¿Pueden los folículos ováricos perimenopáusicos inactivos volverse sensibles a la FSH?

Introducción Las mujeres dejan de menstruar a la edad promedio de 51 años, sin embargo, los embarazos se vuelven mucho menos frecuentes después de los 40, siendo el embarazo a los 43 años una rareza relativa. La percepción común actual atribuye la regresión de la fertilidad al agotamiento de la reserva de folículos primordiales (Burger et al. 2008). La disminución de la fertilidad puede resultar no necesariamente de un fuerte agotamiento de la reserva de folículos primordiales (Hansen et al. 2008), sino que puede deberse a una falla en la transición adecuada de los folículos primordiales a los antrales, que responden a las gonadotropinas. No es raro encontrarse con una paciente de fertilidad a finales de los treinta o principios de los cuarenta, que no respondería a las dosis más extremas de FSH exógena, pero que, sin embargo, continuará menstruando hasta los 50 años. La práctica habitual es derivar a estas pacientes a programas de donación de ovocitos.

Recientemente, Li et al. (2010) demostraron que la incubación de fragmentos de ovario de ratón neonatal con un inhibidor de la fosfatasa con homología TENsin eliminada en la fosfatasa del cromosoma 10 (PTEN) y un péptido activador de PI3K aumentó la exclusión nuclear de Foxo3 e impulsó a un gran número de folículos primordiales latentes a convertirse en FSH. - Folículos antrales sensibles. Además, en el modelo de ratones desnudos (ratones sin sistema inmunitario) demostraron que los fragmentos de ovario humano trasplantados que contenían principalmente folículos primordiales de especímenes quirúrgicos, tratados con la misma incubación, también sufrieron activación de folículos latentes para derivar folículos preovulatorios que contenían ovocitos maduros.

Con base en todo lo anterior, planteamos la hipótesis de que los ovarios de las mujeres en sus años perimenopáusicos podrían ser impulsados ​​a responder a la FSH, utilizando la incubación con el inhibidor de PTEN y el péptido activador de PI3K para activar los folículos primordiales inactivos.

Si se encuentra factible, esta técnica podría brindar la esperanza de lograr la fertilidad a pacientes que de otro modo serían remitidas para recibir donación de ovocitos.

Objetivo del estudio propuesto Obtener fragmentos corticales ováricos de pacientes perimenopáusicas, que se someten a cirugía ginecológica, y probar si el tratamiento con PTEN fosfatasa y péptido activador PI3K induciría estos fragmentos a producir folículos sensibles a FSH en el modelo de ratón desnudo.

Sujetos de estudio y recolección de especímenes Se solicitará hasta diez mujeres, mayores de 45 años, programadas para una operación ginecológica, que proporcionen la mitad de un ovario para el estudio. Luego, el tejido se cortará en múltiples fragmentos, adecuados para la crioconservación.

Métodos de laboratorio La crioconservación de fragmentos de ovario utilizará un protocolo de vitrificación similar al informe anterior para el crioalmacenamiento de ovocitos (Yoon et al. 2003). Debido a que los reactivos de crioconservación pueden penetrar fácilmente en los folículos primordiales en comparación con los ovocitos grandes, anticipamos una conservación eficiente de estos folículos. En pacientes jóvenes, un cubo cortical de 1 mm contiene ~50 folículos primordiales.

Se transferirán tres muestras de tejido de cada paciente al laboratorio Hsueh en Stanford (carta adjunta), y se descongelarán para la activación in vitro seguida de xenotrasplante utilizando el mismo protocolo que el descrito por Li et al. de ese laboratorio. (Li et al. 2010). La incubación in vitro será en bpV(pic) (Calbiochem), un inhibidor de PTEN, que permite la activación de folículos latentes. y un fosfopéptido permeable a las células (740Y-P) (Tocris) capaz de unirse al dominio SH2 de la subunidad reguladora p85 de PI3K para estimular la actividad enzimática. La PI3K activada convierte el fosfatidilinositol (4, 5)-bifosfato (PIP2) en fosfatidilinositol (3-5)-trifosfato (PIP3), mientras que el inhibidor de PTEN evita la conversión de PIP3 nuevamente a PIP2. La PIP3 acumulada, a su vez, podría estimular la fosforilación de Akt y aumentar la exclusión nuclear del factor transcripcional Foxo3.