Os folículos ovarianos dormentes na perimenopausa podem se tornar responsivos ao FSH?

Introdução As mulheres param de menstruar na idade média de 51 anos, mas as gestações tornam-se muito menos prevalentes depois dos 40, sendo a gravidez aos 43 anos uma raridade relativa. A percepção comum atual atribui a regressão da fertilidade ao esgotamento do pool de folículos primordiais (Burger et al. 2008). O declínio na fertilidade pode resultar não necessariamente de um esgotamento acentuado do pool de folículos primordiais (Hansen et al. 2008), mas pode ser devido à falha na transição adequada de folículos primordiais para antrais, responsivos a gonadotrofinas. Não é raro encontrar uma paciente de fertilidade no final dos trinta ou início dos quarenta anos, que não responderia às doses mais extremas de FSH exógeno, mas, no entanto, continuará a menstruar até os 50 anos de idade. A prática usual é encaminhar essas pacientes para programas de doação de ovócitos.

Recentemente, Li et al. (2010) demonstraram que a incubação de fragmentos ovarianos de camundongos neonatos com um inibidor da fosfatase com homologia TENsin deletada na fosfatase do cromossomo 10 (PTEN) e um peptídeo ativador de PI3K, aumentou a exclusão nuclear de Foxo3 e impulsionou um grande número de folículos primordiais dormentes a se tornarem FSH Folículos antrais responsivos. Além disso, no modelo de camundongos nus (camundongos sem sistema imunológico), eles mostraram que fragmentos ovarianos humanos transplantados contendo principalmente folículos primordiais de espécimes cirúrgicos, tratados pela mesma incubação, também sofreram ativação de folículos dormentes para derivar folículos pré-ovulatórios contendo oócitos maduros.

Com base em tudo o que foi dito acima, levantamos a hipótese de que os ovários de mulheres em seus anos de perimenopausa podem ser impulsionados a se tornar FSH-responsivos, usando incubação com inibidor de PTEN e peptídeo ativador de PI3K para ativar folículos primordiais dormentes.

Se for viável, esta técnica pode fornecer esperança de alcançar a fertilidade para pacientes que, de outra forma, seriam encaminhadas para receber doação de ovócitos.

Objetivo do estudo proposto Obter fragmentos corticais ovarianos de pacientes na perimenopausa, submetidas a cirurgia ginecológica, e testar se o tratamento com fosfatase PTEN e peptídeo ativador de PI3K induziria esses fragmentos a produzir folículos responsivos ao FSH no modelo de camundongo nu.

Sujeitos do estudo e coleta de espécimes Até dez mulheres, com mais de 45 anos, agendadas para operação ginecológica, serão solicitadas a fornecer metade de um ovário para o estudo. O tecido será então cortado em vários fragmentos, adequados para criopreservação.

Métodos laboratoriais A criopreservação de fragmentos ovarianos usará um protocolo de vitrificação semelhante ao relatório anterior para crio-armazenamento de oócitos (Yoon et al. 2003). Como os reagentes de criopreservação podem penetrar facilmente nos folículos primordiais em comparação com os oócitos grandes, prevemos uma preservação eficiente desses folículos. Em pacientes jovens, um cubo cortical de 1 mm contém aproximadamente 50 folículos primordiais.

Três amostras de tecido de cada paciente serão transferidas para o laboratório Hsueh em Stanford (carta anexa), e serão descongeladas para ativação in vitro seguida de xenotransplante usando o mesmo protocolo descrito por Li et al. daquele laboratório. (Li et al. 2010). A incubação in vitro será em bpV(pic) (Calbiochem), um inibidor de PTEN, que permite a ativação de folículos dormentes. e um fosfopeptídeo permeável à célula (740Y-P) (Tocris) capaz de se ligar ao domínio SH2 da subunidade reguladora p85 de PI3K para estimular a atividade enzimática. PI3K ativado converte fosfatidilinositol (4, 5)-bifosfato (PIP2) em fosfatidilinositol (3-5)-trifosfato (PIP3), enquanto o inibidor de PTEN impede a conversão de PIP3 de volta para PIP2. A PIP3 acumulada, por sua vez, poderia estimular a fosforilação de Akt e aumentar a exclusão nuclear do fator transcricional Foxo3.