뮤-오피오이드 수용체 유전적 다형성 및 경막내 진통

연구 1(경막내 펜타닐): 주요 결과 변수는 경막내 펜타닐 진통 기간입니다. 전체 표본 크기가 152명(야생형 OPRM1 = 106, 변형 OPRM1 = 46)인 양측 로그 순위 테스트는 α = 0.05에서 80% 검정력을 달성하여 0.5와 0.3 사이의 0.2 차이(피험자의 비율)를 감지합니다. 70분 후 척수강내 펜타닐 진통제 지속). 이것은 대상의 70%가 야생형 MUOR1 표현형을 갖고 30%는 변이형 표현형을 가질 것이라고 가정합니다. 예상되는 피험자 탈락을 설명하기 위해 175명의 피험자가 연구에 등록할 것입니다.

연구 2(척수강내 모르핀): 일차 결과 변수는 척수강내 모르핀 주사 후 24시간 동안 필요한 구조 진통(모르핀 등가물)의 양입니다. 71명의 전체 표본 크기(야생형 OPRM1 = 50, 변형 OPRM1 = 21)는 두 그룹 평균이 모두 40mg 모르핀 등가물이라는 귀무가설과 한 그룹의 평균은 25mg 모르핀 등가물입니다. 추정된 그룹 표준 편차는 실제 분포가 균일하다고 가정하는 양면 Mann-Whitney 테스트를 사용하여 알파 = 0.05인 20mg 모르핀 등가물입니다. 이는 대상의 70%가 야생형 OPRM1 표현형을 갖고 30%는 변이형 표현형을 가질 것이라고 가정합니다. 예상되는 피험자 탈락을 설명하기 위해 90명의 피험자가 연구에 등록됩니다.

프로토콜별 방법:

연구 1: Prentice Women's Hospital의 분만실에 입원한 적격 분만자는 일상적인 마취 전 평가 직후 연구 참여를 위해 접근할 것입니다. 이것은 분만실에 입원한 직후에 발생합니다. 참여에 동의하는 여성은 이때 서면으로 정보에 입각한 동의를 제공합니다.

피험자가 연구 참여에 동의한 직후, 진통 및 출산을 위한 일상적인 정맥 접근을 위해 배치된 정맥 카테터를 통해 또는 새로운 정맥 천자를 통해 μ-오피오이드 수용체 유전자의 118번 위치의 유전 분석을 위해 정맥혈을 채취합니다. 총 10mL 혈액을 2개의 5mL EDTA 튜브에 수집합니다. 튜브는 Hopitaux Universitaires de Geneve의 Dr. Landau를 돌보는 Dr. J. L. Blouin의 실험실로 보내질 때까지(1x/월) 40C 냉장고에 배치, 코딩 및 저장됩니다. 유전자 분석은 하기 기술된 바와 같이 수행될 것이다. 피험자가 진통제를 처음 요청하면 자궁경부가 검사됩니다(이는 진통제를 시작하기 전의 일상적인 절차입니다). 자궁경부가 2~5cm 확장된 경우 산모가 연구에 포함됩니다. 통증(0mm = 통증 없음 및 100mm = 가능한 최악의 통증인 100mm 라인)에 대한 시각적 아날로그 점수(VAS)는 진통제 개시 직전에 결정됩니다. 척수-경막외 진통제를 결합하여 척추강내 펜타닐 25마이크로그램으로 루틴에 따라 앉은 자세에서 시작합니다. 경막외 카테터를 배치합니다. 산모가 진통제를 다시 요청할 때까지 경막외 카테터를 통해 약물을 주사하지 않습니다. 경막외 카테터를 고정한 후 분만자는 측면 위치에 배치됩니다. VAS는 경막내 주사 후 10분 후에 결정됩니다.

일차 결과 변수는 수막강내 펜타닐 진통 기간입니다. 분만사가 추가 진통을 요청할 때 자궁경부가 검사됩니다. VAS가 결정됩니다. 또한 산모에게 진통(없음, 경증, 중등도, 중증), 메스꺼움(없음, 경증, 중등도 또는 중증) 및 구토(예, 아니오)가 시작된 이후 소양증의 존재에 대해 질문합니다. 경막외 검사 용량이 투여됩니다(리도카인 1.5%와 에피네프린 1:200,000). 시험 용량이 음성이라고 가정하면 부피바카인 0.125%를 T10 감각 수준까지 점진적으로 주입합니다. 경막외 진통은 환자 제어 경막외 진통(PCEA)(펜타닐 1.95마이크로그램/mL 포함 부피바카인 0.0625%: 백그라운드 주입 15mL/h, PCEA 볼루스 5mL, 잠금 10분, 최대 30mL/h)으로 유지됩니다. .

