Czy uśpione okołomenopauzalne pęcherzyki jajnikowe mogą zareagować na FSH?

Wprowadzenie Kobiety przestają miesiączkować w średnim wieku 51 lat, jednak ciąże stają się znacznie mniej powszechne po 40. roku życia, przy czym ciąża w wieku 43 lat jest względną rzadkością. Obecne powszechne przekonanie przypisuje regres płodności wyczerpaniu puli pierwotnych pęcherzyków (Burger i wsp. 2008). Spadek płodności może wynikać niekoniecznie z gwałtownego wyczerpania puli pierwotnych pęcherzyków (Hansen i wsp. 2008), ale może być spowodowany niepowodzeniem odpowiedniego przejścia od pierwotnych do antralnych, reagujących na gonadotropiny pęcherzyków. Nierzadko spotyka się pacjentkę z zaburzeniami płodności po trzydziestce lub na początku czterdziestki, która nie zareagowałaby na najbardziej ekstremalne dawki egzogennego FSH, ale mimo to będzie miesiączkować do 50 roku życia. Zwykłą praktyką jest kierowanie tych pacjentów do programów dawstwa komórek jajowych.

Ostatnio Li i in. (2010) wykazali, że inkubacja fragmentów jajników noworodków myszy z inhibitorem fosfatazy z usuniętą homologią TENsyny w fosfatazie chromosomu 10 (PTEN) i peptydem aktywującym PI3K zwiększyła wykluczenie jądrowe Foxo3 i spowodowała, że ​​duża liczba uśpionych pierwotnych pęcherzyków przekształciła się w FSH -wrażliwe pęcherzyki antralne Co więcej, w modelu nagich myszy (myszy pozbawione układu odpornościowego) wykazali, że przeszczepione fragmenty ludzkich jajników zawierające głównie pierwotne pęcherzyki z próbek chirurgicznych, poddane tej samej inkubacji, również uległy aktywacji uśpionych pęcherzyków w celu uzyskania pęcherzyków przedowulacyjnych zawierających dojrzałe oocyty.

Na podstawie powyższego stawiamy hipotezę, że jajniki kobiet w wieku okołomenopauzalnym można zmusić do reagowania na FSH, stosując inkubację z inhibitorem PTEN i peptydem aktywującym PI3K w celu aktywacji uśpionych pierwotnych pęcherzyków.

Jeśli okaże się to wykonalne, ta technika może dać nadzieję na osiągnięcie płodności pacjentom, którzy w przeciwnym razie zostaliby skierowani do dawstwa oocytów.

Cel proponowanej pracy Uzyskanie fragmentów kory jajnika od pacjentek w okresie okołomenopauzalnym poddawanych zabiegom ginekologicznym i zbadanie, czy leczenie fosfatazą PTEN i peptydem aktywującym PI3K indukuje te fragmenty do produkcji pęcherzyków reagujących na FSH w modelu nagiej myszy.

Osoby badane i pobieranie próbek Maksymalnie dziesięć kobiet w wieku powyżej 45 lat, które mają zostać poddane operacji ginekologicznej, zostanie poproszone o pobranie połowy jajnika do badań. Tkanka zostanie następnie pocięta na wiele fragmentów, nadających się do kriokonserwacji.

Metody laboratoryjne Kriokonserwacja fragmentów jajników będzie wykorzystywać protokół witryfikacji podobny do wcześniejszego raportu dotyczącego krioprzechowywania oocytów (Yoon i in. 2003). Ponieważ odczynniki do kriokonserwacji mogą łatwo penetrować pierwotne pęcherzyki w porównaniu z dużymi oocytami, przewidujemy skuteczną ochronę tych pęcherzyków. U młodych pacjentów jedna kostka korowa o boku 1 mm zawiera około 50 pierwotnych pęcherzyków.

Trzy próbki tkanek od każdego pacjenta zostaną przeniesione do laboratorium Hsueh w Stanford (załączony list) i zostaną rozmrożone w celu aktywacji in vitro, a następnie ksenotransplantacji przy użyciu tego samego protokołu, który opisali Li i in. z tego laboratorium. (Li i in. 2010). Inkubacja in vitro będzie prowadzona w bpV(pic) (Calbiochem), inhibitorze PTEN, który umożliwia aktywację uśpionych pęcherzyków. oraz przepuszczalny dla komórek fosfopeptyd (740Y-P) (Tocris) zdolny do wiązania się z domeną SH2 podjednostki regulatorowej p85 PI3K w celu stymulowania aktywności enzymu. Aktywowany PI3K przekształca fosfatydyloinozytol (4,5)-bisfosforan (PIP2) w fosfatydyloinozytol (3-5)-trisfosforan (PIP3), podczas gdy inhibitor PTEN zapobiega konwersji PIP3 z powrotem do PIP2. Nagromadzony PIP3 z kolei może stymulować fosforylację Akt i zwiększać wykluczenie jądrowe czynnika transkrypcyjnego Foxo3.