Mohou dormantní perimenopauzální ovariální folikuly reagovat na FSH?

Úvod Ženy přestávají menstruovat v průměrném věku 51 let, ale po 40 letech je těhotenství mnohem méně časté, přičemž těhotenství ve 43 letech je relativní vzácností. Současné běžné vnímání připisuje regresi plodnosti vyčerpání zásob primárních folikulů (Burger et al. 2008). Pokles plodnosti nemusí nutně vyplývat z prudkého vyčerpání primárního folikulu (Hansen et al. 2008), ale může být způsoben selháním adekvátního přechodu z primordiálních na antrální folikuly reagující na gonadotropiny. Nezřídka se setkáme s pacientkou s plodností po třicítce nebo po čtyřicítce, která by nereagovala na nejextrémnější dávky exogenního FSH, ale přesto bude menstruovat až do 50 let. Obvyklou praxí je poslat tyto pacientky do programů dárcovství oocytů.

Nedávno Li a kol. (2010) prokázali, že inkubace neonatálních myších ovariálních fragmentů s inhibitorem fosfatázy s TENsin homologií deletovanou ve fosfatáze chromozomu 10 (PTEN) a PI3K aktivačním peptidem, zvýšila nukleární exkluzi Foxo3 a poháněla velké množství spících primordiálních folikulů, aby se staly FSH -responzivní antrální folikuly. Dále na modelu nahých myší (myši postrádající imunitní systém) ukázali, že transplantované fragmenty lidských vaječníků obsahující hlavně primordiální folikuly z chirurgických vzorků, ošetřené stejnou inkubací, také podstoupily aktivaci dormantních folikulů, aby se získaly preovulační folikuly obsahující zralé oocyty.

Na základě všeho výše uvedeného předpokládáme, že vaječníky žen v perimenopauzálních letech by mohly být poháněny, aby se staly odpovědnými na FSH, pomocí inkubace s inhibitorem PTEN a aktivačním peptidem PI3K k aktivaci dormantních primordiálních folikulů.

Pokud by to bylo proveditelné, mohla by tato technika poskytnout naději na dosažení plodnosti pacientkám, které by jinak byly odeslány k dárcovství oocytů.

Cíl navrhované studie Získat ovariální kortikální fragmenty od perimenopauzálních pacientek, které podstoupily gynekologickou operaci, a otestovat, zda léčba PTEN fosfatázou a PI3K aktivačním peptidem indukuje tyto fragmenty k produkci folikulů citlivých na FSH v modelu nahých myší.

Subjekty studie a odběr vzorků Až deset žen starších 45 let, u kterých je plánována gynekologická operace, bude požádáno o poskytnutí poloviny vaječníku pro studii. Tkáň bude poté rozřezána na několik fragmentů vhodných pro kryokonzervaci.

Laboratorní metody Kryokonzervace ovariálních fragmentů bude využívat vitrifikační protokol podobný dřívější zprávě pro kryo-skladování oocytů (Yoon et al. 2003). Protože kryokonzervační činidla mohou snadno proniknout do primordiálních folikulů ve srovnání s velkými oocyty, očekáváme účinnou ochranu těchto folikulů. U mladých pacientů obsahuje jedna 1mm kortikální kostka ~50 primordiálních folikulů.

Tři vzorky tkáně od každého pacienta budou přeneseny do laboratoře Hsueh ve Stanfordu (přiložený dopis) a budou rozmraženy pro aktivaci in vitro a následnou xenotransplantací za použití stejného protokolu, jaký popsal Li et al. z té laboratoře. (Li et al. 2010). In vitro inkubace bude v bpV(pic) (Calbiochem), inhibitoru PTEN, který umožňuje aktivaci spících folikulů. a fosfopeptid (740Y-P) (Tocris) propustný pro buňky, schopný vázat se na doménu SH2 regulační podjednotky p85 PI3K pro stimulaci enzymové aktivity. Aktivovaný PI3K převádí fosfatidylinositol (4, 5)-bisfosfát (PIP2) na fosfatidylinositol (3-5)-trisfosfát (PIP3), zatímco inhibitor PTEN zabraňuje přeměně PIP3 zpět na PIP2. Akumulovaný PIP3 by zase mohl stimulovat fosforylaci Akt a zvýšit jadernou exkluzi transkripčního faktoru Foxo3.