Mu阿片受体基因多态性与鞘内镇痛

研究 1（鞘内芬太尼）：主要结果变量是鞘内芬太尼镇痛的持续时间。 总样本量为 152 名受试者（野生型 OPRM1 = 106，变体 OPRM1 = 46）的双侧对数秩检验在 α = 0.05 时达到 80% 的功效，以检测 0.5 和 0.3 之间 0.2 的差异（受试者的比例70 分钟后继续鞘内注射芬太尼镇痛）。 这假设 70% 的受试者具有野生型 MUOR1 表型，30% 的受试者具有变异表型。 考虑到预期的受试者退出，将有 175 名受试者参加该研究。

研究 2（鞘内吗啡）：主要结果变量是鞘内注射吗啡后 24 小时所需的救援镇痛量（吗啡当量）。 71 名受试者的总体样本量（野生型 OPRM1 = 50，变体 OPRM1 = 21）达到 81% 的功效来检测两组均值均为 40 毫克吗啡当量的零假设与替代假设之间 15 毫克吗啡当量的差异一组的平均值是 25 毫克吗啡当量。 估计的组标准差是 20 mg 吗啡当量，其中 alpha = 0.05，使用两侧 Mann-Whitney 检验，假设实际分布是​​均匀的。 这假设 70% 的受试者将具有野生型 OPRM1 表型，30% 的受试者具有变异表型。 考虑到预期的受试者退出，将有 90 名受试者参加该研究。

协议特定方法：

研究 1：在常规麻醉前评估后，将立即联系普伦蒂斯妇女医院分娩室的合格产妇参与研究。 这发生在进入分娩室后不久。 同意参与的女性此时将给出书面的知情同意书。

在受试者同意参与研究后不久，将获得静脉血用于 µ-阿片受体基因 118 位的遗传分析，方法是通过放置用于分娩和分娩常规静脉通路的静脉导管，或通过新的静脉穿刺。 将总共​​ 10 mL 血液收集到两个 5 mL EDTA 管中。 这些试管将被分批、编码并储存在 40C 的冰箱中，直到它们被发送（1 次/月）到日内瓦霍皮托大学 Landau 博士的 J. L. Blouin 博士的实验室。 遗传分析将如下所述进行。 当受试者第一次要求镇痛时，将检查她的子宫颈（这是开始镇痛之前的常规程序）。 如果子宫颈扩张 2 至 5 厘米，则产妇将被纳入研究。 疼痛的视觉模拟评分 (VAS)（100 毫米线，其中 0 毫米 = 无疼痛，100 毫米 = 最严重的疼痛）将在镇痛开始前立即确定。 联合脊髓-硬膜外镇痛将在每个例行的坐位开始，鞘内注射芬太尼 25 微克。 将放置硬膜外导管。 在产妇再次要求镇痛之前，不会通过硬膜外导管注射药物。 硬膜外导管固定后，产妇将被置于侧卧位。 鞘内注射后 10 分钟将测定 VAS。

主要结果变量是鞘内芬太尼镇痛的持续时间。在产妇要求额外镇痛时，将检查子宫颈。 将确定 VAS。 此外，将询问产妇自镇痛开始以来是否出现瘙痒（无、轻度、中度、重度）、恶心（无、轻度、中度或重度）和呕吐（是、否）。 将给予硬膜外测试剂量（利多卡因 1.5% 与肾上腺素 1:200,000）。 假设测试剂量为阴性，布比卡因 0.125% 将逐渐注射至 T10 感官水平。 硬膜外镇痛将通过患者自控硬膜外镇痛 (PCEA)（布比卡因 0.0625% 和芬太尼 1.95 微克/毫升：背景输注 15 毫升/小时，PCEA 推注 5 毫升，锁定 10 分钟，最大 30 毫升/小时）按照常规进行.

该研究在产妇分娩并停止硬膜外输注后结束。 此时将询问受试者对分娩镇痛的满意度（100 毫米量表，0 毫米 = 完全不满意，100 毫米 = 非常满意）。

将收集以下数据：产妇年龄、身高、体重、种族（自我描述）、开始镇痛时的宫颈扩张、第二次镇痛请求时的时间和宫颈扩张、最大催产素剂量、完成宫颈扩张的时间（10 cm )、分娩时间、分娩方式、新生儿体重、Apgar 评分和脐带血气值（作为常规护理的一部分获得）、硬膜外布比卡因和其他局部麻醉剂的总剂量、硬膜外芬太尼的总剂量、PCEA 推注次数和手动推注的次数（由麻醉师进行）。

如果不进行 CSE 镇痛，如果在鞘内注射后 10 分钟没有镇痛（VAS > 10 mm）（CSE 技术失败），如果在鞘内注射后 60 分钟内宫颈扩张 8 cm，则病例将被排除在数据分析之外, 或者如果患者剖宫产。 这些案例将被报告。

研究 2：在常规麻醉前评估后，将立即联系普伦蒂斯妇女医院分娩和计划剖宫产的合格女性参与研究。 这发生在进入分娩室后不久。 同意参与的女性此时将给出书面的知情同意书。

