休眠的围绝经期卵巢卵泡能否对 FSH 产生反应？

简介 女性在 51 岁的平均年龄停止月经，但 40 岁以后怀孕变得不那么普遍，43 岁怀孕相对罕见。 当前的普遍看法将生育能力的下降归因于原始卵泡池的耗尽（Burger 等人，2008 年）。 生育能力的下降不一定是由于原始卵泡池的急剧耗尽所致（Hansen 等人，2008 年），而可能是由于从原始卵泡到胃窦卵泡、促性腺激素反应性卵泡的充分过渡失败。 30 多岁或 40 出头的生育患者并不罕见，他们对外源性 FSH 的最极端剂量没有反应，但仍会继续月经直到 50 岁。 通常的做法是将这些患者转介到卵母细胞捐赠计划。

最近，李等人。 (2010) 证明，将新生小鼠卵巢碎片与磷酸酶抑制剂一起孵育，在 10 号染色体 (PTEN) 磷酸酶和 PI3K 激活肽中缺失 TENsin 同源性，增加 Foxo3 的核排斥并推动大量休眠的原始卵泡变成 FSH -反应性窦卵泡。 此外，在裸鼠模型（缺乏免疫系统的小鼠）中，他们表明移植的人卵巢碎片主要包含来自手术标本的原始卵泡，通过相同的孵育处理，也经历了休眠卵泡的激活以衍生含有成熟卵母细胞的排卵前卵泡。

基于以上所有我们假设，通过与 PTEN 抑制剂和 PI3K 激活肽孵育以激活休眠的原始卵泡，可以促使围绝经期妇女的卵巢变得对 FSH 有反应。

如果发现可行，这项技术可以为那些原本会被转介接受卵母细胞捐赠的患者带来生育希望。

拟议研究的目的 从接受妇科手术的围绝经期患者中获取卵巢皮质碎片，并测试用 PTEN 磷酸酶和 PI3K 激活肽治疗是否会在裸鼠模型中诱导这些碎片产生 FSH 反应性卵泡。

研究对象和标本采集 多达 10 名年龄超过 45 岁、计划进行妇科手术的女性将被要求提供一半的卵巢用于研究。 然后将组织切成多个碎片，适合冷冻保存。

实验室方法 卵巢碎片的冷冻保存将使用类似于早期卵母细胞冷冻储存报告的玻璃化方案（Yoon 等人，2003 年）。 因为与大卵母细胞相比，冷冻保存试剂可以很容易地穿透原始卵泡，我们预计这些卵泡将得到有效保存。 在年轻患者中，一个 1 毫米的皮质立方体包含约 50 个原始卵泡。

来自每位患者的三个组织样本将被转移到斯坦福大学的 Hsueh 实验室（附信），并将解冻用于体外激活，然后使用与 Li 等人描述的相同方案进行异种移植。从那个实验室。 （Li 等人，2010 年）。 体外孵育将在 bpV(pic) (Calbiochem) 中进行，这是一种 PTEN 抑制剂，可激活休眠卵泡。 细胞渗透性磷酸肽 (740Y-P) (Tocris) 能够结合 PI3K 的 p85 调节亚基的 SH2 结构域以刺激酶活性。 活化的 PI3K 将磷脂酰肌醇 (4, 5)-二磷酸 (PIP2) 转化为磷脂酰肌醇 (3-5)-三磷酸 (PIP3)，而 PTEN 抑制剂阻止 PIP3 转化回 PIP2。 反过来，累积的 PIP3 可以刺激 Akt 的磷酸化并增加转录因子 Foxo3 的核排斥。