je apoptóza nebo nekróza (Leaver a Wells, 2019). Praxe kolapsu blastocysty před vitrifikací (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) poskytuje možnost provést minimálně invazivní PGT-A (miPGT-A), tj. biopsii BF. Ve studii zkoumající ploidní shodu mezi PGT-A s biopsií TE a PGT-A s biopsií BF autoři zjistili, že míra klinického těhotenství byla 77 % u blastocyst bez přenesené DNA a 37 % u blastocyst s amplifikací DNA ( Magli a kol., 2018). Pouhá akumulace DNA v BF by proto mohla být použita jako doplňkové opatření k upřednostnění blastocyst pro přenos. Implementace BF-biopsie a celogenomové amplifikace (WGA) jako doplňkového selekčního opatření omezuje/snižuje tři z hlavních problémů PGT-A; (1) technická odbornost, (2) invazivita a (3) náklady.

V této randomizované kontrolované studii (RCT) budou výzkumníci zkoumat amplifikaci DNA v biopsiích tekutiny z blastocyst (BF-biopsie) jako doplňkovou selekční techniku ​​k výběru blastocyst pro přenos ve spojení s morfologickým skóre blastocyst. Budou porovnány výsledky klinické implantace FET, do kterých byly přeneseny jednotlivé blastocysty bez amplifikace DNA a jednotlivé blastocysty se skórem vybrané.