Kan vilande perimenopausala äggstocksfolliklar bli FSH-känsliga?

Inledning Kvinnor slutar menstruera vid medelåldern av 51, men graviditeter blir mycket mindre vanliga efter 40, med graviditet vid 43 är en relativ sällsynthet. Nuvarande allmän uppfattning tillskriver regressionen av fertilitet till utarmning av de primordiala folliklarnas pool (Burger et al. 2008). Nedgången i fertilitet kan inte nödvändigtvis bero på en kraftig utarmning av den primordiala follikelpoolen (Hansen et al. 2008) utan kan bero på misslyckande med adekvat övergång från primordiala till antrala, gonadotropinkänsliga folliklar. Det är inte sällan man stöter på en fertilitetspatient i slutet av trettio eller början av fyrtioårsåldern, som inte skulle svara på de mest extrema doserna av exogent FSH, men som ändå kommer att fortsätta att ha mens till 50 års ålder. Vanlig praxis är att hänvisa dessa patienter till oocytdonationsprogram.

Nyligen har Li et al. (2010) visade att inkubation av neonatala äggstocksfragment från mus med en hämmare av fosfataset med TENsin-homologi deleterad i kromosom 10 (PTEN) fosfatas och en PI3K-aktiverande peptid, ökade nukleär uteslutning av Foxo3 och drev fram ett stort antal primordiala follictman -responsiva antralfolliklar. Vidare visade de i nakna mössmodellen (möss som saknar immunsystem) att transplanterade mänskliga äggstocksfragment innehållande huvudsakligen primordiala folliklar från kirurgiska prover, behandlade med samma inkubation, också genomgick aktivering av vilande folliklar för att härleda preovulatoriska folliklar innehållande mogna oocyter.

Baserat på allt ovan antar vi att äggstockar hos kvinnor vid deras perimenopausala år skulle kunna drivas till att bli FSH-känsliga, genom att använda inkubation med PTEN-hämmare och PI3K-aktiverande peptid för att aktivera vilande primordiala folliklar.

Om den befinns genomförbar kan denna teknik ge hopp om att uppnå fertilitet till patienter som annars skulle hänvisas till oocytdonation.

Syfte med den föreslagna studien Att erhålla ovariekortikala fragment från perimenopausala patienter, som genomgår gynekologisk kirurgi, och testa om behandling med PTEN-fosfatas och PI3K-aktiverande peptid skulle inducera dessa fragment att producera FSH-känsliga folliklar i nakenmusmodellen.

Försökspersoner och provskörd Upp till tio kvinnor, äldre än 45 år, som är planerade till gynekologisk operation, kommer att bli ombedda att tillhandahålla hälften av en äggstock för studien. Vävnaden kommer sedan att skäras till flera fragment, lämpliga för kryokonservering.

Laboratoriemetoder Kryokonservering av äggstocksfragment kommer att använda ett vitrifikationsprotokoll som liknar tidigare rapport för kryolagring av oocyter (Yoon et al. 2003). Eftersom kryokonserveringsreagensen lätt kan penetrera primordiala folliklar jämfört med de stora oocyterna, förväntar vi oss ett effektivt bevarande av dessa folliklar. Hos unga patienter innehåller en 1 mm kortikala kuber ~50 primordiala folliklar.

Tre vävnadsprover från varje patient kommer att överföras till Hsueh-laboratoriet i Stanford (bifogat brev) och kommer att tinas för in vitro-aktivering följt av xeno-transplantation med samma protokoll som det som beskrivs av Li et al. från det laboratoriet. (Li et al. 2010). In vitro-inkubationen kommer att ske i bpV(pic) (Calbiochem), en PTEN-hämmare, som möjliggör aktivering av vilande folliklar. och en cellgenomsläpplig fosfopeptid (740Y-P) (Tocris) som kan binda till SH2-domänen i den p85-regulatoriska subenheten av PI3K för att stimulera enzymaktivitet. Aktiverat PI3K omvandlar fosfatidylinositol (4, 5)-bisfosfat (PIP2) till fosfatidylinositol (3-5)-trisfosfat (PIP3), medan PTEN-hämmaren förhindrar omvandlingen av PIP3 tillbaka till PIP2. Ackumulerad PIP3 kan i sin tur stimulera fosforyleringen av Akt och öka den nukleära uteslutningen av transkriptionsfaktorn Foxo3.