I follicoli ovarici in perimenopausa dormienti possono diventare sensibili all'FSH?

Introduzione Le donne smettono di avere le mestruazioni all'età media di 51 anni, ma le gravidanze diventano molto meno frequenti oltre i 40 anni, con una gravidanza a 43 anni che è una relativa rarità. L'attuale percezione comune attribuisce la regressione della fertilità all'esaurimento del pool di follicoli primordiali (Burger et al. 2008). Il declino della fertilità può derivare non necessariamente da un brusco esaurimento del pool follicolare primordiale (Hansen et al. 2008), ma può essere dovuto al fallimento di un'adeguata transizione dai follicoli primordiali a quelli antrali, che rispondono alle gonadotropine. Non è infrequente incontrare una paziente fertile sulla trentina o all'inizio dei quarant'anni, che non risponderebbe alle dosi più estreme di FSH esogeno, ma continuerà comunque ad avere le mestruazioni fino all'età di 50 anni. La prassi abituale è indirizzare queste pazienti a programmi di donazione di ovociti.

Recentemente Li et al. (2010) hanno dimostrato che l'incubazione di frammenti ovarici di topo neonatale con un inibitore della fosfatasi con omologia TENsin eliminata nel cromosoma 10 (PTEN) fosfatasi e un peptide attivante PI3K, ha aumentato l'esclusione nucleare di Foxo3 e spinto un gran numero di follicoli primordiali dormienti a diventare FSH -follicoli antrali responsivi. Inoltre, nel modello di topi nudi (topi privi di sistema immunitario) hanno mostrato che frammenti ovarici umani trapiantati contenenti principalmente follicoli primordiali da campioni chirurgici, trattati con la stessa incubazione, subivano anche l'attivazione di follicoli dormienti per derivare follicoli preovulatori contenenti ovociti maturi.

Sulla base di tutto quanto sopra, ipotizziamo che le ovaie delle donne nei loro anni di perimenopausa potrebbero essere spinte a diventare FSH-reattive, utilizzando l'incubazione con l'inibitore PTEN e il peptide attivante PI3K per attivare i follicoli primordiali dormienti.

Se ritenuta fattibile, questa tecnica potrebbe fornire la speranza di raggiungere la fertilità per i pazienti che altrimenti sarebbero indirizzati a ricevere la donazione di ovociti.

Scopo dello studio proposto Ottenere frammenti corticali ovarici da pazienti in perimenopausa, sottoposte a chirurgia ginecologica, e verificare se il trattamento con PTEN fosfatasi e peptide attivante PI3K indurrebbe questi frammenti a produrre follicoli responsivi all'FSH nel modello di topo nudo.

Soggetti dello studio e raccolta dei campioni Fino a dieci donne, di età superiore ai 45 anni, che devono essere sottoposte a intervento ginecologico, verrà chiesto di fornire metà di un'ovaia per lo studio. Il tessuto verrà quindi tagliato in più frammenti, adatti alla crioconservazione.

Metodi di laboratorio La crioconservazione dei frammenti ovarici utilizzerà un protocollo di vitrificazione simile a quello precedente per la crioconservazione degli ovociti (Yoon et al. 2003). Poiché i reagenti di crioconservazione possono facilmente penetrare nei follicoli primordiali rispetto ai grandi ovociti, prevediamo un'efficiente conservazione di questi follicoli. Nei pazienti giovani, un cubo corticale di 1 mm contiene circa 50 follicoli primordiali.

Tre campioni di tessuto da ciascun paziente saranno trasferiti al laboratorio Hsueh di Stanford (lettera allegata) e saranno scongelati per l'attivazione in vitro seguita da xenotrapianto utilizzando lo stesso protocollo descritto da Li et al. da quel laboratorio. (Li et al. 2010). L'incubazione in vitro avverrà in bpV(pic) (Calbiochem), un inibitore del PTEN, che permette l'attivazione dei follicoli dormienti. e un fosfopeptide permeabile alle cellule (740Y-P) (Tocris) in grado di legarsi al dominio SH2 della subunità regolatoria p85 di PI3K per stimolare l'attività enzimatica. La PI3K attivata converte il fosfatidilinositolo (4, 5)-bisfosfato (PIP2) in fosfatidilinositolo (3-5)-trifosfato (PIP3), mentre l'inibitore PTEN impedisce la riconversione di PIP3 in PIP2. PIP3 accumulato, a sua volta, potrebbe stimolare la fosforilazione di Akt e aumentare l'esclusione nucleare del fattore trascrizionale Foxo3.