Kunnen slapende perimenopauzale ovariumfollikels FSH-responsief worden?

Inleiding Vrouwen stoppen met menstrueren op de gemiddelde leeftijd van 51, maar zwangerschappen komen veel minder vaak voor dan 40, waarbij zwangerschap op 43 een relatieve zeldzaamheid is. De huidige algemene perceptie schrijft de achteruitgang van de vruchtbaarheid toe aan uitputting van de primaire follikelpool (Burger et al. 2008). De afname van de vruchtbaarheid hoeft niet noodzakelijkerwijs het gevolg te zijn van een scherpe uitputting van de primordiale follikelpool (Hansen et al. 2008), maar kan het gevolg zijn van het mislukken van een adequate overgang van primordiale naar antrale, op gonadotropine reagerende follikels. Het komt niet zelden voor dat een vruchtbaarheidspatiënt eind dertig of begin veertig is, die niet reageert op de meest extreme doses exogeen FSH, maar toch blijft menstrueren tot de leeftijd van 50 jaar. De gebruikelijke praktijk is om deze patiënten door te verwijzen naar programma's voor eiceldonatie.

Onlangs hebben Li et al. (2010) toonden aan dat incubatie van neonatale ovariumfragmenten van muizen met een remmer van de fosfatase met TENsin-homologie verwijderd in chromosoom 10 (PTEN) fosfatase en een PI3K-activerend peptide, de nucleaire uitsluiting van Foxo3 verhoogde en grote aantallen slapende oerfollikels ertoe aanzette FSH te worden -responsieve antrale follikels. Bovendien toonden ze in het model van naakte muizen (muizen zonder immuunsysteem) aan dat getransplanteerde menselijke eierstokfragmenten die voornamelijk primordiale follikels bevatten van chirurgische monsters, behandeld door dezelfde incubatie, ook activering van slapende follikels ondergingen om preovulatoire follikels met rijpe oöcyten af ​​te leiden.

Op basis van al het bovenstaande veronderstellen we dat eierstokken van vrouwen in hun perimenopauzale jaren kunnen worden voortgestuwd om FSH-responsief te worden, met behulp van incubatie met PTEN-remmer en PI3K-activerend peptide om slapende oerfollikels te activeren.

Indien haalbaar bevonden, zou deze techniek hoop op het bereiken van vruchtbaarheid kunnen bieden aan patiënten die anders zouden worden doorverwezen voor eiceldonatie.

Doel van de voorgestelde studie Ovariële corticale fragmenten verkrijgen van perimenopauzale patiënten die gynaecologische chirurgie ondergaan, en testen of behandeling met PTEN-fosfatase en PI3K-activerend peptide deze fragmenten zou aanzetten tot het produceren van op FSH reagerende follikels in het naakte muismodel.

Onderzoeksonderwerpen en specimenoogst Maximaal tien vrouwen, ouder dan 45 jaar, die een gynaecologische operatie moeten ondergaan, zullen worden gevraagd om de helft van een eierstok voor het onderzoek te leveren. Het weefsel wordt vervolgens in meerdere fragmenten gesneden, geschikt voor cryopreservatie.

Laboratoriummethoden Cryopreservatie van ovariumfragmenten zal een vitrificatieprotocol gebruiken dat vergelijkbaar is met eerder rapport voor cryo-opslag van oöcyten (Yoon et al. 2003). Omdat de cryoconserveringsreagentia gemakkelijk de primordiale follikels kunnen binnendringen in vergelijking met de grote oöcyten, verwachten we een efficiënte bewaring van deze follikels. Bij jonge patiënten bevat één corticale kubus van 1 mm ongeveer 50 primordiale follikels.

Drie weefselmonsters van elke patiënt zullen worden overgebracht naar het Hsueh-laboratorium in Stanford (bijgevoegde brief), en zullen worden ontdooid voor in vitro activering gevolgd door xenotransplantatie volgens hetzelfde protocol als beschreven door Li et al. uit dat laboratorium. (Li et al. 2010). De in vitro incubatie vindt plaats in bpV(pic) (Calbiochem), een PTEN-remmer die de activering van slapende follikels mogelijk maakt. en een cel-permeabel fosfo-peptide (740Y-P) (Tocris) dat in staat is te binden aan het SH2-domein van de regulerende p85-subeenheid van PI3K om enzymactiviteit te stimuleren. Geactiveerde PI3K zet fosfatidylinositol (4, 5)-bisfosfaat (PIP2) om in fosfatidylinositol (3-5)-trifosfaat (PIP3), terwijl de PTEN-remmer de omzetting van PIP3 terug naar PIP2 voorkomt. Geaccumuleerde PIP3 zou op zijn beurt de fosforylering van Akt kunnen stimuleren en de nucleaire uitsluiting van de transcriptiefactor Foxo3 kunnen vergroten.