연구는 산부인과가 분만하고 경막외 주입이 중단된 후 종료됩니다. 이때 피험자는 진통제에 대한 만족도에 대해 질문을 받게 됩니다(100mm 척도, 0mm = 전혀 만족하지 않음, 100mm = 매우 만족함).

다음 데이터가 수집됩니다: 산모의 나이, 키, 체중, 인종(자기 설명), 진통 시작 시 자궁경부 확장, 진통을 위한 두 번째 요청 시 시간 및 자궁경부 확장, 최대 옥시토신 용량, 자궁경부 확장 완료 시간(10 cm ), 분만까지의 시간, 분만 방식, 신생아 체중, Apgar 점수 및 제대혈 가스 값(일상적인 치료의 일부로 획득), 경막외 부피바카인 및 기타 국소 마취제의 총 용량, 경막외 펜타닐의 총 용량, PCEA 볼루스 수 및 수동 볼루스의 수(마취 전문의에 의해).

CSE 진통을 시행하지 않은 경우, 척수강내 주사 10분 후 진통이 없는 경우(VAS > 10 mm)(CSE 기법 실패), 척수강내 주입 후 60분 이내에 자궁경부 확장이 8 cm인 경우 데이터 분석에서 제외 , 또는 환자가 제왕절개 수술을 받은 경우. 이러한 사례가 보고됩니다.

연구 2: 예정된 제왕절개 분만을 위해 Prentice 여성 병원의 분만실에 입원한 적격 여성은 일상적인 마취 전 평가 직후 연구 참여를 위해 접근할 것입니다. 이것은 분만실에 입원한 직후에 발생합니다. 참여에 동의하는 여성은 이때 서면으로 정보에 입각한 동의를 제공합니다.

피험자가 연구 참여에 동의한 직후, 진통 및 출산을 위한 일상적인 정맥 접근을 위해 배치된 정맥 카테터를 통해 또는 새로운 정맥 천자를 통해 μ-오피오이드 수용체 유전자의 118번 위치의 유전 분석을 위해 정맥혈을 채취합니다. 총 10mL 혈액을 2개의 5mL EDTA 튜브에 수집합니다. 튜브는 Hospitaux Universitaires de Geneve의 Dr. Landau를 관리하는 Dr. J. L. Blouin의 실험실로 보내질 때까지(월 1회) 일괄 처리, 코딩 및 4oC 냉장고에 보관됩니다. 유전자 분석은 하기 기술된 바와 같이 수행될 것이다. 일상적인 흡인 예방이 투여될 것이다(정맥 라니티딘 및 메토클로프라미드, 및 경구 제산제). 척추 마취는 부피바카인 12mg(1.6mL 0.75% 고압 부피바카인), 펜타닐 15μg 및 모르핀 150마이크로그램을 사용하여 일상적인 방식으로 앉은 자세에서 시작됩니다. 피험자는 척수강내 주사 직후 앙와위 왼쪽 자궁 변위 위치에 배치됩니다. 두부 감각 차단의 수준은 von Frye hair를 사용하여 경막내 주사 후 30분 후에 결정됩니다. T6 미만의 감각 수준을 가진 피험자 또는 수술 중 전신 오피오이드 보충이 필요한 피험자는 추가 연구 참여에서 제외됩니다.

PACU에서 수술 후 24시간 동안 환자는 표준 프로토콜에 따라 ibuprofen 600mg po q6h를 투여받습니다. 환자는 불편함을 느끼는 경우 구제 진통제를 요청할 수 있습니다. 구조 약물은 하이드로코돈 10mg과 os당 아세트아미노펜 325mg으로 구성됩니다. 통증이 완화되지 않으면 1시간 후에 하이드로코돈 10mg과 아세트아미노펜 325mg을 추가로 투여합니다. 이들은 수술 후 제왕절개 진통제를 위한 일상적인 경구 진통제입니다. 진정 및 호흡률 모니터링, 부작용(메스꺼움, 구토, 가려움증 및 호흡 억제) 치료를 위한 표준 지시가 작성됩니다.

