Voivatko lepotilassa olevat perimenopausaaliset munasarjafollikkelit tulla FSH-herkäksi?

Johdanto Naisten kuukautiset loppuvat keskimäärin 51-vuotiaana, mutta raskaudet ovat paljon vähemmän yleisiä yli 40-vuotiaana, ja raskaus 43-vuotiaana on suhteellisen harvinaista. Nykyisen yleisen käsityksen mukaan hedelmällisyyden heikkeneminen johtuu alkurakkuloiden altaan ehtymisestä (Burger et al. 2008). Hedelmällisyyden heikkeneminen ei välttämättä johdu primordiaalisten follikkelien jyrkästä ehtymisestä (Hansen et al. 2008), vaan se voi johtua riittämättömästä siirtymisestä primordiaalisista antraalisiin, gonadotropiiniin reagoiviin follikkeleihin. Ei ole harvinaista kohdata yli kolmekymppinen tai varhainen 40-vuotias hedelmällisyyspotilas, joka ei reagoi äärimmäisimpiin eksogeenisen FSH-annoksiin, mutta joka kuitenkin jatkaa kuukautisia 50-vuotiaaksi asti. Tavanomainen käytäntö on ohjata nämä potilaat munasolujen luovutusohjelmiin.

Äskettäin Li et ai. (2010) osoittivat, että vastasyntyneiden hiiren munasarjafragmenttien inkubointi fosfataasin inhibiittorin kanssa, jonka TENsin-homologia oli deletoitu kromosomin 10 (PTEN) fosfataasista, ja PI3K:ta aktivoivan peptidin kanssa, lisäsi Foxo3:n tuman poissulkemista ja ajoi suuria määriä lepotilassa olevia follikuloksia -responsiiviset antralirakkulat. Lisäksi nude-hiirimallissa (hiirillä, joilla ei ole immuunijärjestelmää) he osoittivat, että siirretyt ihmisen munasarjafragmentit, jotka sisälsivät pääasiassa alkukantarakkuloita kirurgisista näytteistä, joita käsiteltiin samalla inkubaatiolla, myös aktivoituivat lepotilassa olevien munarakkuloiden muodostamiseksi kypsiä munasoluja sisältävien preovulatoristen follikkelien saamiseksi.

Kaiken edellä esitetyn perusteella oletamme, että perimenopausaalisten naisten munasarjat voitaisiin saada FSH-responsiivisiksi käyttämällä inkubaatiota PTEN-estäjän ja PI3K-aktivoivan peptidin kanssa aktivoimaan lepotilassa olevia alkurakkuloita.

Jos tämä tekniikka todetaan mahdolliseksi, se voisi tarjota toivoa hedelmällisyyden saavuttamisesta potilaille, jotka muutoin ohjattaisiin vastaanottamaan munasolujen luovutusta.

Ehdotetun tutkimuksen tarkoitus Saada munasarjojen aivokuoren fragmentteja perimenopausaalisista potilaista, joille tehdään gynekologinen leikkaus, ja testata, saako hoito PTEN-fosfataasilla ja PI3K-aktivoivalla peptidillä nämä fragmentit tuottamaan FSH-herkkiä follikkeleja nude-hiirimallissa.

Tutkittavat ja näytteenotto Jopa kymmenen yli 45-vuotiasta naista, joille on määrä gynekologiseen leikkaukseen, pyydetään toimittamaan puolet munasarjasta tutkimukseen. Kudos leikataan sitten useiksi fragmenteiksi, jotka sopivat kylmäsäilytykseen.

Laboratoriomenetelmät Munasarjafragmenttien kylmäsäilytys käyttää lasitusprotokollaa, joka on samanlainen kuin aikaisempi raportti munasolujen kryosäilytyksestä (Yoon et al. 2003). Koska kryosäilöntäreagenssit voivat tunkeutua helposti alkurakkuloihin verrattuna suuriin munasoluihin, odotamme näiden follikkelien tehokasta säilymistä. Nuorilla potilailla yksi 1 mm:n kortikaalinen kuutio sisältää ~50 alkurakkulaa.

Kolme kudosnäytettä kustakin potilaasta siirretään Hsueh-laboratorioon Stanfordissa (liitteenä oleva kirje), ja ne sulatetaan in vitro -aktivointia varten, minkä jälkeen suoritetaan ksenotransplantaatio käyttäen samaa protokollaa kuin Li et ai. tuosta laboratoriosta. (Li et al. 2010). In vitro -inkubointi tapahtuu bpV(pic):ssä (Calbiochem), joka on PTEN-inhibiittori, joka mahdollistaa lepotilassa olevien follikkelien aktivoinnin. ja solua läpäisevä fosfopeptidi (740Y-P) (Tocris), joka kykenee sitoutumaan PI3K:n p85-säätelyalayksikön SH2-domeeniin stimuloimaan entsyymiaktiivisuutta. Aktivoitu PI3K muuttaa fosfatidyyli-inositoli(4,5)-bisfosfaatin (PIP2) fosfatidyyli-inositoli(3-5)-trifosfaatiksi (PIP3), kun taas PTEN-inhibiittori estää PIP3:n muuttumisen takaisin PIP2:ksi. Kertynyt PIP3 puolestaan ​​voisi stimuloida Akt:n fosforylaatiota ja lisätä transkriptiotekijän Foxo3:n tuman poissulkemista.