休止期の閉経周辺期の卵胞はFSH反応性になる可能性がありますか?

はじめに 女性は平均 51 歳で月経を停止しますが、40 歳を超えると妊娠の頻度は大幅に低下し、43 歳での妊娠は比較的まれです。 現在の一般的な認識は、生殖能力の退行は原始卵胞プールの枯渇によるものであると考えられています (Burger et al. 2008)。 生殖能力の低下は、必ずしも原始卵胞プールの急激な減少に起因するわけではなく(Hansen et al. 2008)、原始卵胞から性腺刺激ホルモン反応性の胞状卵胞への適切な移行の失敗が原因である可能性があります。 30 代後半または 40 代前半で、最も極端な用量の外因性 FSH には反応しないが、それでも 50 歳まで月経が続く不妊患者に遭遇することは珍しくありません。 通常は、これらの患者に卵子提供プログラムを紹介します。

最近、Li ら。 (2010) 新生児マウス卵巣フラグメントを、10 番染色体で TENsin 相同性が欠失したホスファターゼ阻害剤 (PTEN) および PI3K 活性化ペプチドとインキュベートすると、Foxo3 の核排除が増加し、多数の休眠中の原始卵胞が FSH になるよう推進されることを実証しました。 -反応性の胞状毛包。 さらに、ヌードマウスモデル（免疫系を欠くマウス）では、同じ培養で処理した外科標本からの主に原始卵胞を含むヒト卵巣断片を移植すると、休眠卵胞も活性化されて、成熟卵母細胞を含む排卵前卵胞が誘導されることが示された。

上記すべてに基づいて、我々は、PTEN阻害剤およびPI3K活性化ペプチドとインキュベートして休眠中の原始卵胞を活性化することにより、閉経周辺期の女性の卵巣がFSH応答性になるように促進される可能性があると仮説を立てます。

この技術が実現可能であれば、卵子提供を受けるよう紹介されるであろう患者に妊孕性を達成する希望を与えることができるだろう。

提案された研究の目的 婦人科手術を受ける閉経周辺期の患者から卵巣皮質断片を取得し、PTEN ホスファターゼと PI3K 活性化ペプチドによる治療がこれらの断片の FSH 応答性卵胞の生成をヌードマウス モデルで誘導するかどうかをテストすること。

研究対象と標本採取 婦人科手術を予定している最大10人の45歳以上の女性が、研究のために卵巣の半分を提供するよう求められる。 その後、組織は凍結保存に適した複数の断片に切断されます。

実験方法 卵巣断片の凍結保存には、卵母細胞の冷凍保存に関する以前の報告 (Yoon et al. 2003) と同様のガラス化プロトコルが使用されます。 原始卵胞は大きな卵子に比べて凍結保存試薬が浸透しやすいため、効率的な保存が期待できます。 若い患者の場合、1 mm の皮質立方体 1 つに、約 50 個の原始卵胞が含まれています。

各患者からの 3 つの組織サンプルがスタンフォードの Hsueh 研究室 (添付文書) に移送され、インビトロ活性化のために解凍され、続いて Li らによって記載されたものと同じプロトコールを使用して異種移植が行われます。あの研究室から。 (Li et al. 2010)。 インビトロでのインキュベーションは、休眠中の卵胞の活性化を可能にする PTEN 阻害剤である bpV(pic) (Calbiochem) 内で行われます。 細胞透過性リンペプチド (740Y-P) (Tocris) は、PI3K の p85 制御サブユニットの SH2 ドメインに結合して酵素活性を刺激することができます。 活性化された PI3K はホスファチジルイノシトール (4, 5)-二リン酸 (PIP2) をホスファチジルイノシトール (3-5)-三リン酸 (PIP3) に変換しますが、PTEN 阻害剤は PIP3 から PIP2 への変換を防ぎます。 蓄積された PIP3 は、Akt のリン酸化を刺激し、転写因子 Foxo3 の核排除を増加させる可能性があります。