在受试者同意参与研究后不久，将获得静脉血用于 µ-阿片受体基因 118 位的遗传分析，方法是通过放置用于分娩和分娩常规静脉通路的静脉导管，或通过新的静脉穿刺。 将总共​​ 10 mL 血液收集到两个 5 mL EDTA 管中。 这些试管将被分批、编码并储存在 4oC 的冰箱中，直到它们被发送（1 次/月）到日内瓦大学医院 J. L. Blouin 博士的实验室，由 Landau 博士照料。 将如下所述进行遗传分析。将进行常规吸入预防（静脉注射雷尼替丁和甲氧氯普胺，以及口服抗酸剂）。 脊髓麻醉将以常规方式在坐位开始，使用布比卡因 12 毫克（1.6 毫升 0.75% 高压布比卡因）、芬太尼 15 微克和吗啡 150 微克。 鞘内注射后，受试者将立即置于仰卧子宫移位位置。 头部感觉阻滞的水平将在鞘内注射后使用 von Frye 毛发测定 30 分钟。 感觉水平低于 T6 的受试者，或需要术中全身阿片类药物补充的受试者，将被排除在进一步的研究参与之外。

在 PACU 和手术后 24 小时内，患者将按照标准方案每 6 小时口服布洛芬 600 毫克。 如果患者感到不适，他们可能会要求救援镇痛。 救援药物包括口服 10 毫克氢可酮和 325 毫克对乙酰氨基酚。 如果疼痛没有缓解，将在 1 小时后提供额外剂量的氢可酮 10 毫克加对乙酰氨基酚 325 毫克。 这些是剖宫产术后镇痛的常规口服镇痛药物。 将编写标准医嘱以监测镇静和呼吸频率，以及治疗副作用（恶心、呕吐、瘙痒和呼吸抑制）。

主要结果变量是鞘内注射吗啡后 24 小时所需的救援吗啡等效镇痛量。 18 将记录第一次抢救镇痛请求的时间，并在请求抢救镇痛时确定 VAS。 此外，将要求产妇在鞘内注射后 4、8、12、18 和 24 小时提供疼痛 VAS。 将在鞘内注射后 4 小时和 24 小时确定是否存在瘙痒症（无、轻度、中度、重度）、恶心（无、轻度、中度或重度）和呕吐（是、否）。

研究在鞘内注射后 24 小时结束。 此时将询问受试者对术后镇痛的满意度（100 毫米量表，0 毫米 = 完全不满意，100 毫米 = 非常满意）。 研究方案不会规定进一步镇痛。

将收集以下数据：产妇年龄、身高、体重、种族（自我描述）、术中补充镇静的要求、新生儿体重、瘙痒、恶心或呕吐的术中或术后治疗。 除了首次请求补充口服镇痛的时间外，还将记录以下内容：鞘内注射后 4、8、12、18 和 24 小时的补充镇痛剂量要求（对乙酰氨基酚/氢可酮片数）。

DNA 收集：外周血将收集在 2 个 5ml EDTA 管中（共 10ml）。 DNA 将使用 Puregene 血液提取试剂盒（Gentra，明尼阿波利斯，明尼苏达州）通过非酚类方法制备，并通过凝胶电泳测试分子量和通过光密度测量（比率 260/280 nm）测量纯度。

SNP 基因分型：为了鉴定 A118G SNP 的等位基因分布，首先使用在 SNP 附近设计的引物通过 PCR（在配备 96 孔微量滴定板块的热循环仪设备上）扩增来自个体的 20-60 ng DNA . 然后通过微型测序（焦磷酸测序）在扩增产物中对 SNP 进行基因分型。

焦磷酸测序：使用 cDNA 特异性引物（跨越基因组 DNA 中的一个内含子）的 PCR，其中正向引物用 5' 生物素标记，在标准条件下进行，并通过焦磷酸测序方法分析产物。 简而言之，在突变位点前两个核苷酸处设计了一个内部引物，以便可以通过量化 PCR 产物中存在的每个等位基因的相对量来测定两个 mRNA 群体。 来自正常和受影响受试者的 DNA 用作对照。

在含有 10mM Tris-HCl、2M NaCl、1mM EDTA 和 0.1% Tween 20 的缓冲液中 65 oC 孵育 15 分钟，用 Dynabeads（Dynal，奥斯陆，挪威）固定 PCR 产物。 然后使用磁性分离从溶液中去除 PCR 产物，用 NaOH 0.5 M 变性并用 200mM Tris-乙酸盐、50mM MgAc2 洗涤。 然后将剩余的单链 DNA 与内部“测序”引物杂交，方法是将混合物加热至 80oC，然后缓慢冷却至室温。 下一个酶和底物混合物自动添加到每个孔中，反应在 28oC 下通过按预定顺序连续添加单核苷酸进行。 荧光素酶峰高与核苷酸掺入的数量成正比，这在许多实验设置中已被证明是非常定量的（5% 错误率）。

编码的 DNA 样本将存储在 Blouin 博士的实验室中。 除非受试者签署同意书以进行进一步的未来研究，否则不会进行进一步的测序。