1차 결과 변수는 척수강내 모르핀 주사 후 24시간 동안 필요한 구제 모르핀 등가 진통제의 양입니다.18 최초 구조 진통제 요청 시간을 기록하고 구조 진통제 요청 시 VAS를 결정합니다. 또한 분만사는 척수강내 주사 후 4, 8, 12, 18 및 24시간에 통증에 대한 VAS를 제공하도록 요청받을 것입니다. 가려움증(없음, 경증, 중등도, 중증), 메스꺼움(없음, 경증, 중등도 또는 중증) 및 구토(예, 아니오)의 존재는 척수강내 주사 후 4시간 및 24시간에 결정됩니다.

연구는 척수강내 주사 후 24시간 후에 종료됩니다. 이때 피험자는 수술 후 진통에 대한 만족도에 대해 질문을 받게 됩니다(100mm 척도, 0mm = 전혀 만족하지 않음, 100mm = 매우 만족함). 추가 진통은 연구 프로토콜에 의해 지시되지 않을 것이다.

다음 데이터가 수집됩니다: 모체 연령, 키, 체중, 인종(자기 설명), 추가 수술 중 진정제 요구 사항, 신생아 체중, 가려움증에 대한 수술 중 또는 수술 후 치료, 메스꺼움 또는 구토. 추가 경구 진통제를 처음 요청하는 시간에 추가하여 다음 사항이 기록됩니다.

DNA 수집: 말초 혈액을 2개의 5ml EDTA 튜브(총 10ml)에 수집합니다. DNA는 Puregene Blood Extraction Kit(Gentra, Minneapolis, MN)를 사용하여 비페놀 방법으로 준비하고 광학 밀도 측정법(비율 260/280 nm)으로 겔 전기영동 및 순도 품질에 대한 분자량을 테스트합니다.

SNP 유전형 분석: A118G SNP의 대립형질 분포를 확인하기 위해 개인의 DNA 20-60ng을 먼저 SNP 부근에서 설계된 프라이머를 사용하여 PCR(96웰 마이크로타이터 플레이트 블록이 장착된 열순환 장치에서)으로 증폭합니다. . 그런 다음 SNP는 미니시퀀싱(파이로시퀀싱)에 의해 증폭된 제품에서 유전자형이 지정됩니다.

파이로시퀀싱: 정방향 프라이머가 5' 비오틴으로 표지된 cDNA 특이적 프라이머(게놈 DNA의 인트론에 걸쳐 있음)를 사용한 PCR을 표준 조건에서 수행하고 파이로시퀀싱 방법으로 생성물을 분석합니다. 간단히 말해서, 내부 프라이머는 돌연변이 부위 전에 2개의 뉴클레오티드를 설계하여 PCR 산물에 존재하는 각 대립유전자의 상대적인 양을 정량화하여 2개의 mRNA 집단을 분석할 수 있습니다. 정상 및 영향을 받은 대상의 DNA가 대조군으로 사용됩니다.

PCR 산물은 10mM Tris-HCl, 2M NaCl, 1mM EDTA 및 0.1% Tween 20을 포함하는 완충액에서 15분, 65 oC 배양으로 Dynabeads(Dynal, Oslo, Norway)로 고정됩니다. 그런 다음 PCR 산물을 자기 분리를 사용하여 용액에서 제거하고 NaOH 0.5M로 변성시키고 200mM Tris-Acetate, 50mM MgAc2로 세척합니다. 나머지 단일 가닥 DNA는 혼합물을 80oC로 가열하고 서서히 실온으로 냉각하여 내부 '시퀀싱' 프라이머와 혼성화됩니다. 다음 효소와 기질 믹스는 자동으로 각 웰에 추가되며 반응은 28oC에서 미리 결정된 순서로 단일 뉴클레오티드를 순차적으로 추가함으로써 진행됩니다. 루시퍼라제 피크 높이는 여러 실험 설정에서 매우 정량적인(오류율 5%) 것으로 나타난 뉴클레오티드 통합 수에 비례합니다.

암호화된 DNA 샘플은 Dr. Blouin의 연구실에 보관됩니다. 피험자가 향후 추가 연구에 대한 동의서에 서명하지 않는 한 추가 시퀀싱은 수행되지 않습니다.