Kan sovende perimenopausale ovariefollikler blive FSH-responsive?

Introduktion Kvinder stopper med at menstruere i gennemsnitsalderen på 51 år, men graviditeter bliver meget mindre udbredte efter 40, hvor graviditet ved 43 er en relativ sjældenhed. Den nuværende almindelige opfattelse tilskriver regressionen af ​​fertilitet til udtømning af de primordiale folliklers pool (Burger et al. 2008). Faldet i fertilitet kan ikke nødvendigvis skyldes en kraftig udtømning af den primordiale follikelpulje (Hansen et al. 2008), men kan skyldes svigt af tilstrækkelig overgang fra primordiale til antrale, gonadotropin-responsive follikler. Det er ikke sjældent at støde på en fertilitetspatient i slutningen af ​​30'erne eller begyndelsen af ​​40'erne, som ikke ville reagere på de mest ekstreme doser af eksogent FSH, men som alligevel vil fortsætte med at menstruere indtil 50 års alderen. Den sædvanlige praksis er at henvise disse patienter til oocytdonationsprogrammer.

For nylig har Li et al. (2010) viste, at inkubation af neonatale museovariefragmenter med en inhibitor af fosfatasen med TENsin-homologi deleteret i kromosom 10 (PTEN) fosfatase og et PI3K-aktiverende peptid, øgede nuklear udelukkelse af Foxo3 og drev et stort antal primordiale follictler ind i FSH. -responsive antralfollikler. Ydermere viste de i nøgne musemodellen (mus mangler immunsystem), at transplanterede humane ovariefragmenter indeholdende hovedsageligt primordiale follikler fra kirurgiske prøver, behandlet med samme inkubation, også undergik aktivering af hvilende follikler for at udlede præovulatoriske follikler indeholdende modne oocytter.

Baseret på alt ovenstående antager vi, at æggestokke hos kvinder i deres perimenopausale år kunne drives til at blive FSH-responsive ved at bruge inkubation med PTEN-hæmmer og PI3K-aktiverende peptid til at aktivere sovende primordiale follikler.

Hvis den findes gennemførlig, kan denne teknik give håb om at opnå fertilitet til patienter, som ellers ville blive henvist til at modtage oocytdonation.

Formålet med den foreslåede undersøgelse At opnå ovariekortikale fragmenter fra perimenopausale patienter, som gennemgår gynækologisk kirurgi, og teste om behandling med PTEN-phosphatase og PI3K-aktiverende peptid ville inducere disse fragmenter til at producere FSH-responsive follikler i nøgenmusemodellen.

Undersøgelsespersoner og prøvehøst. Op til ti kvinder, ældre end 45 år, som er planlagt til gynækologisk operation, vil blive bedt om at give halvdelen af ​​en æggestok til undersøgelsen. Vævet vil derefter blive skåret til flere fragmenter, egnet til kryokonservering.

Laboratoriemetoder Kryopræservering af ovariefragmenter vil bruge en forglasningsprotokol svarende til tidligere rapport for oocyt-kryo-opbevaring (Yoon et al. 2003). Fordi kryo-konserveringsreagenserne let kan trænge ind i primordiale follikler sammenlignet med de store oocytter, forventer vi effektiv konservering af disse follikler. Hos unge patienter indeholder en 1 mm kortikale kuber ~50 primordiale follikler.

Tre vævsprøver fra hver patient vil blive overført til Hsueh-laboratoriet i Stanford (vedhæftet brev) og vil blive optøet til in vitro-aktivering efterfulgt af xeno-transplantation ved brug af samme protokol som beskrevet af Li et al. fra det laboratorium. (Li et al. 2010). In vitro-inkubationen vil være i bpV(pic) (Calbiochem), en PTEN-hæmmer, som muliggør aktivering af hvilende follikler. og et celle-permeabelt phospho-peptid (740Y-P) (Tocris), der er i stand til at binde til SH2-domænet af den p85-regulatoriske underenhed af PI3K for at stimulere enzymaktivitet. Aktiveret PI3K omdanner phosphatidylinositol (4, 5)-bisphosphat (PIP2) til phosphatidylinositol (3-5)-trisphosphat (PIP3), hvorimod PTEN-hæmmeren forhindrer omdannelsen af ​​PIP3 tilbage til PIP2. Akkumuleret PIP3 kunne til gengæld stimulere phosphoryleringen af ​​Akt og øge den nukleare udelukkelse af transkriptionsfaktoren Foxo3.