Können ruhende perimenopausale Ovarialfollikel auf FSH reagieren?

Einleitung Frauen hören mit der Menstruation im Durchschnittsalter von 51 Jahren auf, Schwangerschaften werden jedoch nach dem 40. Lebensjahr deutlich seltener, wobei eine Schwangerschaft im Alter von 43 Jahren eine relative Seltenheit ist. Die derzeitige allgemeine Auffassung führt den Rückgang der Fruchtbarkeit auf die Erschöpfung des Pools der Urfollikel zurück (Burger et al. 2008). Der Rückgang der Fruchtbarkeit ist möglicherweise nicht unbedingt auf eine starke Erschöpfung des primordialen Follikelpools zurückzuführen (Hansen et al. 2008), sondern kann auf das Scheitern eines angemessenen Übergangs von primordialen zu antralen, auf Gonadotropin reagierenden Follikeln zurückzuführen sein. Es kommt nicht selten vor, dass eine Fruchtbarkeitspatientin in ihren späten Dreißigern oder frühen Vierzigern auf die extremsten Dosen von exogenem FSH nicht anspricht, ihre Menstruation aber dennoch bis zum Alter von 50 Jahren fortsetzt. Die übliche Praxis besteht darin, diese Patientinnen an Eizellenspendeprogramme zu überweisen.

Kürzlich haben Li et al. (2010) zeigten, dass die Inkubation neonataler Eierstockfragmente von Mäusen mit einem Inhibitor der Phosphatase mit TENsin-Homologie, die in der Phosphatase von Chromosom 10 (PTEN) deletiert ist, und einem PI3K-aktivierenden Peptid den nuklearen Ausschluss von Foxo3 erhöhte und dazu führte, dass eine große Anzahl ruhender Urfollikel zu FSH wurde -reagierende Antrumfollikel. Darüber hinaus zeigten sie im Nacktmäusemodell (Mäuse ohne Immunsystem), dass transplantierte menschliche Eierstockfragmente, die hauptsächlich primordiale Follikel aus chirurgischen Proben enthielten und mit der gleichen Inkubation behandelt wurden, ebenfalls eine Aktivierung ruhender Follikel erfuhren, um präovulatorische Follikel mit reifen Eizellen abzuleiten.

Basierend auf all dem oben Gesagten nehmen wir an, dass die Eierstöcke von Frauen in ihren perimenopausalen Jahren durch die Inkubation mit PTEN-Inhibitor und PI3K-aktivierendem Peptid zur Aktivierung ruhender primordialer Follikel auf FSH reagieren könnten.

Wenn sich diese Technik als machbar erweist, könnte sie Hoffnung auf die Erreichung der Fruchtbarkeit bei Patientinnen geben, die andernfalls zur Eizellenspende überwiesen würden.

Ziel der vorgeschlagenen Studie ist es, Fragmente der Eierstockrinde von perimenopausalen Patientinnen zu erhalten, die sich einer gynäkologischen Operation unterziehen, und zu testen, ob eine Behandlung mit PTEN-Phosphatase und PI3K-aktivierendem Peptid diese Fragmente dazu veranlassen würde, im Nacktmausmodell auf FSH reagierende Follikel zu produzieren.

Studienteilnehmer und Probenentnahme Bis zu zehn Frauen, die älter als 45 Jahre sind und bei denen eine gynäkologische Operation geplant ist, werden gebeten, für die Studie die Hälfte eines Eierstocks zur Verfügung zu stellen. Das Gewebe wird dann in mehrere Fragmente geschnitten, die für die Kryokonservierung geeignet sind.

Labormethoden Bei der Kryokonservierung von Eierstockfragmenten wird ein Vitrifikationsprotokoll verwendet, das dem früheren Bericht zur Kryolagerung von Eizellen ähnelt (Yoon et al. 2003). Da die Kryokonservierungsreagenzien im Vergleich zu großen Eizellen leichter in Urfollikel eindringen können, gehen wir von einer effizienten Konservierung dieser Follikel aus. Bei jungen Patienten enthält ein 1 mm großer Kortikaliswürfel etwa 50 Urfollikel.

Drei Gewebeproben von jedem Patienten werden in das Hsueh-Labor in Stanford überführt (beigefügter Brief) und zur In-vitro-Aktivierung aufgetaut, gefolgt von einer Xenotransplantation unter Verwendung des gleichen Protokolls, das von Li et al. beschrieben wurde. aus diesem Labor. (Li et al. 2010). Die In-vitro-Inkubation erfolgt in bpV(pic) (Calbiochem), einem PTEN-Inhibitor, der die Aktivierung ruhender Follikel ermöglicht. und ein zelldurchlässiges Phosphopeptid (740Y-P) (Tocris), das an die SH2-Domäne der p85-Regulationsuntereinheit von PI3K binden kann, um die Enzymaktivität zu stimulieren. Aktiviertes PI3K wandelt Phosphatidylinositol (4, 5)-bisphosphat (PIP2) in Phosphatidylinositol (3-5)-trisphosphat (PIP3) um, während der PTEN-Inhibitor die Umwandlung von PIP3 zurück in PIP2 verhindert. Angesammeltes PIP3 könnte wiederum die Phosphorylierung von Akt stimulieren und den nuklearen Ausschluss des Transkriptionsfaktors Foxo3 erhöhen.